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人 胚 肺 二倍体 细胞 森林脑炎灭活疫苗免疫原性研究 森林脑炎又称蜱传脑炎(tick-borne encephalitis,TBE),是一种主要通过蜱虫叮咬感染蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)的人 兽共患性疾病。TBEV属于... 刘紫薇关键词:人胚肺二倍体细胞 森林脑炎病毒 免疫原性 甲型肝炎病毒L-A-1株在人 胚 肺 二倍体 细胞 2BS株上的遗传稳定性 被引量:1 2021年 目的探讨甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)L-A-1株在人 胚 肺 二倍体 细胞 2BS株(简称2BS细胞 )上的遗传稳定性。方法将HAV L-A-1株在2BS细胞 上连续传代培养至32代,取23、24、26、28和32代次病毒,检测抗原含量和病毒滴度。RT-PCR扩增各代病毒HAV1~HAV7基因序列片段,采用DNAMAN软件进行拼接,得到全基因组核苷酸序列,分析不同代次病毒基因组核苷酸和氨基酸同源性;并与GenBank中登录的国内外主要HAV毒株进行同源性分析,同时比对VP1和VP3区氨基酸序列。各代次病毒液经腹腔免疫ICR小鼠,0.5 m L/只,于免疫后28 d,经心脏采血,分离血清,ELISA法检测血清抗体 效价。结果HAV L-A-1株23、24、26、28和32代次病毒抗原含量在10240~20480 EU/mL之间,病毒滴度为7.00~7.50 lgCCID50/mL。不同代次HAV L-A-1株病毒全基因组核苷酸和氨基酸序列同源性均为100%;与国内外主要HAV毒株的核苷酸序列同源性为91.40%~99.70%,氨基酸序列同源性为98.20%~99.69%,与L-A-1参考株(AF314208)核苷酸和氨基酸序列同源性最高,分别为99.70%和99.69%;与国内外主要HAV毒株VP1区有5处氨基酸不一致,VP3区有2处氨基酸不一致,与L-A-1参考株(AF314208)和H2减毒株(H2K25株)VP1和VP3区氨基酸序列完全一致。不同代次病毒液免疫ICR小鼠后阳转率均为100%,血清抗体 效价在684.69~997.84 mIU/mL之间,各代病毒间差异无统计学意义(P>0.05)。结论HAV L-A-1株在2BS细胞 上连续传代后,具有良好的遗传稳定性。 徐艳玲 李昊堃 王艺博 夏青娟 岳立广 刘令九关键词:甲型肝炎病毒 低血清培养基培养人 胚 肺 二倍体 细胞 (2BS株)及其增殖甲型肝炎病毒的初步研究 被引量:1 2021年 目的研究2种低血清培养基对人 胚 肺 二倍体 细胞 (2BS株)的培养效果及甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)在低血清培养基中的增殖情况。方法使用低血清培养基A+2%新生牛血清、B+5%新生牛血清和E-MEM培养基+10%新生牛血清培养细胞 ,显微镜下观察细胞 形态、贴壁情况,细胞 计数并绘制生长曲线;优化低血清培养基B的血清浓度;使用5层细胞 工厂连续传代培养,放大低血清培养基细胞 培养工艺;使用低血清培养基连续进行3次细胞 传代后接种HAV,检测病毒滴度。结果使用低血清培养基A+2%新生牛血清、B+5%新生牛血清和E-MEM培养基+10%新生牛血清,细胞 生长密度峰值分别为1.55×10^(5)、2.07×10^(5)和1.30×10^(5)个/cm^(2),统计学分析表明,低血清培养基B+5%新生牛血清达到细胞 生长密度峰值高于低血清培养基A+2%新生牛血清和E-MEM+10%新生牛血清,差异具有统计学意义(P均<0.05);低血清培养基B+5%新生牛血清同B+3%新生牛血清连续培养3代细胞 生长密度差异均无统计学意义(P=0.47、0.07、0.12);使用5层细胞 工厂培养细胞 ,低血清培养基A+2%新生牛血清、B+5%新生牛血清连续培养3代,细胞 生长密度均高于E-MEM+10%新生牛血清;低血清培养基B+3%新生牛血清与低血清培养基B+5%新生牛血清的病毒滴度分别为9.50和9.33 lgCCID_(50)/mL,低血清培养基A+2%新生牛血清和E-MEM+10%新生牛血清的病毒滴度分别为8.50和9.00 lgCCID_(50)/mL。