搜索到421篇“ 乙型肝炎病毒核心启动子“的相关文章
- 一种检测乙型肝炎病毒核心启动子区nt1758-1777缺失突变新方法的建立被引量：1
- 2016年
- 目的建立一种新的单管巢式实时荧光PCR熔解曲线法用于快速灵敏地筛检临床乙型肝炎病毒(HBV)样本核心启动子区nt1758-1777片段缺失突变。方法通过比对分析Gen Bank收录的HBV基因序列,设计通用巢式PCR引物,建立优化方法体系;对340例慢性乙型肝炎患者血清HBV CP区进行扩增,产物直接测序,并随机选择50例样本进行克隆测序,分析nt1758-1777缺失突变检出率。野生型和缺失型标准质粒来自于单克隆测序样本,并对两种标准质粒及克隆检测样本进行荧光定量PCR扩增,获得熔解曲线及熔解温度,得到熔解曲线的阳性标准。用新建立的方法对340份样本进行检测,并用焦磷酸测序加以验证。结果直接测序法检出16例(4.7%)阳性样本。标准质粒及克隆检测样本中缺失序列比例≥15%的样品,其熔解温度(Tm)≥88.3℃,遂将≥88.3℃作为新方法的阳性标准。用新方法检出47例(13.8%)阳性样本,其中用焦磷酸测序验证缺失突变比例≥1.0%的样本38例,<1.0%的样本9例;15份阴性样本缺失突变比例均<1.0%。用焦磷酸测序验证缺失突变比例1.0%作为阳性阈值,新方法对nt1758-1777缺失检测的阳性符合率为80.9%,阴性符合率为100%,两种方法的一致性Kappa值为0.671。结论与直接测序法相比,新方法可显著提高nt1758-1777缺失检出率,结合焦磷酸测序证实,可有效提高检测的准确性和经济性。该方法对建立HBV其他缺失突变的检测方法也可提供借鉴。
- 粘学渊许智慧刘妍李晓东陈建宏秦雅群廖昊徐东平
- 关键词：乙型肝炎病毒核心启动子熔解曲线焦磷酸测序
- 乙型肝炎病毒核心启动子区核苷酸G1613A和C1653T变异的临床意义
- 2016年
- 目的评价HBV G1613A和C1653T变异对乙型肝炎患者疾病进展、病毒体外复制力及核心启动子(CP)转录活性的影响。方法共纳入258例研究对象,包括65例急性乙型肝炎(AHB)患者,120例慢性乙型肝炎(CHB)患者和73例慢加急性肝衰竭(ACLF)患者。从患者血清中提取HBV DNA,PCR扩增HBV DNA全长基因组,统计G1613A、C 1 6 5 3 T和G 1 6 1 3 A+C 1 6 5 3 T变异的发生率。构建相应载体进行体外功能实验,观察病毒质粒转染He p G 2细胞后对病毒复制力及其CP转录活性的影响。结果 258例患者中共检出B、C、D三种基因型,其检出率分别是22.2%、76.2%和1.6%。G1613A、C1653T及G1613A+C1653T变异发生率随疾病程度加重依次升高。AHB、CHB和ACLF患者上述3种变异的检出率分别为13.70%、31.80%和45.20%(P<0.01),2.30%、16.30%和27.40%(P<0.01),2.29%、12.07%和23.29%(P<0.05)。与野生株相比,G1613A变异株复制力升高6%,HBs Ag降低15%,HBe Ag表达呈阴性,CP转录活性降低16.2%;C1653T变异株复制力升高10%,HBs Ag升高55%,HBe Ag与野生株接近,CP转录活性升高17.1%;G 1 6 1 3 A+C 1 6 5 3 T变异株复制力升高7%,H B s A g升高6 6%,H B e A g升高2 2 7%,但对CP转录活性没有影响。结论 G1613A、C1653T在CP区的变异可增加HBV复制力,影响CP转录活性和HBV抗原的表达,G1613A+C1653T联合变异可能对这些功能产生协同作用,推测这三种变异与乙肝重症化发生机制相关。
- 黄鹏宇许智慧刘妍李晓东廖昊粘学渊刘新光欧超伟徐东平
- 关键词：乙型肝炎病毒肝功能衰竭
