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杨树叶片蛋白质双向电泳图谱的建立被引量：2: 2020年; [目的]探究适用于杨树叶片蛋白质组学研究的双向电泳体系,建立杨树叶片蛋白质的双向电泳图谱。[方法]本研究以小黑杨(Populus simonii×P. nigra)叶片为材料,对小黑杨叶片双向电泳体系的2D裂解液、蛋白的纯化、IPG胶条的pH范围、蛋白上样量、等电聚焦时间和SDS(Sodium Dodecyl sulfate)平衡时间进行优化。利用优化后的双向电泳体系分别对小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质进行双向电泳实验。[结果]采用2D裂解液Ⅱ对小黑杨叶片蛋白质进行溶解,可显著提高蛋白的溶解性,双向电泳图谱中可分辨出326个蛋白质,比采用2D裂解液Ⅰ溶解的蛋白样品多209个蛋白质。通过蛋白裂解液提取小黑杨叶片蛋白质,利用2D clean-up试剂盒法对蛋白样品进行纯化,所得的双向电泳图谱背景清晰、蛋白质的分离效果较好。小黑杨叶片蛋白质主要集中在pH 4~7内,选用24 cm、pH 4~7的线性IPG胶条进行双向电泳,可获得分离效果较好的393个蛋白质。蛋白上样量提高至1 mg时,可分辨的蛋白质的个数明显增加,由326个增加至454个。10 000V的等电聚焦时间为13 h,SDS平衡时间为40 min时可得到背景清晰、蛋白质个数多、分辨率较高的双向电泳图谱;采用优化后的双向电泳体系对小黑杨、大青杨(Populus ussuriensis Kom.)和84 K杨(Populus alba×P.glandulosa)叶片蛋白质进行双向电泳实验,分别可检测到531、828、525个蛋白质,且蛋白质分离效果好、图谱分辨率高。[结论]优化后的双向电泳体系提高了小黑杨叶片蛋白质双向电泳图谱的分辨率和重复性,采用优化后的双向电泳体系成功的建立了小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质的双向电泳图谱,该体系适用于小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质组学的分析,为杨树叶片蛋白质组学的研究奠定了基础。; 索慧英郑密卢晗曲冠证李莹; 关键词：小黑杨蛋白质双向电泳

结核肺组织与正常肺组织蛋白质组双向电泳图谱的差异分析: 2019年; 目的对结核肺组织与正常肺组织双向电泳图谱进行比较分析,筛选差异表达蛋白质。方法利用双向电泳分离结核组及正常组总蛋白质,并通过计算机图像分析软件分析电泳图谱。结果在结核肺组织中检测有效蛋白点数为(190±11)个,正常肺组织中检测有效蛋白点数为(179±5)个。发现两者间共有15个差异蛋白点,蛋白点分子量(Mr)主要分布于15kD～80kD,PI为3～10。4个点在病灶组织中表达上调,11个点在病灶组织中表达下调。结论通过双向凝胶电泳和图像分析技术对结核肺组织及正常肺组织蛋白质组进行研究,获得了结核组与正常组的差异蛋白点,为进一步利用质谱分析技术做差异蛋白质鉴定奠定了基础,并为肺结核的早期诊断、发病机制探索、病情监测提供依据。; 薛丽京刘志辉杨瑜徐宁刘燕刘家杰肖泽林; 关键词：结核蛋白质组学

人良性乳腺病血清双向电泳图谱的建立和分析: 2019年; 目的:利用双向电泳联合质谱技术,筛选健康人与良性乳腺病患者的血清差异表达蛋白,以期初步筛查良性乳腺病早期诊断的肿瘤标志物。方法:收集健康人、良性乳腺病患者血清各10例,筛选双向电泳实验条件,在相同的实验条件下分离血清蛋白质,利用PDQuest软件初步筛选健康人组和良性乳腺病组表达差异的蛋白点,并对差异蛋白点进行质谱鉴定。结果:初步建立健康人、良性乳腺病血清双向电泳图谱,PDQuest软件分析2-DE电泳结果,检测出12个显著差异蛋白点。最终通过质谱鉴定出1个表达差异的蛋白点,对应两种蛋白质为Rho相关蛋白激酶1和角蛋白10。结论:Rho相关蛋白激酶1和角蛋白10可能成为良性乳腺病的早期诊断标志物。; 张晨曦刘晓燕张春燕张青甘淋; 关键词：蛋白质组学血清诊断标志物

