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miR-18a促进自噬增强鼻咽癌细胞株放疗敏感性的研究被引量:6
2021年
目的:探索miR-18a过表达和抑制表达对鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2放疗敏感性的影响及可能的机制。方法:采用miR-18a过表达质粒miR-18a模拟物和抑制表达质粒miR-18a遏制物及空白对照质粒转染鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2细胞,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(WB)检测其对毛细血管扩张性共济失调症突变(ataxia telangiectasia mutated,ATM)基因和蛋白表达的影响。构建miR-18a过表达和抑制表达的鼻咽癌细胞CNE1和CNE2细胞株。四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测miR-18a过表达和抑制表达联合放疗处理前后对鼻咽癌细胞株生长的影响,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,克隆形成实验检测细胞放疗敏感性,吖啶橙染色结合WB检测细胞自噬水平及自噬相关蛋白表达。采用SPSS 16.0软件进行统计学分析,2组间均数比较采用独立样本t检验。结果:100、200 nmol/L miR-18a模拟物转染CNE1和CNE2细胞48 h后,与对照组相比,ATM mRNA表达受到显著抑制(CNE1相对表达量为0.174±0.139和0.003±0.001,t值为9.939和19470.783;CNE2:相对表达量为0.024±0.008和0.019±0.012,t值为270.230和137.746,P值均<0.001),72 h后,ATM蛋白水平显著下降;100、200 nmol/L miR-18a遏制物转染48 h后,CNE1细胞中ATM转录显著增加(CNE1相对表达量为9.419±2.495和2.500±1.063,t值为-4.427和-41.241,P值均<0.05);CNE2细胞中ATM转录亦显著增加(相对表达量为7.210±0.171和115.875±15.805,t值为-62.789和-12.589,P值均<0.05),72 h后,ATM蛋白水平增高。miR-18a过表达的CNE1和CNE2细胞放疗后与CNE1和CNE2细胞单纯放疗相比,细胞增殖受到明显抑制(P值均<0.05);稳定抑制miR-18a表达与单纯放疗相比,细胞增殖能力增加(P值均<0.01)。100 nmol/L miR-18a模拟物转染联合放疗组与单纯放疗组相比,CNE1细胞凋亡率增加[(22.9±2.1)%比(16.3±1.0)%,t=-4.870,P<0.01]。稳定过表达miR-18a联合放疗与单纯放疗相比,G1期和G2/M期的细胞
常利红姚周周鲍宏伟李越陈晓红赖晓萍黄子真张革化
关键词:鼻咽肿瘤放疗敏感性自噬
丹酚酸B对鼻咽癌细胞株CNE-2增殖、凋亡的影响及机制研究被引量:2
2021年
目的研究丹酚酸B对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测丹酚酸B对鼻咽癌CNE-2细胞的半数抑制浓度(IC50);用IC50浓度的丹酚酸B处理鼻咽癌CNE-2细胞后,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况;在荧光显微镜下应用Hoechst33258荧光染色法观察细胞的凋亡情况;应用流式细胞仪分析细胞凋亡率情况;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的表达水平。