公共文化服务平台

搜索到25891篇“ 原核表达和纯化“的相关文章

一种人GPC3蛋白及其原核表达和纯化方法: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种人GPC3蛋白及其原核表达和纯化方法；本发明提供的方法，主要包括构建pET32a‑GPC3蛋白表达质粒、将pET32a‑GPC3蛋白表达质粒转化、培养表达TrxA‑GPC3蛋白、纯化T...; 赵肃清梁锦慧龚鑫

人CSF3蛋白的原核表达和纯化及其亚细胞定位: 2024年; 目的粒细胞集落刺激因子(CSF3)作为免疫调控中的重要细胞因子,在中性粒细胞增殖分化的调控方面发挥关键作用。然而,在病原菌感染中CSF3的调控机制仍不清楚。本研究旨在通过原核表达人CSF3,并观察其在HEK-293T细胞中的亚细胞定位,为重组CSF3药物开发以及揭示其在病原菌感染和免疫调控中的作用机制奠定基础。方法基于人CSF3的生物信息学分析,分别通过QuikChange和基因克隆获得CSF3 pGlO1和CSF3-pmCherry两种重组质粒。前者在大肠埃希菌原核表达系统中表达,并通过镍离子亲和层析和凝胶过滤层析进行蛋白纯化。后者通过jet-PEI试剂转染到HEK-293T细胞中,48 h后通过荧光共聚焦显微镜观察,确定其亚细胞定位。结果在原核系统中成功表达人CSF3蛋白,其相对分子质量为18.8×10^(3)。该蛋白的溶解性良好,PP酶酶切后蛋白浓度较高,但蛋白性质相对不稳定,对pH值和温度敏感,容易发生聚集和降解。将荧光融合质粒转染到HEK-293T细胞中48 h后观察,人CSF3-pmCherry蛋白定位在细胞质内,呈现出特定的定位和分布模式。结论成功构建人CSF3原核表达系统,获得纯度较高的CSF3蛋白。通过荧光融合技术确定CSF3-pmCherry蛋白主要定位在HEK-293T细胞质。为重组CSF3药物的开发及其在病原菌感染和免疫调控中的作用机制研究奠定了基础。; 张平李贺刘晓宇李冰清岳盈盈; 关键词：粒细胞集落刺激因子原核表达蛋白纯化亚细胞定位感染免疫

猫干扰素γ的可溶性原核表达和纯化方法及应用: 本发明提供了猫干扰素γ的可溶性原核表达和纯化方法及应用，属于生物基因工程领域。该方法包括的步骤有：⑴FeIFN‑γ蛋白的信号肽序列和理化性质分析；⑵原核表达质粒pET28a‑SUMO‑FeIFN‑γ的构建；⑶含重组质粒的...; 魏衍全张勇成述儒武小椿任丽君

重组虹鳟I型干扰素、其原核表达和纯化方法及应用: 本发明公开了一种重组虹鳟I型干扰素、其原核表达和纯化方法及应用，原核表达和纯化方法包括虹鳟I型干扰素基因的获取、虹鳟I型干扰素基因的筛选、原核表达载体的构建与筛选和重组蛋白的表达与纯化等几个步骤，制备得到的虹鳟I型干扰素...; 魏文燕李良玉汪开毓刘家星杨马陈霞杨倩唐洪刘韬张小丽陈健杨壮志

扬子鳄α型干扰素蛋白的原核表达和纯化及其多克隆抗体的制备: 2022年; 为了进一步研究扬子鳄IFN-α,构建原核表达载体pET32a-IFN,导入大肠杆菌表达系统后诱导表达,并纯化靶蛋白。使用纯化重组蛋白作为抗原,加入佐剂乳化后免疫3只雌性的6周龄BALB/c小鼠,免疫后第35天对小鼠采血分离血清并测定效价。结果显示,成功构建原核表达载体pET32a-IFN,Western-blot鉴定显示,扬子鳄IFN-α重组蛋白成功表达,大小与预期相符,约为43 ku;免疫后的1号和2号小鼠所产生的多克隆抗体效价均为1∶51200,3号小鼠所产生的多克隆抗体效价为1∶25600,具有良好的特异性,这为后续扬子鳄IFN-α抗病毒的研究奠定了基础。; 白艺兰费荣梅; 关键词：IFN-Α 扬子鳄原核表达蛋白纯化多克隆抗体

猫干扰素γ的可溶性原核表达和纯化方法及应用: 本发明提供了猫干扰素γ的可溶性原核表达和纯化方法及应用，属于生物基因工程领域。该方法包括的步骤有：⑴FeIFN‑γ蛋白的信号肽序列和理化性质分析；⑵原核表达质粒pET28a‑SUMO‑FeIFN‑γ的构建；⑶含重组质粒的...; 魏衍全张勇成述儒武小椿任丽君

