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水稻草状矮化病毒外壳蛋白CP自身互作研究: 2025年; 【目的】明确水稻草状矮化病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)外壳蛋白CP的自身互作,为揭示CP蛋白在RGSV侵染中的功能提供理论依据。【方法】利用酵母双杂交(Y2H)技术鉴定RGSV CP与CP蛋白之间的互作。提取感染RGSV水稻叶片的总RNA,通过RT-PCR扩增得到CP基因。将CP基因分别构建到酵母表达载体pGBKT7和pGADT7上,利用菌液PCR鉴定阳性克隆。将酵母质粒组合pGBKT7-CP/pGADT7、pGBKT7-CP/pGADT7-CP、阳性对照pGADT7-T/pGBKT7-53、阴性对照pGADT7-T/pGBKT7-Lam分别转化到酵母感受态细胞Y2HGold中,先后涂布于缺陷型培养基SD/-Leu/-Trp和SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-gal上。通过观察酵母细胞在缺陷培养基上的生长和显色情况鉴定CP蛋白的毒性、自激活活性和自身互作关系。利用亚细胞定位和双分子荧光互补(BiFC)鉴定CP在本氏烟中的定位及互作。将CP构建到植物瞬时表达载体pEarleyGate101(101)、pEarleyGate202-YN(YN)、pEarleyGate202-YC(YC)上,并利用菌液PCR鉴定阳性克隆。将阳性克隆101-CP、YN-CP、YC-CP、空载体YN、YC分别转化到农杆菌GV3101中。将含阳性质粒101-CP的农杆菌单独注射本氏烟叶片;将含阳性质粒YN-CP/YC-CP、阴性对照YN-CP/YC、YN/YC-CP的农杆菌共注射本氏烟叶片;利用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的发光和定位。【结果】RT-PCR扩增得到CP基因,其大小为978bp。成功构建酵母表达载体pGBKT7-CP和pGADT7-CP。含质粒pGBKT7-CP/pGADT7、pGBKT7-CP/pGADT7-CP、阳性对照和阴性对照的酵母菌均能在缺陷培养基SD/-Leu/-Trp平板上生长,且含质粒pGBKT7-CP/pGADT7的酵母菌的生长情况与对照一致,说明CP蛋白对酵母菌无毒性。但仅含质粒pGBKT7-CP/pGADT7-CP的酵母菌和阳性对照可在缺陷培养基SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-gal平板上生长并显色,表明CP蛋白无自激活活性,且CP蛋白在酵母细胞中能够自身互作。成功构建CP基因的植物表达载体;亚细胞定位结果显示,CP蛋白主; 胡昱颛程淑媛王全兴杜磊张金艺高欣语刘冰蒋军喜熊桂红; 关键词：外壳蛋白酵母双杂交亚细胞定位

番茄褪绿病毒外壳蛋白多克隆抗体的制备和应用: 2025年; 为建立番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)的快速检测技术,通过RT-PCR技术克隆病毒的主要外壳蛋白(Coat protein,CP)基因,利用Gateway技术将其重组至原核表达载体中,转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21菌株中诱导表达,将纯化后的CP作为抗原免疫日本大耳兔制备ToCV CP多克隆抗体。间接ELISA显示ToCV CP多克隆抗体的效价为1∶12 800;Western blot和田间试验结果显示多克隆抗体有很好的特异性和灵敏度。ToCV CP多克隆抗体可用于田间ToCV的检测。; 伍维兰聂三妹张坤鲁洲李战彪季英华郭灵芳章松柏; 关键词：原核表达多克隆抗体

番茄匍柄霉真菌病毒外壳蛋白SlAV1-CP在提高植物防御能力中的应用: 本发明涉及生物领域，特别是涉及番茄匍柄霉真菌病毒外壳蛋白SlAV1‑CP在提高植物防御能力中的应用。本发明提供的番茄匍柄霉真菌病毒外壳蛋白SlAV1‑CP、编码基因SlAV1‑CP或含编码基因SlAV1‑CP的生物材料能...; 周倩张岩秦玉芝熊兴耀

槟榔黄叶病毒1外壳蛋白的互作蛋白筛选: 2024年; 为明确槟榔黄化病致病机理,探究槟榔黄叶病毒1(areca palm leaf yellowing virus 1,APLYV 1)病毒与宿主蛋白之间相互作用的机制,本研究以槟榔叶片为材料,构建槟榔cDNA酵母双杂交文库,以APLYV 1的外壳蛋白(coat protein,CP)为诱饵,构建诱饵载体pGBKT7-CP,采用酵母双杂交技术,从槟榔cDNA文库中筛选与其互作的蛋白。结果表明,成功构建槟榔酵母文库,文库容量达1.1×10^(7)以上,重组率为100%,插入片段平均长度>1000 bp。成功构建诱饵载体pGBKT7-CP,通过自激活实验检验,阳性对照在四缺培养基平板上能正常长菌且显蓝,阴性对照和实验组在二缺培养基平板上能正常长菌,在三缺和四缺培养基平板上未长菌,表示构建成功的重组诱饵载体无自激活活性,可用于筛库实验。共筛选出13个阳性克隆,经NCBI网站与槟榔转录组库进行比对,最终得到10个候选槟榔蛋白,包含sHSP(small Heat Shock Protein)与DnaJ蛋白等。选择DnaJ蛋白,通过理化性质分析和蛋白二级结构预测,发现该槟榔基因全长1035 bp,蛋白理论分子量为37.9 kD,等电点pI约为5.05,疏水性蛋白,其二级结构由无规则卷曲(49.13%)和α-螺旋(25.87%)构成,不存在信号肽,无跨膜结构域,主要定位在细胞核内。本研究结果为进一步研究APLYV 1蛋白功能和表达调控机制提供依据。; 邢增宇赵瑞白曹先梅王洪星; 关键词：热休克蛋白