结果不同浓度的丹酚酸B对鼻咽癌CNE-2细胞均有抑制作用,并呈浓度依赖性,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),IC50为(56.26±2.13)μg/ml,48 h最显著;Hoechst33258荧光染色发现典型的凋亡细胞核形态学变化;流式细胞仪检测显示实验组细胞的凋亡率高于对照组(P<0.01);与对照组相比,实验组Bax、Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达显著增加,而Bcl-2的蛋白表达显著减少(P<0.01)。结论丹酚酸B能明显抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖,促其凋亡,其机制可能与其阻滞细胞周期的转化并使凋亡相关蛋白表达的改变有关。
蒋学范张大勇胡未鸣浦立苏立众
关键词:鼻咽肿瘤细胞增殖丹酚酸B
不同转移习性鼻咽癌细胞株中外泌体的提取及鉴定
2020年
目的探索不同转移习性鼻咽癌细胞株SUNE-1-5-8F、SUNE-1-6-10B、SUNE-1和正常鼻咽上皮细胞NP69细胞外泌体的表达情况,为进一步研究鼻咽癌的诊断和治疗新方法提供一定的理论基础。方法在2018年5月—2019年6月期间,用Exosome提取试剂盒从SUNE-1-5-8F、SUNE-1-6-10B、SUNE-1和NP69培养上清液分离出外泌体,使用透射电镜进行观察验证外泌体形态,BCA试剂盒测定外泌体蛋白的浓度,蛋白质印迹法(Western blotting)法进行外泌体特异性抗原分子CD63及筏蛋白-1的检测。结果3种鼻咽癌细胞系和正常鼻咽上皮细胞上清液中均分离出泡状物,在透射电镜下呈椭圆形或者圆形的泡状物。SUNE-1-5-8F、SUNE-1-6-10B、SUNE-1和NP69细胞系外泌体蛋白浓度分别为0.778、0.635、0.788、0.576μg/μL;且所有细胞系来源的外泌体经检测均表达特异性抗原分子CD63及筏蛋白-1。结论3种鼻咽癌细胞株SUNE-1-5-8F、SUNE-1-6-10B、SUNE-1和正常鼻咽上皮细胞NP69细胞均产生外泌体。
郭术楠汪庚明张雷营巧玲丁建明周燕周燕周育夫
关键词:鼻咽肿瘤外泌体
细胞周期蛋白依赖性激酶2抑制对鼻咽癌细胞株CNE-2衰老的影响及机制研究被引量:1
2020年
目的研究抑制细胞周期蛋白依赖性激酶2(cyclin dependent kinase,CDK2)对鼻咽癌细胞株CNE-2衰老的影响并探讨其分子机制。方法实验分为Control组、Control siRNA组、CDK2-siRNA组、CVT-313组,分别用PI单染流式细胞仪检测各组细胞增殖情况,衰老相关β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老情况,流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)含量,Annexin-PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况;进一步通过Western blot法检测衰老相关蛋白表达情况。结果鼻咽癌细胞株CNE-2中,CDK2-siRNA组和CVT-313组细胞增殖指数明显降低,衰老细胞增多,活性氧含量增加,与对照组相比较差异具有统计学意义(P<0.05),而细胞凋亡率无显著性变化(P>0.05)。CDK2-siRNA组和CVT-313组p53、p21、p16蛋白表达明显增加,而pRb蛋白表达明显减少。结论抑制CDK2可诱导鼻咽癌细胞株CNE-2的衰老,其机制可能是通过促进衰老相关蛋白的表达来实现的。
蒋学范张大勇浦立苏立众
关键词:鼻咽肿瘤细胞增殖细胞衰老
miR-18a过表达及抑制表达鼻咽癌细胞株的构建被引量:3
2018年
