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PRRSV GP5蛋白的噬菌体展示及其动物免疫试验被引量:2
2020年
为了验证猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)结构蛋白GP5的免疫原性,试验根据发表的PRRSV CH-1a株的基因组序列,参照T7选择型展示系统的上下游翻译阅读框,以无信号肽基因片段的GP5基因为模板,进行PCR扩增,扩增产物酶切后与T7噬菌体展示载体T7Select10-3b连接,构建重组噬菌体T7Select10-3b-GP5。对PCR鉴定的阳性克隆进行SDS-PAGE检测蛋白表达情况,Western-blot检测重组噬菌体的免疫原性。将重组噬菌体与石河子大学人兽共患病致病机制与防控实验室保存的四种不同佐剂F1、F2、F3、F4组合并分别对小鼠进行分组免疫,分别为C、D、E、F四组,设生理盐水空白对照组(A组)、商品化疫苗对照组(B组)。用爱德士PRRSV抗体检测试剂盒检测注射疫苗后4周内各组小鼠体内抗体水平,分析其变化情况。结果表明:PCR检测到的目的条带大小约为520 bp,SDS-PAGE检测的蛋白大小为40 ku, T7噬菌体展示的GP5蛋白具有良好的免疫原性。动物免疫试验中,E组小鼠抗体水平良好,基本达到了商品化疫苗的标准,且持续时间达到3周,6个试验组的抗体阳性率分别为0、80%、40%、50%、80%、20%。说明成功构建出了免疫原性良好的重组噬菌体(E组),该重组噬菌体有成为备用疫苗的潜质。
张樊郭嘉赵天艺刘航王鹏雁
关键词:猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒GP5
猪流行性腹泻病毒抗原基因在番茄中的表达及动物免疫试验
我国作为一个农业大国,生猪饲养在我国农业生产中占有举足轻重的地位,关系到国计民生。猪流行性腹泻是目前世界上严重危害养猪业健康发展的一种接触性肠道传染病,其特征表现为腹泻、呕吐、脱水。预防和防治猪流性腹泻病最有效的方法是接...
尹国友
关键词:猪流行性腹泻抗原基因番茄动物免疫试验
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基于C602菌株的羊肠毒血症自制灭活疫苗本动物免疫试验被引量:1
2018年
产气荚膜梭菌能够产生多种外毒素,目前已发现的外毒素达12种,其中α、β、ε、ι为主要致死性毒素也是分型毒素,根据这4种毒素,产气荚膜梭菌分为A^E 5个亚型[1],其中D型产气荚膜梭菌严重危害养羊业,其引起的疾病为羊肠毒血症,该病潜伏期短、发病快、死亡快.
李生庆范玉霞李志宁刘怀新扎西李积良
关键词:羊肠毒血症免疫试验灭活疫苗D型产气荚膜梭菌动物菌株外毒素
牛支原体的生长特性观察及动物免疫试验
牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)是感染牛的一种重要的致病性病原体,能够引起肺炎、乳房炎、耳炎、生殖道炎、关节炎、角膜结膜炎等疾病,统称牛支原体相关疾病(Mycoplasmabovis-asso...
王展慧
关键词:牛支原体灭活疫苗免疫原性
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鸡柔嫩艾美耳球虫SO7基因的原核表达及动物免疫试验被引量:7
2016年
为了研究鸡柔嫩艾美耳球虫SO7基因原核表达重组蛋白的免疫效力,分析其在鸡抗柔嫩艾美耳球虫感染中对鸡平均增重、抗球虫指数(ACI)、减少盲肠病变和卵囊数量中的作用,从柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA作为模板,用RT-PCR扩增出SO7基因片段,再应用DNA重组技术将SO7基因克隆到原核表达载体pET32a(+)中并用IPTG诱导表达。SDS-PAGE结果显示,pET32a(+)-SO7表达的目的蛋白约为40ku,主要以包涵体形式存在。用纯化的重组蛋白进行动物免疫试验显示,SO7重组蛋白在鸡抗柔嫩艾美耳球虫感染中有较好的免疫保护作用,能够显著提高鸡柔嫩艾美耳球虫感染鸡的平均增重和抗球虫指数(ACI),对减少盲肠病变和卵囊数量也有部分作用。
仇保丰宋鸿雁严若峰宋小凯徐立新李祥瑞
关键词:柔嫩艾美耳球虫克隆免疫效力
流感病毒HA基因真核表达载体的构建及动物免疫试验研究
刘焕
文献传递
牛源犬新孢子虫NcSAG1基因重组腺病毒株的构建及动物免疫试验被引量:1
2012年
【目的】构建表达牛源犬新孢子虫NcSAG1基因的重组腺病毒株,并接种Balb/c小鼠,评价重组腺病毒株对Balb/c小鼠的体液免疫和细胞免疫应答水平。【方法】PCR扩增牛源犬新孢子虫NcSAG1基因,构建pMD18-T-NcSAG1克隆质粒和pCR259-NcSAG1重组腺病毒穿梭质粒;将鉴定正确的pCR259-NcSAG1重组腺病毒穿梭质粒依次转化HighQ-1 Transpose-Ad 294和HighQ-1感受态细胞,构建Transpose-Ad-NcSAG1重组腺病毒表达质粒;PacI酶切线性化后,脂质体介导转染QBI-HEK 293细胞包装重组腺病毒Ad5-NcSAG1,应用PCR和Westernblotting技术检测Ad5-NcSAG1及其表达蛋白产物。测定Ad5-NcSAG1重组腺病毒滴度后,接种Balb/c小鼠,测定小鼠血清中IgG特异性抗体和细胞因子IFN-γ、IL-4水平,以此评价重组腺病毒株的免疫应答效果。