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一种人牙髓干细胞的培养扩增及制备方法: 本发明公开了一种人牙髓干细胞的培养扩增及制备方法。该技术方案设计了从组织采集到消化分离的细胞提取方法，在此基础上围绕牙髓干细胞的生长特点设计了高效的扩增制备方法。具体来看，本发明首先分离牙冠和牙根组织，将牙根表面的牙龈组...; 胡毓卿魏泽宇魏斯溧

依普黄酮促进人牙髓干细胞增殖和成骨分化被引量：1: 2024年; 目的:初步检测依普黄酮(IP)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)的增殖和成骨向分化的影响。方法:在体外对hDPSCs进行培养鉴定,用含IP(10^(-9)~10^(-5) mol/L)的完全培养液培养hDPSCs,CCK-8法检测不同时间点(1、2、3 d)的细胞活性;用含IP(10-8~10^(-5) mol/L)的矿化诱导液诱导hDPSCs 7 d,通过碱性磷酸酶活性测定、ALP染色、茜素红染色及RT-qPCR检测IP对hDPSCs成骨分化的影响。结果:CCK-8检测结果表明10^(-9)~10^(-5) mol/L IP均可促进hDPSCs增殖,其中10^(-6) mol/L IP组促进增殖效果最佳(P<0.05);10^(-6) mol/L IP组ALP染色加深,ALP活性增高(P<0.05),矿化结节增多(P<0.05);RT-qPCR检测结果显示10^(-6) mol/L IP组能够提高成骨分化相关基因骨钙素(osteocalcin,OCN)、碱性磷酸酶和矮小相关转录基因2的表达水平(P<0.05)。结论:10^(-6) mol/L IP能提高hDPSCs增殖和成骨向分化的能力。; 乐曼妮王小聪黄子璇张慧琳张晓月赵卿李明王基栋; 关键词：牙髓干细胞增殖成骨分化依普黄酮

重组人生长激素促进人牙髓干细胞的成骨分化被引量：1: 2024年; 背景:既往研究表明人牙髓干细胞具有良好的成骨分化潜能,是骨组织工程中潜在的种子细胞,目前重组人生长激素对人牙髓干细胞的增殖及成骨分化的作用尚不明确。目的:探究重组人生长激素对人牙髓干细胞增殖及成骨分化的影响。方法:采用组织块培养法分离培养人牙髓干细胞,根据药物浓度梯度筛选后,选取10,100,250,500,1000μg/L重组人生长激素干预为实验组,正常培养基培养为对照组。在干预后第1,3,5,7天采用CCK-8法检测人牙髓干细胞的增殖情况。选取含10,100,250,500,1000μg/L重组人生长激素的成骨诱导液干预人牙髓干细胞,在诱导第7天,采用碱性磷酸酶染色及其半定量分析法检测碱性磷酸酶活性,采用荧光定量RT-qPCR检测成骨相关基因Ⅰ型胶原蛋白、骨钙素、Runt相关转录因子2的mRNA表达,在诱导第14天,采用茜素红染色观察成骨矿化情况。结果与结论:①CCK-8检测结果显示,从干预第3天开始,100,250,500,1000μg/L重组人生长激素均能促进人牙髓干细胞增殖,与对照组相比差异有显著性意义(P<0.01);②与对照组比较,100,250,500μg/L重组人生长激素组人牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性显著升高(P<0.01);100,250μg/L重组人生长激素组人牙髓干细胞的茜素红染色矿化结节数显著增多(P<0.01);250μg/L重组人生长激素组Ⅰ型胶原蛋白、骨钙素的mRNA表达量升高(P<0.05,P<0.01),100,250μg/L重组人生长激素组Runt相关转录因子2的mRNA表达量升高(P<0.01);③上述结果表明,250μg/L重组人生长激素更适合促进人牙髓干细胞增殖和成骨分化。; 孙菁廖健孙江龄程萍冯红超; 关键词：间充质干细胞人牙髓干细胞生长激素重组人生长激素成骨分化