【目的】建立稳定miR-18a过表达及表达的鼻咽癌细胞系,为研究miR-18a在鼻咽癌发生发展中的功能奠定基础。【方法】将miR-18a前体的编码基因片段及miR-18a反义寡核苷酸克隆到慢病毒载体中,DNA测序鉴定;将构建好的载体转染293T细胞,获得重组miR-18a过表达及抑制表达的慢病毒载体,感染鼻咽癌细胞CNE1和CNE2,嘌呤霉素筛选获得稳定干扰miR-18a表达及过表达miR-18a的细胞系,PCR及western blot鉴定。【结果】成功构建真核表达的慢病毒miR-18a干扰载体及过表达载体,滴度均为3×10~8TU/mL;转染miR-18a抑制表达的慢病毒载体的CNE1和CNE2中ATM表达增高;与对照病毒转染相比,转染miR-18a过表达慢病毒载体的CNE1(20.3倍,P<0.01)和CNE2(122.5倍,P<0.01)中miR-18a表达显著增高,靶蛋白ATM表达下调。【结论】成功构建miR-18a慢病毒抑制表达和过表达载体,并获得相应的慢病毒稳转鼻咽癌细胞株
常利红黄子真黄健聪王君陈晓红赖晓萍张革化
关键词:慢病毒鼻咽癌细胞
AQP1在不同转移潜能的鼻咽癌细胞株中的表达被引量:1
2018年
目的:探讨AQP1在不同转移潜能鼻咽癌细胞中表达的差异。方法:利用RT-PCR及Western blot两种方法,检测CNE1、CNE2、5-8F三种不同转移潜能的鼻咽癌细胞株中AQP1的表达情况,并分析AQP1表达与细胞转移潜能的关系。结果:在CNE1、CNE2及5-8F细胞株中均可检测到AQP1的表达。在三种不同转移潜能细胞株中,AQP1的表达量水平有统计学差异(P <0.05)。而且,AQP1的表达水平随着细胞株转移潜能的增高而增加。结论:AQP1的表达水平可能与鼻咽癌细胞的转移潜能密切相关。
覃云英罗宁斌王鹏姬逸男
关键词:鼻咽癌细胞株AQP1RT-PCRWESTERNBLOT
鼻咽癌细胞株中肿瘤干细胞分离鉴定方法及肿瘤多药耐药机制被引量:3
2018年
目的:研究鼻咽癌细胞株中肿瘤干细胞分离鉴定方法及对肿瘤多药耐药机制。方法:取鼻咽癌细胞株(SUNE),进行细胞的培养、传代及鉴定,采用免疫荧光细胞化学技术联合流式细胞仪检测SUNE中CD133^-及CD133^+细胞体外分化能力。利用免疫磁珠分选技术完成CD133^+肿瘤细胞纯化,测定CD133^+细胞体外增殖能力,将其与未分选及CD133^-细胞进行比较。取顺铂、紫杉醇化疗药物,采用CCK^-8法测定CD133^+细胞耐药性。取10只4周龄ICR小鼠,皮下注射鼻咽癌细胞株和普通细胞株,分析耐药性。结果:分离培养的SUNE在含有血清的培养基中呈贴壁生长,并且生长活跃,培养2~3 d后倒置显微镜下显示细胞呈梭形、扁平状,光泽度良好,培养2周左右细胞融合瓶底80.00%;流式细胞仪检测结果显示:约0.35%细胞表面膜存在抗原CD133。免疫细胞化学显示:SUNE细胞贴壁爬行,部分细胞能与SUNE中的CD133^-相互结合,荧光显微镜下显示呈现橙红色,球状;向经免疫磁珠分选后的细胞中加入培养基,细胞呈单细胞,球形,悬浮生长。随着培养时间的不断延长,细胞开始出现团状生长,体积增加,细胞数量增多,培养24 h后细胞开始贴壁生长,培养7 d后呈串状生长;CD133^+肿瘤细胞、CD133^-肿瘤细胞及未分选细胞随着时间的延长细胞均出现增长,且CD133^+肿瘤细胞增殖能力显著高于CD133^-肿瘤细胞及未分选细胞(P<0.05)。10只小鼠均可见瘤体形成,种植鼻咽癌细胞株组的瘤体体积显著大于普通细胞株组(P<0.05)。结论:鼻咽癌细胞中CD133^+对化疗药物的耐药性强。
刘超群
关键词:鼻咽癌肿瘤干细胞多药耐药流式细胞仪鼻咽癌细胞株体外分化
线粒体肌酸激酶1对鼻咽癌细胞株CNE-1顺铂敏感性的作用研究被引量:2
2018年