结论低血清培养基适用于培养2BS细胞 增殖HAV,为低血清培养基在甲肝疫苗生产中的应用奠定了基础。 张宏丽 任琦 夏青娟 李春雷 杨利民 徐艳玲关键词:甲型肝炎病毒 增殖 甲型肝炎病毒在人 胚 肺 二倍体 细胞 核酸增殖培养模型的建立 被引量:2 2021年 目的 采用人 胚 肺 二倍体 细胞 (2BS细胞 )培养,结合实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测,开展甲型肝炎病毒(HAV)在2BS细胞 核酸增殖培养模型的建立研究。方法 将不同浓度的HAV活病毒感染2BS细胞 ,分别于感染后0、8、10、14、20d收获HAV感染的细胞 ,应用已建立的HAV核酸检测和抗原检测方法分别检测HAV病毒核酸含量和抗原含量的动态变化。结果HAV在2BS细胞 中可有效复制和扩增,高剂量组以1×10^(4) CCID_(50)/mLHAV感染0d即可检测到HAV核酸,10~20d病毒核酸达到峰值7.607lgcopies/μL;中剂量组以1×10^(2) CCID_(50)/mLHAV感染6d可检测到HAV核酸,6~10d病毒增殖明显(P<0.05),14~20d病毒核酸含量达到峰值7.074lgcopies/μL并趋于稳定;而低剂量组以1CCID_(50)/mLHAV感染后,10d HAV开始增殖,20d病毒核酸含量与中、高剂量组别相近且基本达到峰值;当HAV感染2BS细胞 10 d时,病毒核酸检出拷贝数与感染HAV浓度呈良好的线性关系,可根据标准曲线准确反映样品中的HAV活病毒含量。细胞 培养结合病毒抗原表达也可有效反映HAV的扩增情况,但较病毒核酸的出现呈明显滞后,且当样品中抗原含量低时,至少需要20d以上才可完全检测到病毒抗原的表达。结论 应用2BS细胞 培养和qRT-PCR检测建立了2BS细胞 HAV核酸增殖模型,可快速、准确地反映HAV活病毒在细胞 中的动态感染和增殖情况,可应用于HAV活病毒的快速定量、病毒特性、药物筛选和疫苗评价等相关研究。 闫旭佳 袁亚迪 夏青娟 徐艳玲 王春雨 徐涵禹 张洁关键词:甲型肝炎病毒 抗原检测 QRT-PCR 衰老程度评价生物学指标在人 胚 肺 二倍体 细胞 的筛选研究 被引量:1 2017年 目的:通过在微观结构水平和分子水平检测不同代次人 胚 肺 二倍体 细胞 衰老相关的指标值,筛选出能够系统性评价人 胚 肺 二倍体 细胞 衰老程度的生物学指标。方法:将Walvax-2细胞 分成16个代次,在倒置显微镜下观察不同代次Walvax-2细胞 生长情况及形态学变化;在透射电镜下观察不同代次Walvax-2细胞 生长情况和衰老情况;通过检测SA-β-gal染色阳性率,分析不同代次Walvax-2细胞 β-半乳糖苷酶的表达水平。结果:细胞 可传58代。倒置显微镜下:随细胞 代次的增加,可见颜色逐渐加深,色素积累;透射电子显微镜观察到:P20到P43细胞 正常且骨架结构明显,细胞 核完整,具有较高的核质比,P44和P45开始出现衰老现象,细胞 质色素积聚加深,核膜不同程度内折,P50和P55细胞 衰老更加明显;β-半乳糖苷酶的阳性染色率和细胞 代龄之间呈显著相关(P<0.01)。结论:细胞 形态学变化,β-半乳糖苷酶阳性率变化与Walvax-2细胞 代龄增长显著相关,可选择作为Walvax-2细胞 衰老程度评价的生物学指标。 聂爱婷 马波 胡利平 张秀峰 饶旼 聂胜洁关键词:细胞衰老 细胞形态 Β-半乳糖苷酶 两株新建人 胚 肺 二倍体 细胞 株的细胞 生物学研究 [目的]疫苗接种是能够抵抑人 类及动物病毒感染性疾病最积极有效的办法之一。随着病毒性疾病的不断增多及人 们对病毒性疾病认识清晰度的不断提高,疫苗的需求量也日渐增加。各研发机构致力于新疫苗的研发及生产,在保证疫苗的品种及数量不... 高垚关键词:人二倍体细胞 疫苗 文献传递 人 胚 肺 二倍体 细胞 衰老程度评价生物学指标研究被引量:2 2016年 目的通过细胞 生长曲线、流式细胞 术检测人 胚 肺 二倍体 细胞 不同代次情况,筛选评价人 胚 肺 二倍体 细胞 衰老程度的生物学指标。方法将Walvax-2细胞 分为16个代次,绘制生长曲线,观察不同代次Walvax-2细胞 的生长增殖情况及细胞 活力;通过核酸荧光染料碘化丙啶(PI)作为细胞 活力分析的荧光探针使用流式细胞 仪检测不同代次Walvax-2细胞 周期时相和细胞 凋亡情况。