Epi-1对脂多糖诱导人牙髓干细胞炎症反应的影响: 2024年; 目的研究生物活性肽Epi-1在脂多糖(LPS)诱导下的炎症微环境中对人牙髓干细胞(hDPSC)表达炎症因子的影响和可能机制。方法通过组织块酶消化法分离、培养hDPSC,并通过流式细胞术鉴定。利用CCK-8试剂检测Epi-1对hDPSC细胞活性的影响,筛选出适宜的浓度。实验分为4组,分别为空白对照组(不含LPS和Epi-1)、LPS组(1.0μg/mL LPS)、2.5μg/mL Epi-1组(1.0μg/mL LPS和2.5μg/mL Epi-1)和5.0μg/mL Epi-1组(1.0μg/mL LPS和5.0μg/mL Epi-1),通过实时荧光定量聚合酶链式反应检测Epi-1对hDPSC白介素(IL)-6、IL-1β、IL-8基因表达的影响,进一步通过蛋白质免疫印迹法检测核因子κB信号通路关键蛋白p65、p-p65的表达情况,使用荧光探针检测活性氧生成情况。采用SPSS 22.0分析数据。结果在2.5、5.0μg/mL的质量浓度下,Epi-1无明显细胞毒性;Epi-1可显著降低LPS诱导后hDPSC中IL-6、IL-1β、IL-8的mRNA表达(P<0.01),减少p-p65的表达(P<0.05)和活性氧的生成(P<0.001)。结论Epi-1可能通过抑制核因子κB信号通路的激活和减轻氧化应激反应,从而降低LPS诱导的hDPSC的炎症反应。; 罗宇仪赵望泓梁悦娥; 关键词：人牙髓干细胞炎症核因子ΚB 牙髓炎生物活性肽

Unc-5 netrin受体B调控人牙髓干细胞干性作用的研究: 黄小燕

负载人牙髓干细胞的多肽光交联水凝胶材料的制备方法: 本发明属于水凝胶制备领域，涉及一种负载人牙髓干细胞的多肽光交联水凝胶材料的制备方法，方法如下：甲基丙烯酸改性的BFP1多肽与GelMA水凝胶溶液及人牙髓干细胞均匀混合后在光引发剂的作用下发生光交联，最终形成负载人牙髓干细...; 曲柳周青王强

人牙髓干细胞联合舌脱细胞基质修复舌缺损的实验研究: 毛丽莎

WW域转录调节因子1对人牙髓干细胞的衰老调控作用研究: 2024年; 目的探讨人牙髓干细胞(hDPSC)随传代次数增加衰老相关表型和分子的改变,探究含WW域转录调节因子1(WWTR1)在hDPSC衰老中的作用。方法组织块法原代培养hDPSC,根据培养出的hDPSC来源受试者的年龄、细胞代数及细胞敲低和过表达WWTR1后将细胞分为4组。Ⅰ组:人牙来源的hDPSC根据受试者不同年龄分为青年组(15~25岁)和中年组(40~50岁)。Ⅱ组:根据hDPSC不同传代分为年轻细胞组(传至第3代)和年老细胞组(传至第10代)。Ⅲ组:hDPSC敲低WWTR1,分为敲低组和敲低空载体组。Ⅳ组:hDPSC过表达WWTR1,分为过表达组和过表达空载体组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Ⅰ、Ⅱ组WWTR1表达量的变化,对Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组通过细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力、茜素红染色检测细胞成骨分化能力、衰老相关β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老阳性率、RT-qPCR检测衰老相关基因p53、p21表达量的变化。结果衰老细胞占比随连续传代培养逐渐增加,与年轻细胞组相比,年老细胞组hDPSC的增殖及成骨分化能力均显著降低(P<0.001),年老细胞组hDPSC衰老相关基因p53(2.09±0.24)、p21(4.91±0.54)的表达量均显著高于年轻细胞组[p53:(1.08±0.09),p21:(1.09±0.08)](P<0.01,P<0.001)。与青年组和年轻细胞组hDPSC相比,中年组和年老细胞组hDPSC的WWTR1表达量均显著降低(P<0.01)。敲低组(44.50±2.42)较敲低空载体组(22.27±0.56)衰老细胞占比显著增加(P<0.001),hDPSC敲低WWTR1后衰老相关基因p53、p21的表达水平显著上调(P<0.001),敲低组hDPSC的增殖及成骨分化能力较敲低空载体组显著降低(P<0.001)。过表达空载体组(20.40±0.79)较过表达组(10.07±0.61)衰老细胞占比显著增加(P<0.001),hDPSC过表达WWTR1后衰老相关基因p53、p21的表达水平显著下调,过表达组hDPSC的增殖及成骨分化能力较过表达空载体组显著升高(P<0.001)。结论WWTR1可以抑制衰老相关基因p53、p21的表达进而延缓hDP; 李丹丹刘慧娟王燕陈增国张雪李文静; 关键词：细胞衰老人牙髓干细胞连续传代

