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二倍体细胞森林脑炎灭活疫苗免疫原性研究
森林脑炎又称蜱传脑炎(tick-borne encephalitis,TBE),是一种主要通过蜱虫叮咬感染蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)的兽共患性疾病。TBEV属于...
刘紫薇
关键词:人胚肺二倍体细胞森林脑炎病毒免疫原性
甲型肝炎病毒L-A-1株在二倍体细胞2BS株上的遗传稳定性被引量:1
2021年
目的探讨甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)L-A-1株在二倍体细胞2BS株(简称2BS细胞)上的遗传稳定性。方法将HAV L-A-1株在2BS细胞上连续传代培养至32代,取23、24、26、28和32代次病毒,检测抗原含量和病毒滴度。RT-PCR扩增各代病毒HAV1~HAV7基因序列片段,采用DNAMAN软件进行拼接,得到全基因组核苷酸序列,分析不同代次病毒基因组核苷酸和氨基酸同源性;并与GenBank中登录的国内外主要HAV毒株进行同源性分析,同时比对VP1和VP3区氨基酸序列。各代次病毒液经腹腔免疫ICR小鼠,0.5 m L/只,于免疫后28 d,经心脏采血,分离血清,ELISA法检测血清抗效价。结果HAV L-A-1株23、24、26、28和32代次病毒抗原含量在10240~20480 EU/mL之间,病毒滴度为7.00~7.50 lgCCID50/mL。不同代次HAV L-A-1株病毒全基因组核苷酸和氨基酸序列同源性均为100%;与国内外主要HAV毒株的核苷酸序列同源性为91.40%~99.70%,氨基酸序列同源性为98.20%~99.69%,与L-A-1参考株(AF314208)核苷酸和氨基酸序列同源性最高,分别为99.70%和99.69%;与国内外主要HAV毒株VP1区有5处氨基酸不一致,VP3区有2处氨基酸不一致,与L-A-1参考株(AF314208)和H2减毒株(H2K25株)VP1和VP3区氨基酸序列完全一致。不同代次病毒液免疫ICR小鼠后阳转率均为100%,血清抗效价在684.69~997.84 mIU/mL之间,各代病毒间差异无统计学意义(P>0.05)。结论HAV L-A-1株在2BS细胞上连续传代后,具有良好的遗传稳定性。
徐艳玲李昊堃王艺博夏青娟岳立广刘令九
关键词:甲型肝炎病毒
低血清培养基培养二倍体细胞(2BS株)及其增殖甲型肝炎病毒的初步研究被引量:1
2021年
目的研究2种低血清培养基对二倍体细胞(2BS株)的培养效果及甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)在低血清培养基中的增殖情况。方法使用低血清培养基A+2%新生牛血清、B+5%新生牛血清和E-MEM培养基+10%新生牛血清培养细胞,显微镜下观察细胞形态、贴壁情况,细胞计数并绘制生长曲线;优化低血清培养基B的血清浓度;使用5层细胞工厂连续传代培养,放大低血清培养基细胞培养工艺;使用低血清培养基连续进行3次细胞传代后接种HAV,检测病毒滴度。结果使用低血清培养基A+2%新生牛血清、B+5%新生牛血清和E-MEM培养基+10%新生牛血清,细胞生长密度峰值分别为1.55×10^(5)、2.07×10^(5)和1.30×10^(5)个/cm^(2),统计学分析表明,低血清培养基B+5%新生牛血清达到细胞生长密度峰值高于低血清培养基A+2%新生牛血清和E-MEM+10%新生牛血清,差异具有统计学意义(P均<0.05);低血清培养基B+5%新生牛血清同B+3%新生牛血清连续培养3代细胞生长密度差异均无统计学意义(P=0.47、0.07、0.12);使用5层细胞工厂培养细胞,低血清培养基A+2%新生牛血清、B+5%新生牛血清连续培养3代,细胞生长密度均高于E-MEM+10%新生牛血清;低血清培养基B+3%新生牛血清与低血清培养基B+5%新生牛血清的病毒滴度分别为9.50和9.33 lgCCID_(50)/mL,低血清培养基A+2%新生牛血清和E-MEM+10%新生牛血清的病毒滴度分别为8.50和9.00 lgCCID_(50)/mL。结论低血清培养基适用于培养2BS细胞增殖HAV,为低血清培养基在甲肝疫苗生产中的应用奠定了基础。
