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百日咳毒素、丝状血凝素和百日咳黏附素精制抗原纯度的SDS-PAGE检测方法的验证: 2024年; 目的采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)方法检测百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)和百日咳黏附素(pertactin,PRN)精制抗原纯度,并进行验证。方法对样品进行SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝染色后,使用凝胶成像系统拍照并用Image Lab软件进行分析,获得样品各蛋白条带的光密度值。对建立的方法进行系统适用性、线性、准确度、重复性、中间精密度、灵敏度和耐用性验证。结果对应2套分子量标准蛋白,PT、FHA和PRN精制抗原分别在10.00~50.00μg/mL的低质量浓度范围和50.00~600.00μg/mL的高质量浓度范围内,蛋白浓度和对应条带光密度值之间具有良好的线性关系,相关系数(coefficient of correlation,r)≥0.99。3种精制抗原杂质水平准确度和重复性回收率均在80%~120%,且重复性验证相对标准差(relative standard deviation,RSD)≤10%;抗原水平准确度和重复性回收率均在90%~110%,重复性验证RSD≤10%;灵敏度12.50μg/mL的回收率均在80%~120%,RSD≤10%;中间精密度验证RSD≤10%。结论建立的测定PT、FHA和PRN精制抗原纯度的SDS-PAGE法,其系统适用性、准确度、重复性、中间精密度和灵敏度均良好,可用于以上精制抗原的纯度检测。; 陈丝丝夏芙蓉於洋何鹏王玲张娜赵芳圆范天一李世慧; 关键词：百日咳毒素丝状血凝素 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

百日咳毒素、丝状血凝素、百日咳黏附素抗体间接ELISA检测方法的建立、验证及初步应用: 2024年; 目的建立小鼠血清中百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)及百日咳黏附素(pertussis adhesin,PRN)抗体间接ELISA定量检测方法,并进行验证及初步应用,为百日咳疫苗生产工艺的优化提供参考。方法分别用PT、FHA及PRN抗原包被酶标板,加入百日咳抗小鼠血清标准品及待测小鼠血清,以HRP标记的山羊抗鼠IgG作为酶标二抗,通过TMB显色的指示程度定量检测小鼠血清中PT、FHA、PRN抗体含量。对建立的间接ELISA检测方法进行专属性、线性范围、准确性、精密性进行验证。采用建立的方法对百日咳疫苗及效价合格的内部参比品免疫小鼠血清进行检测。结果采用PT、FHA、PRN抗体ELISA方法检测百日咳抗小鼠血清标准品及待测样品的结果为阳性,其余样本检测结果均为阴性。PT抗体ELISA检测方法的线性范围为0.0053~0.17 U/mL,回收率为90.91%~104.77%,重复性验证RSD为6.31%,人员间RSD为6.40%;FHA抗体ELISA检测方法的线性范围为0.0223~1.43 U/mL,回收率为95.84%~102.18%,重复性验证RSD为9.02%,人员间RSD为5.79%;PRN抗体ELISA检测方法的线性范围为0.0094~0.3 U/mL,回收率为86.27%~100.22%,重复性验证RSD为6.94%,人员间RSD为8.90%。采用建立的方法检测百日咳疫苗样品及效价合格的内部参比品免疫小鼠血清,6组样品PT抗体水平明显高于内部参比品,FHA、PRN抗体水平与内部参比品相当。结论建立的各抗体ELISA检测方法专属性强,线性相关性良好(R2>0.99),准确性高,精密性良好,可用于小鼠血清中百日咳(PT、FHA、PRN)抗体的定量检测,为百日咳疫苗生产工艺的优化提供了参考。; 孙博何小曼江涛谷铁军谷铁军姜恬馨李吉王梦舒刘大维毕楠