- 乙型肝炎病毒核心启动子区核苷酸G1613A和C1653T变异的临床意义研究
- 黄鹏宇
- 乙型肝炎病毒核心启动子区缺失突变的研究进展
- 2013年
- 已知乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）核心启动子（core promoter,CP）负责指导前基因组RNA（pregenomic RNA,pgRNA）和前核心/核心蛋白（precore/core protein,preC/C蛋白）mRNA转录,在HBV复制及形态形成过程中起关键作用[1]。CP区突变可影响HBV的复制及转录,并与肝病进展密切相关。目前国内外工作主要集中于研究A1762T/G1764A等点突变与e抗原表达及其血清学转换、肝病进展等的相关性,关于该区缺失突变的特点及其对HBV和宿主的影响等尚缺乏充分认识。
- 彭雅琴李彤庄辉
- 关键词：乙型肝炎病毒核心启动子缺失突变
- 肝细胞癌患者肝癌组织中乙型肝炎病毒核心启动子变异分析被引量：1
- 2013年
- 目的深入了解乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)核心启动子(core promoter,CP)变异在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者肝癌组织标本中的发生情况。方法分别对北京佑安医院52例肝细胞癌患者,45例肝硬化(cirrhosis of liver,LC)和25例慢性乙肝(chronic hepatitis B,CH)患者肝组织标本中HBV前C区和CP区进行克隆测序,对核心启动子变异情况进行统计分析。结果与慢性乙型肝炎和肝硬化比较,G1613A、A1727C、A1762T、G1764A和1896A突变比例在肝细胞癌患者中更高(P<0.05)。肝细胞癌组中核心启动子不同调控区的突变发生率显著高于慢性乙肝和肝硬化组(P<0.05)。结论从组织学角度进一步支持肝细胞癌组中核心启动子区突变的高流行率,特别是A1762T/G1764A双突变可以作为肝细胞癌发生的预测指标,其他突变位点对于病毒复制、转录以及肝细胞癌发生的作用,有待进一步研究确证。
- 魏飞力石英李庆柳雅立陈杰陈德喜吴昊
- 关键词：乙型肝炎病毒核心启动子肝组织
- 乙型肝炎病毒核心启动子的克隆及其组织特异性的鉴定
- 2010年
- 目的克隆adr亚型乙型肝炎病毒核心启动子(core promoter,Cp)并鉴定其在肝细胞系的特异性表达。方法利用PCR从质粒pUC19/3HBV扩增adr亚型乙肝病毒核心启动子,并将其克隆入T载体pMD19-T Simple中。测序正确后再亚克隆入pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体。将重组载体pGL3-Basic/Cp分别转染肝癌细胞系HepG2、宫颈癌细胞系Hela、绿猴肾细胞系COS-7、乳腺癌细胞系MDA-MB-231和结肠癌细胞系HT-29,通过双荧光素酶检测系统检测荧光素酶在这些不同细胞系中的活性,以确定所克隆的基本核心启动子是否具有肝细胞特异性活性。结果从HBV基因组中成功克隆了Cp,Cp在肝细胞系中具有明显的活性,而在其他组织来源的细胞系中几乎没有活性。结论克隆得到的核心启动子具有明显的肝细胞特异性活性。
- 雷俊川宫卫东赵亚姜河易军
- 关键词：荧光素酶
- 乙型肝炎病毒核心启动子下游克隆入Teto序列后其在不同细胞系中转录活性的变化
- 2010年