Let-7c靶向IGF2BP2调控人牙髓干细胞增殖的分子机制: 2024年; 目的:探讨let-7c过表达对人类牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖的影响及其作用机制。方法:分离培养hDPSCs,应用let-7c模拟物和抑制剂转染hDPSCs。利用qRT-PCR检测转染效率,利用CCK-8检测细胞增殖情况。应用流式细胞术检测细胞周期,通过蛋白质印迹分析let-7c抑制细胞增殖的作用机制。应用小干扰RNA(small interfer RNA,siRNA)瞬时转染方法构建针对胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(insulin-like growth factor 2 mRNA binding protein 2,IGF2BP2)基因的细胞模型,通过生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验探讨分析let-7c是否直接靶向IGF2BP2。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:Let-7c过表达抑制细胞增殖。Let-7c通过调节S和G2/M周期阻断细胞增殖,直接与hDPSCs中与细胞周期调控有关的一组信使RNA(messenger RNA,mRNA)序列IGF2BP2结合,靶向抑制IGF2BP2的表达,两者的表达水平呈现负相关关系。结论:Let-7c通过靶向抑制IGF2BP2表达,抑制hDPSCs增殖。; 王雨珊孙梦馨杨屹城衡笑张雨欣杨建光刘岩; 关键词：细胞增殖细胞周期

脂多糖和肿瘤坏死因子α对人牙髓干细胞增殖和成骨分化的影响: 2024年; 目的探讨脂多糖(LPS)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖和分化的影响。方法体外分离培养hDPSCs,分别用不同浓度LPS(0,0.1,1,10μg/mL)和TNF-α(0,1,10,100 ng/mL)培养细胞。培养24,48,72 h,应用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测hDPSCs增殖活性变化;培养7,14,21 d应用茜素红(AR)染色试剂盒和5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐(BCIP)/氯化硝基四氮唑蓝(NBT)碱性磷酸酯酶(ALP)显色试剂盒检测hDPSCs肉眼观AR染色变化、钙结节定量、ALP染色和ALP活性等成骨分化指标。结果①CCK-8实验显示1,10,100 ng/mL TNF-α作用于hDPSCs 24,48,72 h后细胞增殖活力降低(P<0.05)。AR成骨诱导染色结果显示培养7,14 d,TNF-α各浓度组肉眼观AR染色无明显差异;培养21 d,10 ng/mL和100 ng/mL TNF-α组矿化程度相比0 ng/mL组低(P<0.05)。ALP染色和ALP活性试剂盒分析显示诱导培养7,14,21 d后,相比0 ng/mL组,1 ng/mL,10 ng/mL和100 ng/mL TNF-α组ALP染色变浅,且ALP活性降低(P<0.05)。②CCK-8实验显示不同浓度LPS作用hDPSCs 24 h和48 h后细胞增殖活性没有明显差异,而1μg/mL和10μg/mL组LPS作用hDPSCs 72 h后OD_(450)值大于0μg/mL组(P<0.05)。ALP成骨诱导染色显示培养7,14,21 d,不同浓度LPS作用后ALP染色和ALP活性变化不明显。AR成骨诱导染色显示培养7 d,LPS各浓度组的矿化程度不明显;10μg/mL LPS培养14,21 d矿化程度较0μg/mL低(P<0.05)。结论LPS对hDPSCs成骨分化的影响取决于LPS浓度和作用时间,高浓度LPS促进hDPSCs增殖。TNF-α抑制hDPSCs的增殖和成骨分化。; 刘岩刘昕昕石刘李婉怡费立崑; 关键词：脂多糖肿瘤坏死因子Α 人牙髓干细胞牙髓炎成骨分化

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