搜索到3330篇“ 多重RT-PCR检测“的相关文章
- 4种茉莉病毒一步法多重RT-PCR检测技术的建立
- 2024年
- 茉莉生长过程中普遍受到多种病毒的复合侵染。由于缺乏病毒与症状关系的系统研究,仅通过症状很难准确分辨茉莉被何种病毒侵染,所以建立快速精准诊断多种茉莉病毒病的检测技术具有重要应用价值。本研究建立了一种可同时检测4种茉莉病毒——茉莉T病毒(jasmine virus T,JaVT)、茉莉C病毒(jasmine virus C,JaVC)、茉莉H病毒(jasminevirus H,JaVH)和茉莉A病毒(jasmine virus A,JaVA)——的一步法多重逆转录PCR(one-step multiplex reverse transcription-PCR,RT-PCR)体系,其最优反应体系为:在总体系20.0μL中,JaVT、JaVC、JaVH和JaVA的上下游引物浓度分别为200、150、100和150nmol·L^(-1),One-step Enzyme Mix:0.2μL,2x反应缓冲液:10.0μL,模板量:1.0μg;多重RT-PCR参数设定为:RNA反转录50℃30min;预变性94℃2min;94℃变性30s;55℃退火30s;72℃延伸45s,30个循环;72℃整体延伸10 min。研究结果表明建立的一步法多重RT-PCR可同时高效精准地检测4种茉莉病毒,极大地提高了检测效率,可被广泛应用于实验室精准、高效检测和田间茉莉病毒病的检测。
- 朱丽娟白雅妮苏兰怡王驰何诗芸韩艳红
- 柑橘3种病毒类病原多重RT-PCR检测技术的建立及应用
- 2024年
- 【目的】建立柑橘黄化脉明病毒(citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)、柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)和啤酒花矮化类病毒(hop stunt viroid,HSVd)的多重RT-PCR检测体系。【方法】设计多重RT-PCR引物,分析其特异性,确定其最佳浓度比、最适退火温度及灵敏度,在此基础上对福建地区的柑橘样品进行检测。【结果】确定了CYVCV-F/R、CTV-F/R和HSVd-F/R等3对引物的最佳浓度比例为1∶1∶2,最适退火温度为52.9℃,灵敏度结果显示该体系可检测模板稀释到10^(-2)的阳性样品。应用该体系对采自福建部分地区的157份柑橘样品进行检测,结果发现,CYVCV、CTV和HSVd的检出率分别为47.1%、56.7%和22.9%。【结论】成功建立了柑橘CYVCV、CTV和HSVd病原的多重RT-PCR检测方法,为该类病害的检测提供准确、快速的检测方法。
- 袁琳凯马崇欢李丁山陈志炜江宵烽丁新伦张洁吴祖建
- 关键词:柑橘衰退病毒多重RT-PCR
- 百合病毒的多重RT-PCR检测试剂盒及检测方法
- 本发明公开了百合病毒的多重RT‑PCR检测试剂盒及检测方法,检测试剂盒中包括序列如SEQ ID NO:1~18所示的能特异性检测九种百合病毒的引物对中的至少四对,所述九种百合病毒为CMV、LSV、PlAMV、LMoV、L...
- 丁芳霍妍妍李晓婷洪霓王国平
- 一种兔轮状病毒基因分型的多重RT-PCR检测的引物及检测方法
- 本发明公开一种兔轮状病毒基因分型的多重RT‑PCR检测的引物及检测方法,属于生物技术领域。所述引物包含以下3对特异性引物对,其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1~6所示。检测的基因型包括G3、P[22]和P[41]。...