塔城病毒1重组核蛋白的原核表达和纯化被引量：1: 2021年; 目的通过原核表达系统表达可溶性塔城病毒1(Tacheng tick virus 1,TcTV-1)重组融合核蛋白(nucleoprotein, NP)并纯化获得纯度高和均一度好的目的蛋白。方法利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)从经密码子优化的重组质粒中扩增TcTV-1核蛋白的编码基因,构建带有小分子泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier, SUMO)融合标签的重组质粒pET-21a-TcTV-1-NP,转化入表达菌株BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导高表达量菌株。采用镍离子金属鳌合亲和层析介质(Ni-NTA)亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析提纯目的蛋白。结果经PCR扩增的目的基因TcTV-1核蛋白和质粒载体pET-21a进行重组质粒构建,电泳结果显示,在约6 000 bp处可见条带,与重组质粒pET-21a-TcTV-1-NP大小相一致;重组质粒转入大肠埃希菌BL21(DE3),在16℃,0.2 mmol/L IPTG诱导下表达出大量可溶性蛋白,收集并重悬菌体后,经低温高压和超声破碎后,细菌上清液经Ni-NTA亲和层析纯化,在250 mmol/L咪唑洗脱液中获得目的蛋白;去除融合标签后,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)结果显示在相对分子质量为50 000附近处出现明显条带,与目的蛋白相对分子质量为48 800相一致;目的蛋白通过阳离子交换层析,得到1个蛋白洗脱峰;经凝胶过滤层析再次纯化,收集相应的蛋白洗脱峰,经SDS-PAGE结果显示目的蛋白大小正确,纯度较高。结论 TcTV-1重组融合核蛋白在大肠埃希菌内以可溶性形式成功表达,为进一步研究TcTV-1核蛋白的作用机制和相应血清学检测方法的开发提供了重要的基础。; 李赞杜珊王伟佳孙力涛; 关键词：布尼亚病毒核蛋白蛋白纯化

扬子鳄Mx基因的原核表达和纯化及其多克隆抗体的制备被引量：2: 2020年; 扬子鳄Mx以蛋白质的形式发挥其抗病毒功能,本试验通过构建pET28a-Mx质粒,将其转化入大肠杆菌感受态细胞中,用IPTG诱导其进行蛋白大量表达,并纯化蛋白。将纯化好的蛋白作为抗原,与弗氏佐剂充分乳化,免疫6周龄的BALB/c雌性小鼠,4次免疫后提取其血清,测定效价。应用Western-blot检测制备的鼠抗扬子鳄Mx多克隆抗体的特异性。结果显示,扬子鳄Mx蛋白原核表达载体构建成功,并且应用切胶纯化的方式成功纯化了该蛋白。制备的鼠抗扬子鳄Mx多克隆抗体的效价达1∶51 200以上。本试验研究结果为进一步研究扬子鳄Mx蛋白的抗病毒功能提供了物质条件。; 苏玉鑫费荣梅; 关键词：MX 扬子鳄原核表达蛋白纯化多克隆抗体

重组虹鳟I型干扰素、其原核表达和纯化方法及应用: 本发明公开了一种重组虹鳟I型干扰素、其原核表达和纯化方法及应用，原核表达和纯化方法包括虹鳟I型干扰素基因的获取、虹鳟I型干扰素基因的筛选、原核表达载体的构建与筛选和重组蛋白的表达与纯化等几个步骤，制备得到的虹鳟I型干扰素...; 魏文燕李良玉汪开毓刘家星杨马陈霞杨倩唐洪刘韬张小丽陈健杨壮志

新发猪圆环病毒3型Cap蛋白的原核表达和纯化被引量：8: 2018年; 为制备新发猪圆环病毒3型(PCV-3)衣壳蛋白(Cap)的抗原,在大肠杆菌中表达Cap蛋白,并对其进行纯化。通过PCR扩增去除核定位信号区的Cap136—645基因,构建重组表达质粒pET30a(+)-Cap136—645,转化到E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达,然后通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析进行鉴定,并纯化Cap136—645蛋白。结果表明,成功构建了pET30a(+)-Cap136—645重组表达质粒,且可在E.coli BL21(DE3)感受态细胞中可大量表达,表达的重组蛋白主要以包涵体形式表达,分子质量约为27.5 ku,纯化的蛋白质质量浓度高达1.28μg/μL,且条带单一。; 连凯琪周玲玲张明亮王英杰张慢宋玉伟; 关键词：包涵体原核表达蛋白质纯化

加载更多 ∨

相关作者

用户反馈

相关作者

用户登录

用户反馈