张宏丽任琦夏青娟李春雷杨利民徐艳玲
关键词:甲型肝炎病毒增殖
甲型肝炎病毒在二倍体细胞核酸增殖培养模型的建立被引量:2
2021年
目的 采用二倍体细胞(2BS细胞)培养,结合实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测,开展甲型肝炎病毒(HAV)在2BS细胞核酸增殖培养模型的建立研究。方法 将不同浓度的HAV活病毒感染2BS细胞,分别于感染后0、8、10、14、20d收获HAV感染的细胞,应用已建立的HAV核酸检测和抗原检测方法分别检测HAV病毒核酸含量和抗原含量的动态变化。结果HAV在2BS细胞中可有效复制和扩增,高剂量组以1×10^(4) CCID_(50)/mLHAV感染0d即可检测到HAV核酸,10~20d病毒核酸达到峰值7.607lgcopies/μL;中剂量组以1×10^(2) CCID_(50)/mLHAV感染6d可检测到HAV核酸,6~10d病毒增殖明显(P<0.05),14~20d病毒核酸含量达到峰值7.074lgcopies/μL并趋于稳定;而低剂量组以1CCID_(50)/mLHAV感染后,10d HAV开始增殖,20d病毒核酸含量与中、高剂量组别相近且基本达到峰值;当HAV感染2BS细胞10 d时,病毒核酸检出拷贝数与感染HAV浓度呈良好的线性关系,可根据标准曲线准确反映样品中的HAV活病毒含量。细胞培养结合病毒抗原表达也可有效反映HAV的扩增情况,但较病毒核酸的出现呈明显滞后,且当样品中抗原含量低时,至少需要20d以上才可完全检测到病毒抗原的表达。结论 应用2BS细胞培养和qRT-PCR检测建立了2BS细胞HAV核酸增殖模型,可快速、准确地反映HAV活病毒在细胞中的动态感染和增殖情况,可应用于HAV活病毒的快速定量、病毒特性、药物筛选和疫苗评价等相关研究。
闫旭佳袁亚迪夏青娟徐艳玲王春雨徐涵禹张洁
关键词:甲型肝炎病毒抗原检测QRT-PCR
衰老程度评价生物学指标在二倍体细胞的筛选研究被引量:1
2017年
目的:通过在微观结构水平和分子水平检测不同代次二倍体细胞衰老相关的指标值,筛选出能够系统性评价二倍体细胞衰老程度的生物学指标。方法:将Walvax-2细胞分成16个代次,在倒置显微镜下观察不同代次Walvax-2细胞生长情况及形态学变化;在透射电镜下观察不同代次Walvax-2细胞生长情况和衰老情况;通过检测SA-β-gal染色阳性率,分析不同代次Walvax-2细胞β-半乳糖苷酶的表达水平。结果:细胞可传58代。倒置显微镜下:随细胞代次的增加,可见颜色逐渐加深,色素积累;透射电子显微镜观察到:P20到P43细胞正常且骨架结构明显,细胞核完整,具有较高的核质比,P44和P45开始出现衰老现象,细胞质色素积聚加深,核膜不同程度内折,P50和P55细胞衰老更加明显;β-半乳糖苷酶的阳性染色率和细胞代龄之间呈显著相关(P<0.01)。结论:细胞形态学变化,β-半乳糖苷酶阳性率变化与Walvax-2细胞代龄增长显著相关,可选择作为Walvax-2细胞衰老程度评价的生物学指标。
聂爱婷马波胡利平张秀峰饶旼聂胜洁
关键词:细胞衰老细胞形态Β-半乳糖苷酶
两株新建二倍体细胞株的细胞生物学研究
[目的]疫苗接种是能够抵抑类及动物病毒感染性疾病最积极有效的办法之一。随着病毒性疾病的不断增多及们对病毒性疾病认识清晰度的不断提高,疫苗的需求量也日渐增加。各研发机构致力于新疫苗的研发及生产,在保证疫苗的品种及数量不...