- 赵巧雅黄兵马秀丽鞠艳姜亦飞刘丽萍胡峰高月花刘存霞朱彤
- 3种黄矮病毒多重RT-PCR检测方法的建立及应用
- 2024年
- 0 引言.小麦黄矮病是我国小麦生产上重要的病毒病,受害小麦感病后植物矮化叶片黄化,一般减产10%~20%左右,严重的可达到50%以上,个别地块甚至可造成绝产。目前国际上已报道的作物黄矮病毒有十多种[1],我国引起小麦黄矮病的主要病原是大麦黄矮病毒(barley yellow dwarf virus, BYDV)PAV和GAV株系[2],其在全国小麦种植区广泛分布。
- 王贺姜兴林韩晓玉徐永伟彭红王怡凡袁虹霞李洪连杨雪施艳
- 关键词:小麦黄矮病大麦黄矮病毒主要病原BYDV
- 广东省蒲瓜病毒种类鉴定及多重RT-PCR检测方法的建立被引量:1
- 2023年
- 【目的】探明侵染广东省蒲瓜的病毒种类,建立一种可以同时检测多种蒲瓜病毒的RT-PCR检测方法,提高蒲瓜病毒种类鉴定效率,为蒲瓜病毒病的精准监测与防控提供依据。【方法】2018—2022年间,从广东省广州市、惠州市、清远市、汕头市和湛江市的蒲瓜主要种植区采集蒲瓜病毒病疑似样品78份,对采集的样品按照地区和症状进行分类,提取每份样品的总RNA,将一个地区具有相同症状样品的RNA等量混合后进行小RNA深度测序分析。根据小RNA深度测序分析结果,设计特异引物进行RT-PCR验证,从而明确侵染广东省蒲瓜的病毒种类。挑选6种检出率高、危害严重的蒲瓜病毒,根据GenBank数据库设计多重PCR检测引物,通过优化反应体系和反应条件,建立同时检测6种蒲瓜病毒的多重RT-PCR方法。【结果】从采集的78份蒲瓜疑似病毒病样品中,共检测到12种病毒,按照检出率从高到低分别为葫芦内源RNA病毒(Lagenaria sicerariaalphaendornavirus,LSEV)(64.1%)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)(62.8%)、小西葫芦虎纹花叶病毒(zucchini tigre mosaic virus,ZTMV)(51.3%)、西瓜绿斑驳花叶病毒(watermelon green mottle mosaic virus,WGMMV)(43.6%)、西瓜病毒A(watermelon virus A,WVA)(32.1%)、番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)(19.2%)、小西葫芦黄花叶病毒(zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)(9.0%)、瓜类蚜传黄化病毒(cucurbit aphid-borne yellows virus,CABYV)(7.7%)、中国南瓜曲叶病毒(squash leaf curl China virus,SLCCNV)(7.7%)、瓜类褪绿黄化病毒(cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV)(5.1%)、瓜类黄矮失调病毒(cucurbit yellow stunting disorder virus,CYSDV)(3.8%)、甜瓜黄斑病毒(melon yellow spot virus,MYSV)(1.3%)。78份样品中,复合侵染率高达80.8%,其中2、3、4、5、6和7种病毒复合侵染的检出率分别为14.1%、16.7%、23.1%、17.9%、7.7%和1.3%。在多重RT-PCR体系中先加入WVA+CCYV+ZTMV+PRSV�
- 苏琦汤亚飞佘小漫蓝国兵于琳吴正伟李正刚何自福
- 关键词:蒲瓜RT-PCR检测多重PCR方法
- 乐都紫皮大蒜4种病毒多重RT-PCR检测技术的建立被引量:3
- 2023年
- 【目的】建立乐都紫皮大蒜4种病毒的多重RT-PCR快速检测方法,为大蒜病毒病病原鉴定、脱毒效果验证等提供技术支撑。【方法】根据乐都紫皮大蒜RNA全长转录组测序结果,分别设计洋葱黄矮病毒(onion yellow dwarf virus,OYDV)、大蒜潜隐病毒(garlic latent virus,GLV)、大蒜D病毒(garlic virus D,GarVD)和大蒜X病毒(garlic virus X,GarVX)4种病毒的外壳蛋白特异性引物,筛选不同引物,优化引物用量、模板用量、退火温度等条件,并进行了多重RT-PCR的灵敏度检测和12份引进栽培大蒜种质资源的病毒检测。【结果】通过优化筛选,在一个PCR反应体系中实现了OYDV(1232 bp)、GLV(831 bp)、GarVD(506 bp)和GarVX(116 bp)4种病毒的多重检测,最优反应条件为退火温度55℃,模板用量2.5μL,混合引物用量1.0μL。多重RT-PCR的灵敏度略低于单一RT-PCR。对引进的12份栽培大蒜资源进行4种病毒的多重RT-PCR检测发现,有5份资源存在4种病毒,4份资源存在2种病毒,3份资源存在1种病毒。对7份资源中经多重PCR未检测到的病毒,使用单一RT-PCR进行检测和验证发现,除1份内蒙古资源(NMG)的1种病毒(GarVX)外,多重RT-PCR结果与单一RT-PCR检测结果一致。【结论】本研究建立的大蒜多重RT-PCR体系可靠性强,可用于大蒜病毒的检测与防控。
- 张超董怡衡岳苗卫唯张谦王乐尹卫王煜伟梁健