结果 P_(20)和P_(30)的细胞 活力明显强于P_(40)和P_(50)(均P<0.05),P_(40)的细胞 活力明显强于P_(50)(P<0.05);G_0/G_1期所占百分比与细胞 代龄间的增长无相关性(P>0.05),而S期、G_2/M期和细胞 碎片所占百分比与细胞 代龄间的增长显著相关(均P<0.05)。结论通过绘制生长曲线可区分相隔较大代次的Walvax-2细胞 的生长活力,在进行细胞 衰老综合评定时,可通过PI作为荧光探针使用流式细胞 仪检测细胞 周期变化作为Walvax-2细胞 的衰老程度综合评定的指标。 聂爱婷 马波 欧俊兴 胡利平 饶旼 聂胜洁关键词:细胞衰老 细胞周期 细胞生长曲线 人 胚 肺 二倍体 细胞 衰老程度评价生物学指标研究 研究背景:细胞 衰老是随着时间的推移,细胞 增殖能力和生理功能逐渐下降的变化过程,是个体 衰老的重要基础。体 外培养二倍体 细胞 是目前用于疫苗生产最安全的细胞 基质,其使用代次限制在生命周期的三分之二以内。目前对不同代次二倍体 细胞 在... 马立宇关键词:细胞衰老 细胞形态 Β-半乳糖苷酶 端粒酶 细胞周期 细胞生长曲线 文献传递 Ⅲ型登革病毒D9964株在人 胚 肺 二倍体 细胞 KMB17上适应株选育纯化及其增殖动力学研究 被引量:1 2013年 选育出Ⅲ型登革病毒中国株在人 胚 肺 二倍体 细胞 KMB17上的适应株并对其生物学特性和增殖动力学进行研究,为研究登革病毒减毒活疫苗奠定基础。Ⅲ型登革病毒中国株D9964经RT-PCR鉴定型别正确后,进行毒种扩增和滴度测定;以4.0MOI接种KMB17细胞 ,反复传代直至病毒能在细胞 中适应和增殖;连续传10代,选育出KMB17细胞 适应株,经三轮噬斑纯化筛选适应株,微量滴定法检测10代病毒培养液的感染性滴度;免疫荧光法检测纯化病毒株的抗原性;将病毒纯化株接种KMB17细胞 ,取第3~7d细胞 提取RNA,以Real-time PCR检测病毒适应株在细胞 中的增殖动态。结果显示,经适应性培养后Ⅲ型登革病毒中国株D9964能在KMB17细胞 中稳定增殖,经噬斑纯化获得了高纯度的细胞 适应株,病毒保持了原始毒株良好的抗原性;增殖动力学研究显示第5~6d为病毒在细胞 内的增殖高峰期。 赵玉娇 潘玥 阎玲梅 岳耀斐 杨丽娟 陈俊英 马绍辉 施海晶 孙强明关键词:登革病毒 人胚肺二倍体细胞 适应性 增殖动力学 登革病毒在人 胚 肺 二倍体 细胞 KMB17中的适应性及生物学特性研究 登革病毒(dengue virus,DEN)属于黄病毒科黄病毒属中的一个血清型亚群,主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊等媒介昆虫传播,引起登革热(dengue fever,DF)以及发病率和死亡率很高的登革出血热(dengue ... 赵玉娇关键词:登革病毒 人胚肺二倍体细胞 适应性 增殖动力学 文献传递
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胡云章 作品数:176 被引量:277 H指数:9 供职机构:中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 研究主题:疫苗 体液免疫应答 佐剂 铝佐剂 疫苗佐剂 瞿素 作品数:35 被引量:63 H指数:3 供职机构:中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 研究主题:脊髓灰质炎病毒 二倍体细胞 体液免疫应答 感染性滴度 人胚肺二倍体细胞 赵玉娇 作品数:32 被引量:56 H指数:5 供职机构:中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 研究主题:登革病毒 包膜糖蛋白 埃博拉病毒 人胚肺二倍体细胞 登革热病毒 胡凝珠 作品数:141 被引量:174 H指数:7 供职机构:中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 研究主题:疫苗 体液免疫应答 佐剂 铝佐剂 疫苗佐剂 刘国栋 作品数:41 被引量:167 H指数:7 供职机构:北京大学 研究主题:微量元素 二倍体细胞 脊髓灰质炎病毒 中国人 中子活化分析