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氧化应激对上皮细胞DNA甲基化、组蛋白乙酰化及甲基化修饰模式的影响及其机理研究
肠道容易受到外界环境的影响并经历氧化应激(oxidative stress,OS)。酸过多、长期饮酒、幽门螺旋杆菌等会刺激上皮细胞,影响细胞内活性氧物质(reactive oxygen species,ROS)的水...
左梦娜
关键词:人胃上皮细胞氧化应激DNA甲基化组蛋白甲基化组蛋白乙酰化
槲皮素配伍芹菜素对顺铂诱导上皮细胞损伤作用的研究被引量:2
2022年
目的研究槲皮素配伍芹菜素抗顺铂诱导上皮细胞(GES-1)损伤作用。方法运用分子对接技术将槲皮素和芹菜素与肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)蛋白对接。采用细胞实验方法,将GES-1细胞随机分为空白组、顺铂组、槲皮素+芹菜素组(40μmol/L槲皮素配伍4μmol/L芹菜素干预顺铂诱导GES-1细胞损伤)。噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率;Hoechst 33258染色剂测定细胞凋亡染色;线粒体膜电位探针(JC-1)测定细胞线粒体膜电位;活性氧探针(DCFH-DA)测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;微板法测定谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量;硫微量操作法测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;钼酸铵法测定过氧化氢酶(catalase,CAT)含量;WST-1法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量;ELISA法测定TNF-α、IL-1β表达。结果与空白组比较,顺铂组能升高GES-1细胞凋亡荧光度值、ROS和MDA含量、TNF-α和IL-1表达,降低线粒体膜电位、GSH、CAT、SOD含量(P<0.05或P<0.01);与顺铂组比较,槲皮素+芹菜素组能降低顺铂诱导的GES-1细胞凋亡荧光度值、ROS和MDA含量、TNF-α和IL-1表达,升高线粒体膜电位、CAT、GSH、SOD含量(P<0.05或P<0.01)。结论顺铂能诱导GES-1细胞损伤,槲皮素配伍芹菜素能拮抗顺铂诱导GES-1细胞损伤,其作用与抑制GES-1细胞氧化应激、炎症反应和凋亡有关。
周志华李耀伟王志琪李跃辉李跃辉丛梦静
关键词:槲皮素芹菜素顺铂GES-1细胞
IGF2BP3在MNNG致上皮细胞恶性转化中的作用及机制
2022年
[背景]N6-甲基腺苷(m6A)RNA甲基化修饰在环境致癌物诱发细胞恶性转化的过程中发挥着重要作用,但其作用及机制有待进一步探索。[目的]探究m6A结合蛋白中胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)在N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)致黏膜上皮细胞GES-1恶性转化细胞中的作用及机制。[方法]基于MNNG致GES-1恶性转化细胞模型MC-30,应用转染慢病毒技术构建稳定敲低IGF2BP3的MC-30细胞株(MC30-shIGF2BP3,简写MC30-shI3),并设置阴性对照组(MC30-NC)。实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting实验分别检测IGF2BP3 mRNA和蛋白表达水平,RNA结合蛋白免疫沉淀技术(RIP-qPCR)验证恶转细胞MC-30中IGF2BP3蛋白与MYC mRNA的结合,放线菌素D实验检测MYC mRNA的稳定性。CCK-8、Transwell分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blotting实验检测EMT关键蛋白(N-cadherin、Vimentin、α-SMA、Snail)的表达。通过在MC30-shI3细胞中转染质粒过表达MYC的挽救实验,进一步观察细胞表型(增殖、迁移、侵袭)和EMT关键蛋白表达的变化来阐明下游靶基因MYC的作用。[结果]与对照组相比,5、10、20、40μmol·L–1 MNNG染毒GES-1细胞后,IGF2BP3 mRNA表达均上调(P<0.05)。20μmol·L–1 MNNG染毒GES-1细胞后,IGF2BP3 mRNA表达水平随染毒时间的延长呈上调趋势(P<0.05)。5μmol·L–1 MNNG恶转第10、20、30代IGF2BP3 mRNA和蛋白表达水平均上调(P<0.05)。qRT-PCR和Western blotting表明,与MC30-NC组相比,MC30-shI3组的细胞IGF2BP3 mRNA表达和蛋白表达水平明显下调(P<0.01);CCK8、Transwell表明,与MC30-NC组相比,MC30-shI3组的细胞增殖、迁移以及侵袭能力明显降低(P<0.01);Western blotting实验表明,与MC30-NC组相比,MC30-shI3组的EMT关键蛋白N-cadherin、Vimentin、α-SMA、Snail蛋白表达水平均明显下调(P<0.01);RIP-qPCR结果显示,在MC-30细胞中,与IgG组相比,IGF2BP3组中富集的MYC的mRNA水平更高(P<0.01);放线菌素D实验表明,