吗啡耐受大鼠脊髓蛋白质组双向电泳图谱的建立与差异蛋白鉴定被引量：1: 2019年; 目的:建立吗啡耐受大鼠腰段脊髓组织蛋白质组双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)图谱,比较分析吗啡耐受大鼠腰段脊髓组织中蛋白质组的变化和差异表达,鉴定出差异表达的蛋白质点并进行验证。方法:将16只鞘内置管雄性SD大鼠随机分为吗啡耐受组(MT组,n=8)和生理盐水组(NS组,n=8),取其腰段脊髓组织蛋白以固相pH梯度等电聚焦(immobilized pH gradients isoelectric focusing,IPGIEF)为第一向,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electroporesis,SDS-PAGE)为第二向进行2-DE,应用PDQuest分析软件对考马斯亮蓝染色的2-DE图谱进行图像分析,对差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrixassisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析,并利用Mascot查询软件搜索SwissProt数据库进行生物信息学分析。采用蛋白质印迹法验证部分差异蛋白。结果:MT组和NS组大鼠脊髓组织2-DE图谱中各分离出约1 000个清晰的蛋白质点,其中明显差异表达的蛋白有36个。采用MALDI-TOF-MS分析,并利用Mascot查询软件搜索Swiss-Prot数据库,共搜索到14个蛋白质,与NS组比较,MT组中表达下调的蛋白质点有2个,表达上调的蛋白点有12个。采用蛋白质印迹法对其中的NADH脱氢酶及伽玛烯醇化酶蛋白质点进行验证,结果与蛋白质组学结果一致。结论:初步建立了吗啡耐受大鼠脊髓组织蛋白质组双向电泳图谱,证明吗啡耐受可以引起脊髓中多种蛋白质的表达改变。; 和立穹宋宗斌邢曼玉李正弈棋吴璟邓美玲李茂玉郭曲练邹望远; 关键词：吗啡耐受 NADH脱氢酶

滩羊羊毛蛋白质双向电泳图谱体系的建立及优化被引量：4: 2018年; 为建立宁夏滩羊羊毛蛋白质双向电泳体系,比较分析了滩羊羊毛蛋白质不同上样量、不同pH值范围的IPG胶条以及聚焦参数对羊毛蛋白质双向电泳的影响。结果表明:使用TCA/丙酮沉淀法对羊毛蛋白进行处理,上样量600μg,选择pH值为4~7的IPG胶条,聚焦时间90 000 Vhr,12%SDS-PAGE凝胶进行双向电泳,经考马斯亮蓝染色,用Images-Scanner扫描,所得到的滩羊羊毛较清晰的2-DE图谱较好,为后续滩羊羊毛的差异蛋白质组学研究建立了条件。; 白玲荣杨佐青陶金忠; 关键词：滩羊羊毛双向电泳蛋白质组

2种预处理对玉米组织全蛋白质双向电泳图谱的影响被引量：1: 2018年; 为探索适用于双向电泳分析的玉米组织全蛋白质提取的最佳方法,建立适用于玉米组织的全蛋白质双向电泳体系,以玉米叶片和花粉为材料,在相同条件下采用PDQuest分析,分别比较了丙酮预处理和TCA/丙酮预处理玉米组织对全蛋白质双向电泳图谱的影响。结果表明,丙酮预处理和TCA/丙酮2种预处理提取法在玉米叶片中分别检测到634个和540个清晰的蛋白质点,在玉米花粉中分别检测到410个和320个清晰的蛋白质点。丙酮预处理的玉米组织有少量拖尾,蛋白质点丰度高,适合做质谱分析;TCA/丙酮预处理的玉米组织拖尾较轻,蛋白质点丰度较低,适合做蛋白质差异分析。; 安素妨侯锦娜王艳鲁丹丹李保全; 关键词：预处理玉米丙酮