Lowry法检测百日咳抗原中百日咳毒素、丝状血凝素、黏附素含量方法验证: 2024年; 目的对Lowry法2检测百日咳抗原中百日咳毒素(pertussis toxin, PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin, FHA)、黏附素(pertactin, Prn)含量进行方法学验证。方法将PT、FHA、Prn国家标准品系列稀释, 在0~50 μg/ml浓度范围内建立标准曲线。在已知浓度的PT、FHA、Prn精制液中加入国家标准品配制加标样品, 采用Lowry法2检测蛋白含量, 考察准确度和精密度。对原液生产中使用的400 mmol/L PBS进行专属性试验。分别在检测后10、20、30 min再进行检测以考察方法的耐用性。结果回收率介于91.1%~110.7%;准确度相对标准偏差为1.8%~9.2%, 批间精密度相对标准偏差为2.6%~6.2%;400 mmol/L PBS对样品测定无干扰;检测样品在30 min内读取数据有效。结论该法具有良好的线性、准确性、精密性、专属性和耐用性, 可用于百日咳抗原中PT、FHA、Prn含量的测定。; 邢盛宇邓海清季庚辰张艳红张钰东王宇吴晗尹珊珊; 关键词：百日咳菌苗蛋白检测

百日咳毒素和丝状血凝素抗原ELISA检测方法建立及验证: 百日咳是一种危及婴幼儿和成人生命安全的急性传染病,它通过感冒、咳嗽、打喷嚏等方式进入人体,对婴幼儿和成年人的生命安全构成了极大的挑战。起初,人类只能通过抗生素类药物进行对症治疗,却无法实现预防的目的。随着抗生素类药物耐药...; 魏国良; 关键词：百日咳 ELISA 抗原

国产层析填料在百日咳毒素和丝状血凝素纯化中的筛选及应用: 2023年; 目的筛选适合的国产层析填料以满足对组分百日咳疫苗中百日咳毒素(pertussis toxin,PT)与丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)的分离纯化。方法筛选对PT与FHA结合能力较好且分离度高的国产层析填料,优化纯化工艺,通过3批纯化试验比较国产填料与进口填料的抗原回收率、目的抗原纯度以及对目的抗原的动态结合载量。结果通过纯化试验筛选到国产填料SP resin-1与MMC resin-1并优化了纯化工艺。3批纯化试验显示,SP resin-1纯化百日咳抗原工艺稳定,FHA的纯度和回收率与Capto SP ImpRes差异无统计学意义(P>0.05);且与Capto SP ImpRes相比,SP resin-1对抗原的动态结合载量更高。3批PT精纯试验显示,国产填料MMC resin-1精纯PT的工艺稳定,PT的纯度和回收率均与Capto MMC差异无统计学意义(P>0.05),并且MMC resin-1对PT的载量高于Capto MMC。结论试验筛选出纯化PT与FHA的国产填料SP resin-1与MMC resin-1,纯化结果稳定,且纯化的抗原回收率与抗原纯度非劣效于进口填料。; 付慧王玲张娜赵芳圆何鹏李世慧; 关键词：百日咳毒素丝状血凝素

一种百日咳丝状血凝素融合蛋白及其应用: 本发明涉及一种百日咳丝状血凝素融合蛋白及其应用，所述融合蛋白以百日咳FHA氨基酸残基1877‑2250片段和StxB通过肽链连接构成，并以融合蛋白来构建亚单位疫苗，并在大肠杆菌中成功诱导表达，通过Western‑blot...; 王恒樑朱力潘超刘兆禄吴军孙鹏王斌曾明冯尔玲

贵州省儿童百日咳疫苗全程免疫1年后百日咳丝状血凝素IgG抗体水平的时间变化特征: 2022年; 目的探讨儿童百日咳疫苗全程免疫1年后百日咳丝状血凝素IgG(FHA-IgG)抗体水平随时间的变化。方法于2019-2020年在贵州省27个监测县区选取全程接种4剂次百日咳疫苗1年后的≤7岁儿童,采集血清标本,采用酶联免疫吸附试验测定FHA-IgG抗体,分析抗体浓度≥20IU/mL和≥80IU/mL的率。应用限制性立方样条(RCS)拟合二元Logistic回归模型,分析FHA-IgG抗体水平的比值比(OR)随免疫后时间变化。结果在11 270名儿童中,百日咳FHA-IgG抗体浓度≥20IU/mL和≥80IU/mL的率分别为18.31%(2 064名)和2.61%(294名)。RCS拟合模型显示,儿童百日咳疫苗4剂次免疫1年后FHA-IgG抗体浓度≥20IU/mL的OR呈逐渐上升线性趋势(总体Wald χ^(2)=98.76,P<0.001;非线性Wald χ^(2)=8.02,P=0.091),抗体浓度≥80IU/mL的OR呈波动性上升线性趋势(总体Wald χ^(2)=69.24,P<0.001;非线性Wald χ^(2)=5.14,P=0.399)。结论儿童百日咳疫苗全程免疫1年后百日咳FHA-IgG抗体水平随时间推移呈上升趋势,提示儿童百日咳感染风险逐渐上升,部分儿童可能存在急性或近期感染。; 郭俊利汪俊华龙秀娟潘俊龙; 关键词：百日咳 IGG抗体儿童