任艺艺杜丹丹刘桐尹立红浦跃朴梁戈玉
关键词:GES-1细胞恶性转化
上皮细胞系GES-1在不同pH环境下的串联质谱标签定量蛋白质组学分析被引量:1
2022年
体重要的消化器官,部环境pH改变可能引发多种疾病。本研究探究了不同pH环境对上皮细胞系GES-1蛋白质组的影响。将GES-1放置在酸性(pH 6.8)、碱性(pH 9.4)和对照(pH 7.4)培养基中,培养7 d后收集细胞沉淀,进行串联质谱标签(tandem mass tags,TMT)定量蛋白质组学测序,选择差异表达蛋白进行KEGG富集分析。结果表明,上皮细胞GES-1最适生长pH为7.4,在强碱环境(pH 9.4)中细胞能保持较好的状态,在弱酸环境(pH 6.8)中难以维持正常细胞形态。与对照组相比,136个蛋白在酸性(pH 6.8)样品中显著差异表达,其中96个蛋白上调,40个蛋白下调。KEGG富集结果显示,差异蛋白与胆汁分泌、丙酮酸代谢、抗原加工呈递、铁死亡等103个生物学过程相关;与对照组相比,15个蛋白在碱性(pH 9.4)样品中显著上调,1个蛋白显著下调,差异蛋白被富集到47个生物学过程,包括霍乱弧菌感染、补体与凝血级联、内质网中的蛋白质加工、蛋白质输出等。本研究揭示了GES-1细胞响应pH环境改变的蛋白质组特点,为探究因环境pH变化引发的部病变提供了新的思路。
施韵何坪涂旭东张玉娟
幽门螺杆菌感染新型原代上皮细胞模型的建立
2021年
目的培养三维(3D)黏膜上皮类器官,转为二维(2D)原代黏膜细胞培养,并建成2D原代上皮细胞的幽门螺杆菌感染模型。方法(1)从正常上皮组织中分离腺,在含有多种生长调节和凋亡抑制等混合因子的培养基中,依附于基质胶而培养成3D类器官;(2)利用免疫荧光技术鉴定上皮类器官的相关分子标记;(3)研究正常原代上皮细胞被幽门螺杆菌感染后的形态学变化,利用免疫印迹技术鉴定幽门螺杆菌感染相关蛋白的表达水平。结果成功培养出可长期传代的上皮3D类器官,具有典型的黏膜上皮分子标记。而且3D类器官转为2D平面培养的原代上皮细胞,可作为幽门螺杆菌的体外原代细胞感染模型。结论3D上皮类器官,可作为2D原代上皮细胞的持久来源,为研究幽门螺杆菌感染上皮的分子机制带来个体化的新模型。
米阳高爽刘行凡任飞飞刘斌郑鹏远
关键词:胃腺幽门螺杆菌
幽门螺杆菌感染新型原代上皮细胞模型的建立和应用
目的:  培养三维(3D)粘膜上皮类器官,转为二维(2D)原代上皮细胞培养,建成2D原代上皮细胞的幽门螺杆菌感染模型。继而应用该模型研究幽门螺杆菌感染和癌发生发展有关的分子机制。  方法:  1.从正常上...
高爽
关键词:胃癌疾病进展幽门螺杆菌感染
酱香型白酒中生物活性物质抗幽门螺杆菌代谢物诱导的上皮细胞炎症作用研究被引量:13
2020年
研究酱香型白酒中吡嗪类物质(BQL)对幽门螺杆菌代谢物(Helicobacter pylori Metabolites,HpM)诱导上皮细胞(GES-1)炎症的抑制作用。参照Leunk等的方法制备HpM并刺激GES-1细胞,建立炎症模型。ELISA法检测BQL对HpM诱导的GES-1细胞活性及白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)、肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)炎症因子分泌的影响。Western Blotting检测BQL-1对NF-κB,MAPK等信号通路的影响。BQL-1(2,3,5,6-四甲基吡嗪)组(0.08 mg/mL)逆转了由HpM诱发的细胞活性降低(P>0.05),同时显著降低IL-8和TNF-α的分泌,促进IL-4的表达,减弱HpM对NF-κB,MAPK信号通路的影响。酱香型白酒中含有的吡嗪类物质具有一定的抗炎活性,可通过调控NF-κB和MAPK等信号通路、降低HpM诱导的炎症因子分泌发挥抗炎作用。
罗强刘杰刘志刚
关键词:酱香型白酒MAPK
姜黄素对上皮细胞GES-1放射性损伤的保护作用及其机制研究
目的:  研究姜黄素对上皮细胞GES-1的放射性损伤的影响,并对其抗氧化损伤及抗细胞凋亡途径的机制进行探索,为的放射性损伤的治疗提供新的可能治疗思路。  方法:  实验分为空白对照组、姜黄素组、辐照模型组、辐照+姜...