乳杆菌胞外蛋白提取鉴定与双向电泳图谱建立被引量：1: 2016年; 采用三氯乙酸(TCA)-丙酮沉淀法提取乳杆菌胞外蛋白并进行了优化,通过SDS-PAGE分析了该方法用于7株乳杆菌胞外蛋白的提取效果,同时对乳杆菌不同生长期胞外蛋白的分泌特性进行了研究,采用MALDI-TOF/TOFMS鉴定了胞外蛋白,最后通过双向电泳(2-DE)分析了L.paracasei L14的胞外蛋白组。结果表明:采用终质量分数为6%的TCA提取乳杆菌胞外蛋白效果最好,并且具有通用性;从乳杆菌稳定期提取出种类较多的胞外蛋白,成功鉴定出L.paracasei SW2胞外蛋白中3个蛋白质;使用半合成培养基培养乳杆菌,可以提取出符合2-DE样品纯度要求的胞外蛋白,从L.paracasei L14胞外蛋白组2-DE图谱上检测到(130±10)个蛋白质点,约占L.paracasei预测分泌蛋白组的46%。; 赵伟郭慧媛任发政陈尚武; 关键词：乳杆菌胞外蛋白蛋白质组双向电泳图谱

绵羊卵泡液双向电泳图谱构建与差异蛋白质组学分析: 绵羊多年来一直是新疆畜牧养殖的主要畜种，除了推广科学的饲养技术外，提高绵羊繁殖能力是促进养羊业发展的主要途径。绵羊的快繁技术体系中，获得高质量的卵母细胞及提高卵母细胞体外发育成熟的能力是体外胚胎生产技术的关键。卵泡液为卵...; 陈莹; 关键词：绵羊卵泡液双向电泳图谱差异蛋白质; 文献传递

干旱胁迫下马铃薯茎段蛋白的双向电泳图谱分析被引量：5: 2016年; 本研究以青海省马铃薯品种"青薯9号"无菌苗为材料,利用10%PEG-6000溶液模拟干旱胁迫,运用双向电泳技术,对干旱胁迫后的马铃薯茎段蛋白进行差异蛋白组学分析。结果表明:无菌苗在10%PEG-6000溶液模拟干旱胁迫下,其茎段蛋白表达发生了显著变化:其中共有139个蛋白点得到匹配,检测出127个差异表达的蛋白点,108个表达量表现为显著上调,12个显著下调,得到7个新增蛋白。这表明,在干旱胁迫环境条件下,马铃薯为了响应水分亏缺可能通过调控相应的代谢路径和水平以提高自身对胁迫环境的适应性。; 李伟王芳王芳; 关键词：马铃薯双向电泳蛋白质组学干旱胁迫

太阴病脾阳虚证患者唾液分泌型IgA含量变化及舌苔蛋白双向电泳图谱研究被引量：1: 2016年; 目的:探讨脾阳虚证和正常人口腔唾液分泌型Ig A含量变化及舌苔蛋白SDS-PAGE电泳图谱差异,进而从免疫及蛋白表达方面揭示脾阳虚证的特征变化规律。方法:参照《中药新药临床指导原则》的临床实施标准,将确诊的脾阳虚证患者及正常人,纳入本实验。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定分泌型Ig A含量及采用蛋白双向电泳方法对舌苔蛋白电泳图谱进行差异分析。结果:分泌型Ig A含量与正常人比较有显著差异(P<0.05);而舌苔蛋白双向电泳图谱与正常人比较,两组间存在21个具有明显表达差异的蛋白斑点。结论:脾阳虚证患者口腔免疫水平显著下降是脾阳虚证的基本特征之一。脾阳虚证患者和正常人舌苔蛋白表达确实存在差异。; 姜冬云魏巍罗霞; 关键词：脾阳虚证分泌型IGA SDS-PAGE电泳

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