目的探讨线粒体肌酸激酶1(ubiquitous mitochondrial creatine kinase,CKMT1)在鼻咽癌细胞株CNE-1对顺铂(cisplatin,DDP)敏感性中的影响。 方法瞬转CNE-1得CKMT1过表达细胞或空载体细胞(EV),MTT法绘制生长曲线、计算DDP IC50,不同浓度DDP处理下平板克隆形成实验,流式细胞术检测细胞周期与凋亡,Western Blot检测凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2/C-PARP及转录因子p-STAT3-Tyr705水平。采用GraphpadPad Prism5软件进行统计学处理。 结果CKMT1和空载体细胞的转染效率均达90%以上;前者的增殖速度高于后者;但前者DDP IC50为2.76 μmol/L,显著低于后者的4.60 μmol/L(t=6.91,P〈0.01),且在一定浓度DDP作用下前者的克隆形成率较低;细胞周期在G2/M期阻滞更明显。DDP浓度为2 μmol/L时,CKMT1凋亡率(18.33±0.67)%显著高于EV(11.80±0.70)%(t=6.75,P〈0.01);CKMT1的促凋亡蛋白C-PARP和Bax显著高于EV(t=72.63,P〈0.01;t=4.22,P〈0.05),而凋亡抑制蛋白Bcl-2在CKMT1中的表达显著低于EV(t=49.08,P〈0.01);且p-STAT3-Tyr705水平也更低(t=221.60,P〈0.01)。结论DDP作用下,CKMT1可能通过一定的机制抑制STAT3的活化,进而提高CNE-1对DDP的敏感性。
蓝瑞隆黄菲陈瑞庆王锃陈俊英林经安傅冷西
关键词:鼻咽肿瘤线粒体肌酸激酶顺铂
微小RNA-29c对鼻咽癌细胞株增殖、侵袭的调控作用被引量:2
2017年
miRNA-29c表达异常减少是导致一些恶性肿瘤细胞无限增殖及肿瘤发生、发展的重要因素。Senqupta等采用基因芯片技术研究结果显示微小RNA(miRNA,miR)-29c表达的浓度仅为正常鼻咽上皮细胞的1/5。本研究旨在观察miR-29c在体外对鼻咽癌细胞增殖侵袭能力的影响及体内对肿瘤生长的抑制作用。
金巧智叶文蔚蔡志毅孟易禹黄栋栋李志海
关键词:人鼻咽癌细胞株增殖恶性肿瘤细胞基因芯片技术鼻咽上皮细胞癌细胞增殖
17-AAG联合EGCG对鼻咽癌细胞株增殖和凋亡的影响及机制研究被引量:7
2017年
目的研究17-烯丙胺-17-去甲氧基格尔德霉素(17-allyamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)单药或联合使用对鼻咽癌细胞CNE的凋亡诱导作用,寻找鼻咽癌治疗的新方向。方法 MTT法和荧光染色分别检测CNE增殖抑制率及细胞形态的变化;RT-PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA的表达。结果 (1)17-AAG、EGCG单独作用于CNE细胞24、48、72 h,均有抑制作用,与时间和剂量相关(P<0.01);两者联合抑制作用显著增加,且表现出时间、剂量依赖性(P<0.01)。(2)RT-PCR检测联合用药时Caspase-3和Bax的mRNA表达明显高于单独用药组,Bcl-2 mRNA明显低于单独用药组。结论 17-AAG联合EGCG可显著抑制CNE细胞增殖,其可能与上调Bax和Caspase-3的表达发挥其抗鼻咽癌细胞的生长增殖作用。
庞秋霞何静子赵菊梅许静洪王爱红陈美霓刘涛
关键词:鼻咽肿瘤细胞增殖逆转录聚合酶链反应

相关作者

江浩
作品数:153被引量:665H指数:14
供职机构:蚌埠医学院第二附属医院
研究主题:鼻咽肿瘤 食管肿瘤 鼻咽癌 食管癌 放射疗法
汪庚明
作品数:74被引量:267H指数:8
供职机构:蚌埠医学院第一附属医院
研究主题:鼻咽肿瘤 鼻咽癌 食管癌 转移抑制基因 食管肿瘤
徐洪波
作品数:34被引量:103H指数:6
供职机构:蚌埠医学院第二附属医院
研究主题:鼻咽肿瘤 鼻咽癌 转移抑制基因 人鼻咽癌细胞株 KAI1/CD82
周育夫
作品数:51被引量:232H指数:8
供职机构:蚌埠医学院第二附属医院
研究主题:鼻咽肿瘤 磁共振成像 鼻咽癌 人鼻咽癌细胞株 PBL
张亚军
作品数:37被引量:196H指数:8
供职机构:蚌埠医学院第二附属医院
研究主题:鼻咽肿瘤 鼻咽癌 食管癌 转移抑制基因 PBL