高垚
关键词:人二倍体细胞疫苗
文献传递
二倍体细胞衰老程度评价生物学指标研究被引量:2
2016年
目的通过细胞生长曲线、流式细胞术检测二倍体细胞不同代次情况,筛选评价二倍体细胞衰老程度的生物学指标。方法将Walvax-2细胞分为16个代次,绘制生长曲线,观察不同代次Walvax-2细胞的生长增殖情况及细胞活力;通过核酸荧光染料碘化丙啶(PI)作为细胞活力分析的荧光探针使用流式细胞仪检测不同代次Walvax-2细胞周期时相和细胞凋亡情况。结果 P_(20)和P_(30)的细胞活力明显强于P_(40)和P_(50)(均P<0.05),P_(40)的细胞活力明显强于P_(50)(P<0.05);G_0/G_1期所占百分比与细胞代龄间的增长无相关性(P>0.05),而S期、G_2/M期和细胞碎片所占百分比与细胞代龄间的增长显著相关(均P<0.05)。结论通过绘制生长曲线可区分相隔较大代次的Walvax-2细胞的生长活力,在进行细胞衰老综合评定时,可通过PI作为荧光探针使用流式细胞仪检测细胞周期变化作为Walvax-2细胞的衰老程度综合评定的指标。
聂爱婷马波欧俊兴胡利平饶旼聂胜洁
关键词:细胞衰老细胞周期细胞生长曲线
二倍体细胞衰老程度评价生物学指标研究
研究背景:细胞衰老是随着时间的推移,细胞增殖能力和生理功能逐渐下降的变化过程,是个衰老的重要基础。外培养二倍体细胞是目前用于疫苗生产最安全的细胞基质,其使用代次限制在生命周期的三分之二以内。目前对不同代次二倍体细胞在...
马立宇
关键词:细胞衰老细胞形态Β-半乳糖苷酶端粒酶细胞周期细胞生长曲线
文献传递
Ⅲ型登革病毒D9964株在二倍体细胞KMB17上适应株选育纯化及其增殖动力学研究被引量:1
2013年
选育出Ⅲ型登革病毒中国株在二倍体细胞KMB17上的适应株并对其生物学特性和增殖动力学进行研究,为研究登革病毒减毒活疫苗奠定基础。Ⅲ型登革病毒中国株D9964经RT-PCR鉴定型别正确后,进行毒种扩增和滴度测定;以4.0MOI接种KMB17细胞,反复传代直至病毒能在细胞中适应和增殖;连续传10代,选育出KMB17细胞适应株,经三轮噬斑纯化筛选适应株,微量滴定法检测10代病毒培养液的感染性滴度;免疫荧光法检测纯化病毒株的抗原性;将病毒纯化株接种KMB17细胞,取第3~7d细胞提取RNA,以Real-time PCR检测病毒适应株在细胞中的增殖动态。结果显示,经适应性培养后Ⅲ型登革病毒中国株D9964能在KMB17细胞中稳定增殖,经噬斑纯化获得了高纯度的细胞适应株,病毒保持了原始毒株良好的抗原性;增殖动力学研究显示第5~6d为病毒在细胞内的增殖高峰期。
赵玉娇潘玥阎玲梅岳耀斐杨丽娟陈俊英马绍辉施海晶孙强明
关键词:登革病毒人胚肺二倍体细胞适应性增殖动力学
登革病毒在二倍体细胞KMB17中的适应性及生物学特性研究
登革病毒(dengue virus,DEN)属于黄病毒科黄病毒属中的一个血清型亚群,主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊等媒介昆虫传播,引起登革热(dengue fever,DF)以及发病率和死亡率很高的登革出血热(dengue ...
赵玉娇
关键词:登革病毒人胚肺二倍体细胞适应性增殖动力学
文献传递

相关作者

胡云章
作品数:176被引量:277H指数:9
供职机构:中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所
研究主题:疫苗 体液免疫应答 佐剂 铝佐剂 疫苗佐剂
瞿素
作品数:35被引量:63H指数:3
供职机构:中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所
研究主题:脊髓灰质炎病毒 二倍体细胞 体液免疫应答 感染性滴度 人胚肺二倍体细胞
赵玉娇
作品数:32被引量:56H指数:5
供职机构:中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所
研究主题:登革病毒 包膜糖蛋白 埃博拉病毒 人胚肺二倍体细胞 登革热病毒
胡凝珠
作品数:141被引量:174H指数:7
供职机构:中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所
研究主题:疫苗 体液免疫应答 佐剂 铝佐剂 疫苗佐剂
刘国栋
作品数:41被引量:167H指数:7
供职机构:北京大学
研究主题:微量元素 二倍体细胞 脊髓灰质炎病毒 中国人 中子活化分析