- 目的:探讨将Teto序列克隆入乙型肝炎病毒核心启动子(Cp)下游后对该启动子在不同细胞系中转录活性的影响。方法:利用PCR从质粒pTL-8中扩增7个Teto序列,并将其克隆入T载体pMD19-T/Simple中,测序正确后将7个Teto序列亚克隆入pGL3-Basic/Cp萤光素酶报告基因质粒中Cp启动子的下游,以构建质粒pGL3-Basic/Cp/x7t。将能表达TetR的质粒pTL-8的萤光素酶编码基因切除后,与pGL3-Basic/Cp/x7t共转染肝癌细胞系HepG2、宫颈癌细胞系HeLa、绿猴肾细胞系COS-7、乳腺癌细胞系MDA-MB-231和结肠癌细胞系HT-29,通过双萤光素酶检测系统检测萤光素酶在这些不同细胞系中的活性,以分析将Teto序列克隆入乙型肝炎病毒核心启动子下游后对Cp在不同细胞系中转录活性的影响。结果:构建了质粒pGL3-Basic/Cp/x7t,将其转染HeLa、COS-7、HepG2、MDA-MB-231和HT-29细胞后其相对萤光素酶活性分别为56.14、171.52、211.03、6.11和34.24。结论:将Teto序列克隆入Cp下游并不能明显提高Cp的转录活性,而且破坏了Cp的组织特异性转录活性。
- 易军雷俊川宫卫东赵亚姜河刘忠湘王岭
- 关键词：核心启动子乙型肝炎病毒萤光素酶
- 乙型肝炎病毒核心启动子及前C区突变检测基因芯片的制备及临床应用
- 2010年
- 目的 建立检测乙型肝炎病毒核心启动子及前C区突变基因芯片并探讨其临床应用的价值.方法 设计并合成针对核心启动子1762/1764、1814及前C区1896位点突变的特异性探针,制备寡核苷酸芯片.采用不对称PCR对该区域进行扩增,扩增产物与芯片杂交后分析结果,并评价该方法的特异性、灵敏度.采用该方法检测138例HBV DNA阳性血清标本.结果 该方法能够特异地检测乙型肝炎病毒核心启动子1762/1764、1814及前C区1896位点,灵敏度达1×101拷贝/μl.138例HBV DNA阳性血清标本中,T1762/A1764突变40例（28.99%）,C1814突变11例（7.97%）,A1896突变16例（11.59%）.前C区A1896突变在高拷贝组中明显高于低拷贝组（P＜0.01）.结论 本研究建立的基因芯片能够准确同时检测HBVV核心启动子区突变和前C区突变,前C区A1896突变可能与HBV复制状态有关.
- 方丽娟来乐祥乐奕全任玲君
- 关键词：突变寡核苷酸序列分析
- 乙型肝炎病毒核心启动子区突变及其用途
- 本发明属于生物技术领域，公开了检测核酸样品中是否存在乙型肝炎病毒核心启动子区变异的试剂或试剂盒。本发明还公开了体外检测核酸样品中乙型肝炎病毒核心启动子区变异的方法。本发明首次揭示乙型肝炎病毒核心启动子区第1766或176...
- 屠红郭霞金晏钱耕荪曹志刚
- 四环素调控系统对乙型肝炎病毒核心启动子活性及组织特异性的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:分析四环素调控系统对乙型肝炎病毒核心启动子(Cp)活性及组织特异性的影响。方法:利用PCR从质粒pTL-8扩增7个Teto序列,并将其克隆入T载体pMD19-T Simple中。测序正确后将7个Teto序列亚克隆入pGL3-Basic/Cp荧光素酶报告基因质粒中Cp启动子的上游,以构建质粒pGL3-Basic/7t/Cp。将能表达TetR的质粒pTL-8的荧光素酶编码基因切除后,与pGL3-Basic/7t/Cp共转染肝癌细胞系HepG2,宫颈癌细胞系HeLa,绿猴肾细胞系COS-7,乳腺癌细胞系MDA-MB-231和结肠癌细胞系HT-29,通过双荧光素酶检测系统检测荧光素酶在这些不同细胞系中的活性,以鉴定四环素调控系统对Cp活性及组织特异性的影响。结果:成功构建了质粒pGL3-Basic/7t/Cp,将其转染入不同组织来源的细胞系后表明将7个teto序列克隆入Cp上游后增强了Cp在各细胞系中的活性。结论:四环素调控系统明显增强了Cp的转录活性。但同时,Cp失去了其组织特异性的特点,即在这些细胞系中均有较强活性。
- 雷俊川宫卫东赵亚姜河刘忠湘易军
- 关键词：CP荧光素酶