陈明道
关键词:姜黄素放射性损伤
文献传递
腹水草对上皮细胞GES-1的保护作用及其对PKA、CREB、AQP1的调控研究被引量:4
2016年
[目的]研究腹水草(Veronicastrum axillare,V.axillare)含药血清对乙醇损伤的上皮细胞(gastric epithelial cells-1,GES-1)的保护作用及其对环腺苷酸依赖性激酶(protein kinase A,PKA)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(c AMP-response element binding protein,CREB)、水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)表达水平的调控作用。[方法]20只雄性SD大鼠随机分为5组(n=4),连续灌给药14d,制备正常组(生理盐水20 m L·kg-1)、雷尼替丁组(0.027g·kg-1)以及V.axillare低、中、高剂量组(0.7、1.4、2.8 g·kg-1)含药血清。MTT法检测体外培养的GES-1细胞的活性,研究V.axillare含药血清及PKA抑制剂H-89(25μmol·m L-1)预处理对5%乙醇诱导GES-1细胞活力的影响。荧光定量RT-PCR检测PKA、CREB及AQP1 m RNA的表达水平,Western blot检测AQP1蛋白表达水平。[结果]模型组和H-89组GES-1细胞活性低于正常组,差异有统计学意义(P<0.01);乙醇造模处理显著上调PKA、CREB及下调AQP1的表达水平,差异有统计学意义(P<0.01);H-89处理显著抑制PKA和CREB m RNA表达水平(P<0.01);加入各剂量V.axillare含药血清不能显著改善H-89对PKA、CREB和AQP1 m RNA表达水平的抑制作用。V.axillare中、高剂量含药血清细胞活性高于模型组,PKA、CREB m RNA表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01),而V.axillare中、低剂量含药血清AQP1表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。[结论]V.axillare含药血清显著减轻乙醇对GES-1细胞的损伤,对GES-1细胞具有保护作用,其保护机制与下调PKA、CREB及上调AQP1的表达有关。
徐艳山赵伟春王丹依陈刚
关键词:V.GES-1AQP1
表达硫氧还蛋白1的幽门螺杆菌对上皮细胞株GES-1生长的影响被引量:4
2015年
背景:幽门螺杆菌(Hp)感染在癌的发生过程中发挥重要作用,细菌毒力因子是导致不同疾病的重要因素。目的:研究高、低表达硫氧还蛋白1(Trx1)的Hp对上皮细胞株GES-1生长的作用。方法:按1∶50、1∶100、1∶200的细胞/细菌比例分别加入GES-1细胞和高、低表达Trx1的Hp菌株共培养,并设不加菌株的空白细胞作为对照组,分别于培养24 h和48 h时采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测细胞存活率。收集1∶100浓度组和对照组GES-1细胞,采用流式细胞术检测细胞周期。结果:高、低表达Trx1的Hp对GES-1细胞有损伤作用,细胞存活率降低,且呈时间和浓度依赖性,在Trx1高表达组中尤为明显。流式细胞术显示Trx1高表达组GES-1细胞进入S期的比例在24 h和48 h均明显高于Trx1低表达组。结论:高、低表达Trx1的Hp对GES-1细胞生长具有抑制作用,高表达Trx1的Hp具有更强的致病性,与致癌作用有关。
刘琳娜丁士刚石岩岩贾淑娟
关键词:幽门螺杆菌GES-1细胞增殖细胞周期

相关作者

朱丽华
作品数:79被引量:241H指数:7
供职机构:天津医科大学
研究主题:EB病毒 GES-1 人胃上皮细胞 EBV感染 胃肿瘤
李淑英
作品数:48被引量:92H指数:6
供职机构:河北联合大学
研究主题:EB病毒 EB病毒感染 胃癌患者 食管癌 人胃上皮细胞
周天戟
作品数:45被引量:103H指数:6
供职机构:江苏大学临床医学院
研究主题:EB病毒 EB病毒感染 胃肿瘤 GES-1 胃癌患者
习瑾昆
作品数:7被引量:4H指数:1
供职机构:华北煤炭医学院
研究主题:人胃上皮细胞 GES-1 GES-1细胞 BCL-2基因转染 胃上皮细胞
章广玲
作品数:77被引量:189H指数:7
供职机构:华北理工大学基础医学院
研究主题:大黄酸 肺癌 EB病毒 GES-1 医学微生物学