腺病毒外壳蛋白衍生递送载体: 本发明涉及腺病毒外壳蛋白衍生递送载体。具体地，本发明涉及新的基于腺病毒外壳蛋白的递送载体。它们基于修饰的五邻体基原体，其组装成VLP。可以修饰五邻体基蛋白的暴露区域以允许VLP特异性结合任何靶标和/或包含任何所需的肽表位...; I·伯杰F·加尔佐尼P·芬德

猕猴桃黄化环斑病毒外壳蛋白的功能研究: 中国是全球猕猴桃产量最高、种植面积最大的国家。然而,随着猕猴桃产业的迅速发展,猕猴桃病毒病的危害也日益严重。本实验室在陕西省猕猴桃主产区采集样本,陆续鉴定了多种侵染猕猴桃的新病毒。其中,猕猴桃黄化环斑病毒(Actinid...; 张国丁; 关键词：CP F-BOX蛋白

中国小麦花叶病毒(CWMV)外壳蛋白(CP)特异性抗体的制备与应用: 2024年; 中国小麦花叶病毒(CWMV)是浙江省农业科学院发现并鉴定的一种土传病毒,其RNA2编码的外壳蛋白(CP)在病毒侵染过程中发挥重要功能。为了检测该蛋白表达并分析其生物学功能,该研究采用RT-PCR方法从感染CWMV小麦病叶中扩增获得CP基因,并通过In-Fusion技术构建了CWMV CP重组表达载体,将其导入BL21(DE3)菌株诱导表达;原核表达的重组CP蛋白经镍柱亲和层析纯化后注射免疫家兔,收集抗血清经亲和层析纯化获得CP多克隆抗体。Dot-ELISA、ID-ELISA、Western blot显示,该抗体不仅对CWMV具有高度的特异性,而且其效价高达1∶2.048×10^(7)、灵敏度达6.25×10^(-2)ng。应用该抗体采用Dot-ELISA、Western blot方法检测田间小麦样品显示其可用于CWMV的准确诊断,这为CWMV病毒病检测、CP定量分析及其功能研究奠定了基础。; 沈峥嵘戴远兴郭留明汪芷瑶张恒木; 关键词：外壳蛋白重组蛋白多克隆抗体

ACLSV外壳蛋白与梨两种E3泛素连接酶互作及亚细胞定位: 2024年; 为深入了解苹果褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)与寄主植物的互作特性,构建了表达该病毒外壳蛋白(coat protein,CP)的诱饵载体pGBKT7-CP,采用酵母双杂交技术,从‘红香酥’梨cDNA文库中筛选出与ACLSV CP潜在互作的33种寄主因子。酵母双杂交和双分子荧光互补试验验证了CP与来自梨的两种RING型E3泛素连接酶(命名为MIEL和BOI)互作。亚细胞定位分析表明,CP与BOI具有相似的胞间连丝和细胞核分布特点,MIEL主要分布在内质网和细胞核。双分子荧光互补试验结果显示,CP与BOI互作不改变二者的亚细胞分布,而CP与MIEL互作信号分布与MIEL亚细胞定位相似。构建了这3种蛋白的截短突变体,发现含zf-CHY结构域(1~99aa)的MIEL截短突变体可以与CP互作,而仅全长BOI可以与CP互作,CP截短突变体不能与这两种寄主蛋白互作。; 邱辉朱德娟张永乐高玉洁李柳王国平王国平; 关键词：苹果褪绿叶斑病毒外壳蛋白酵母双杂交 E3泛素连接酶亚细胞定位

番茄匍柄霉真菌病毒外壳蛋白SlAV1-CP在提高植物防御能力中的应用: 本发明涉及生物领域，特别是涉及番茄匍柄霉真菌病毒外壳蛋白SlAV1‑CP在提高植物防御能力中的应用。本发明提供的番茄匍柄霉真菌病毒外壳蛋白SlAV1‑CP、编码基因SlAV1‑CP或含编码基因SlAV1‑CP的生物材料能...; 周倩张岩秦玉芝熊兴耀

玫瑰叶畸形病毒外壳蛋白基因原核表达与抗血清制备: 2024年; 玫瑰叶畸形病毒(rosa rugosa leaf distortion virus,RrLDV)属于番茄丛矮病毒科Tombusviridae天竺葵环斑病毒属Pelarspovirus,能够引起月季叶片畸形、黄化以及提前衰老等症状,是危害月季的病毒之一。为建立玫瑰叶畸形病毒的快速检测方法,采用热硼酸盐法提取发病月季叶片总RNA,通过RT-PCR扩增该病毒外壳蛋白基因,连接至原核表达载体pDB-His-MBP上,导入大肠杆菌Escherichia coli BL21以IPTG,诱导蛋白表达,获得浓度为8 mg/mL的重组蛋白,制备了兔多抗血清。Western blot检测血清效价为1∶2048000,当效价为1∶1000时,灵敏度为1∶1024。血清学检测结果与RT-PCR检测结果一致,表明该抗血清可用于RrLDV的检测,有利于检测该病毒的发生和分布。; 张秀琪聂张尧李梦林苏江月丁泽慧张宗英韩成贵王颖; 关键词：外壳蛋白原核表达抗血清制备

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