【结果】扩增的牛源犬新孢子虫NcSAG1基因大小为982bp,与GenBank中发表的NcSAG1(AF132217)核苷酸序列的同源性为99.2%;经PCR和Western blotting检测,重组腺病毒Ad5-NcSAG1在QBI-HEK 293细胞中包装成功,表达蛋白的分子量为33kD,具有较好的反应原性;测得重组腺病毒Ad5-NcSAG1滴度为1010TCID50/mL,Ad5-NcSAG1接种Balb/c小鼠后,能够诱导产生高水平的IgG特异性抗体和IFN-γ、IL-4细胞因子。说明Ad5-NcSAG1重组腺病毒对Balb/c小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫应答。【结论】成功构建了牛源犬新孢子虫NcSAG1基因的重组腺病毒株,该毒株能够诱导Balb/c小鼠产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答,为犬新孢子虫新型疫苗的临床试验奠定了基础。
贾立军张守发
关键词:犬新孢子虫重组腺病毒动物免疫
猪瘟病毒E2基因自杀性DNA疫苗的构建及动物免疫试验被引量:4
2011年
从含有猪瘟病毒(CSFV)Shimen株E2全长基因的重组质粒pMD18-T-E2上扩增得到带有BamHⅠ酶切位点的E2基因片段,构建重组克隆质粒pMD19-T-E2。用BamHⅠ酶切pMD19-T-E2和"自杀性"DNA疫苗表达载体pSCA1,构建"自杀性"DNA疫苗重组质粒pSCA1-E2。对目的基因E2的大小、插入位置、方向和读码框经PCR、酶切和序列测定进行鉴定。用纯化的阳性质粒pSCA1-E2转染PK-15细胞,转染后48 h荧光抗体法检测E2蛋白的表达;纯化的pSCA1-E2质粒分别免疫小鼠(10μg/只)和试验猪(600μg/头),二免后分别检测小鼠脾淋巴细胞刺激指数和猪血清抗猪瘟特异性抗体水平。结果表明,构建的重组质粒中E2基因的大小、插入位置、方向和读码框均正确,获得了重组表达质粒pSCA1-E2;转染后48 h可检测到转染的PK-15细胞中E2蛋白的表达。免疫小鼠产生较高水平的淋巴细胞刺激指数,免疫猪可检测到抗CSFV特异性血清抗体;表明构建的pSCA1-E2重组质粒能激发实验动物免疫反应。
郭抗抗温肖会汤智慧侯勃张彦明谢林红王晶钰
关键词:猪瘟病毒E2基因动物免疫试验
PCV-2 ORF2蛋白在杆状病毒表面的展示及动物免疫试验
猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)是断奶仔猪多系统衰竭综合征(Post-weaning multisystemic wasting syndrome, PMWS)的主要病原,...
邢福珊
关键词:猪圆环病毒ORF2基因免疫试验
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表达猪瘟病毒E2蛋白重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株的构建及动物免疫试验被引量:9
2011年
为了构建表达猪瘟病毒E2蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株,亚克隆猪瘟病毒E2基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建了重组质粒pYA3341-E2。将该重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(缺失asd、cya、crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-E2),并对重组菌表达的E2蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析、测定其在体内外的稳定性、生长曲线、安全性及动物免疫试验。结果显示,重组菌能表达E2蛋白且表达的蛋白能与猪瘟病毒阳性血清特异性结合。在体外营养选择压力下,重组菌株在体外可稳定地携带重组质粒传代繁殖,在体内可稳定地定居于肠系膜淋巴结和脾。小鼠口服试验证实重组菌无毒性,安全可靠。动物免疫试验表明,口服重组菌免疫猪产生了抗E2蛋白抗体。淋巴细胞增殖试验表明,重组菌能诱导机体产生较强的细胞免疫应答。结果表明,成功构建了能稳定表达猪瘟病毒E2蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,为研究猪瘟口服基因工程疫苗奠定了基础。
许信刚王丹童德文
关键词:猪瘟病毒E2蛋白减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗

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戚中田
作品数:572被引量:1,112H指数:15
供职机构:第二军医大学
研究主题:丙型肝炎病毒 感染药物 HCV 庚型肝炎病毒 丙型肝炎
赵平
作品数:288被引量:356H指数:9
供职机构:第二军医大学
研究主题:感染药物 丙型肝炎病毒 病毒 黄热病毒 西尼罗病毒
邵军军
作品数:255被引量:504H指数:13
供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所
研究主题:口蹄疫病毒 口蹄疫 非洲猪瘟病毒 兽用药物 药物
常惠芸
作品数:393被引量:902H指数:15
供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所
研究主题:口蹄疫病毒 口蹄疫 非洲猪瘟病毒 兽用药物 药物
许信刚
作品数:201被引量:700H指数:12
供职机构:西北农林科技大学动物科技学院
研究主题:原核表达 免疫原基因 抗体 间接ELISA 猪瘟病毒