去除无细胞百日咳疫苗丝状血凝素纯化液中内毒素TritonX-114液相分离法的建立及其效果评价被引量：1: 2022年; 目的建立去除无细胞百日咳疫苗丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)纯化液中内毒素的TritonX-114液相分离法,并评价其效果。方法以影响TritonX-114液相分离法效果的TritonX-114加入量、4℃混匀时间、37℃分层时间、25℃16743×g离心时间为试验因素,每个因素设计3个水平,通过正交试验设计12组试验。每组试验获得的样品均检测蛋白回收率,以蛋白回收率最高的条件为最佳。采用最佳条件去除3批无细胞百日咳疫苗FHA纯化液内毒素,检测FHA蛋白含量、内毒素含量及TritonX-114残留量。结果TritonX-114液相分离法最佳条件:TritonX-114加入量为1%,4℃混匀时间为30 min,37℃分层时间为60 min,25℃16743×g离心时间为10 min。最佳条件下去除3批无细胞百日咳疫苗FHA纯化液内毒素后,内毒素含量均<0.25 EU/mL,TritonX-114残留量均值为0.183%,蛋白回收率均值为91.04%。结论TritonX-114液相分离法能够有效去除无细胞百日咳疫苗FHA纯化液中的内毒素,且方法耗时短,操作简便。; 温嘉纳王虓宇张光贤陈林涛张晓华赵宸李娜孙明波梁疆莉; 关键词：百日咳疫苗内毒素丝状血凝素

丝状血凝素检测试剂盒及其应用: 本发明涉及丝状血凝素检测试剂盒及其应用。本发明首先获得了一个抗体效价高达107，亲和常数为3.42×1011M‑1的丝状血凝素(FHA)单克隆抗体，将本发...; 程会欣张立志王治伟王巍巍刘波马国涛

培养条件对百日咳杆菌发酵中百日咳毒素及丝状血凝素表达的影响: 2021年; 目的探讨培养条件对百日咳杆菌发酵中百日咳毒素(pertussis toxin,PT)和丝状血凝素(filamentous haemagglutinin,FHA)表达的影响。方法采用300 L全自动发酵罐进行百日咳杆菌发酵培养,培养基为百日咳S-S培养基,搅拌通气培养,培养量200 L,温度3537℃,培养时间40 h,接种比例1∶121∶15。试验分为高PT表达组(搅拌转速为160 r/min,搅拌叶片为直叶,有挡板,培养020及2140 h的通气量分别为600和400 L/min)、高FHA表达组(搅拌转速为220 r/min,搅拌叶片为弯叶,无挡板,培养020及2140 h的通气量分别为400和600 L/min)及对照组(搅拌转速为180 r/min,搅拌叶片为直叶,有挡板,通气量为500 L/min),每组平行培养3批培养物。于培养结束时采用ELISA法检测PT及FHA含量。结果高PT表达组PT含量平均值达3.16μg/mL,比对照组(平均值2.23μg/m L)提升了41.7%(P<0.05);高FHA表达组FHA含量平均值达21.37μg/mL,比对照组(平均值11.00μg/mL)提升了94.3%(P<0.05)。结论百日咳发酵工艺中,高搅拌剪切力和较低的溶氧水平有利于PT的表达,低剪切力和高溶氧水平有利于提高FHA的产量。; 杨勇吴永超张飞伟杨坤闵宪捷刘佐军雍雪飞刘少祥潘海龙; 关键词：百日咳毒素丝状血凝素百日咳杆菌发酵

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