- 关键词:乐都紫皮大蒜病毒检测多重RT-PCR
- 大蒜病毒多重RT-PCR检测体系的建立与应用被引量:1
- 2023年
- 【目的】建立一套多重RT-PCR方法,用于同时检测和鉴别大蒜大田植株和组培苗5种病毒/病毒组。【方法】根据相关文献和GenBank公布的参考病毒株序列,设计了5对分别针对青葱潜隐病毒(Shallot latent virus,ShLV)、大蒜普通潜隐病毒(Garlic common latent virus,GarCLV)、韭葱黄条病毒(Leek yellow stripe virus,LYSV)、洋葱黄矮病毒(Onion yellow dwarf virus,OYDV)和青葱X病毒属病毒(allexiviruses)的特异性引物,扩增产物大小分别为592、431、338、265、190 bp。利用建立的多重RT-PCR方法,分别对24份大蒜组培苗和48份大田样本进行病毒检测分析。【结果】通过单重/多重PCR及序列比对验证了检测系统的特异性。通过退火温度和引物比例优化,确定退火温度为56.6℃且ShLV、GarCLV、LYSV、OYDV、allexiviruses引物体积比为10∶8∶3∶3∶16时,扩增效果最好。5种病毒/病毒组的最低检测浓度均为1.0×10^(2) copies/μL。大蒜组培苗病毒检测结果具有丰富的多样性,大田样品被至少2种病毒/病毒组感染,病毒/病毒组之间可以清晰区分。【结论】开发的多重RT-PCR方法可以快速、有效地检测和鉴别大蒜ShLV、GarCLV、LYSV、OYDV和allexiviruses这5种病毒/病毒组的感染情况。
- 赵永强樊继德陆信娟刘灿玉张碧薇杨青青葛洁史新敏杨峰
- 关键词:大蒜病毒多重RT-PCR
- 猪主要腹泻病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量:3
- 2023年
- 为建立检测猪主要腹泻病毒的多重RT-PCR方法,本试验参考GenBank中登录的猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)M基因、猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)VP1基因、猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)N基因和猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)N基因的序列,分别设计相应的引物,构建4种病毒的阳性质粒。以阳性质粒为标准品,通过优化反应条件和反应程序,建立了检测猪主要腹泻病毒的多重RT-PCR方法,并确定了该检测方法的特异性、灵敏性和重复性。结果显示,该方法具有较高的灵敏性,对PSV、TGEV、PDCoV和PEDV的最低检测量分别为1.37×10^(2),1.44×10^(2),1.51×10^(2)和1.56×10^(2)拷贝/μL。而扩增猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)、猪瘟病毒(swine fever virus,CSFV)、猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus-2)PCV-2、猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪伪狂犬病病毒(porcine pseudorabies virus,PRV),结果均呈阴性,具有良好的特异性。重复性试验结果显示,在同等条件下扩增4种病毒的阳性质粒,3次均出现同样的目的条带。应用建立的方法检测了采集的48份腹泻猪的小肠组织和粪便样品,结果检测出2份PSV、7份PDCoV和11份PEDV,与单重RT-PCR检测结果的总符合率为91.66%。同时发现2份PSV和PDCoV混合感染,3份PEDV和PDCoV混合感染,2种检测方法对混合感染检测结果相一致。对2份阳性样品的PCR产物进行测序,结果与检测结果相符合。本试验建立了检测猪主要腹泻病毒的多重RT-PCR方法,为临床检测PSV、PDCoV、TGEV、PEDV和流行病学调查提供了便捷有效的方法。
- 闫晓光丁庆文任豪杰张宇航李泽辉胡慧
- 关键词:多重RT-PCR猪传染性胃肠炎病毒猪流行性腹泻病毒
- 猪瘟、猪蓝耳病和乙型脑炎多重RT-PCR检测方法的建立及临床验证被引量:1
- 2023年
- 为了提高猪繁殖障碍性疾病的检测效率,试验在单一RT-PCR扩增条件的基础上,建立1种能同时检测猪瘟病毒(CSFV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)、乙型脑炎病毒(JEV)的多重RT-PCR方法,并在四川省的简阳、宜宾、泸州地区11个养殖场进行临床验证。结果:多重RT-PCR方法对CSFV、PRRSV、JEV的最低检测限分别为0.1696、1.209、1.678 ng/μL,检测结果与商品化试剂盒检测结果均一致。结论:建立的多重RT-PCR方法能够同时检测3种繁殖障碍病毒,灵敏度高、特异性好,可应用于实验室检测诊断。
- 王迎平李有豪曹德琴黄茹芸李照伟浦同灿王慧曾红杨晓伟刘霞赵光伟
- 关键词:猪瘟猪蓝耳病乙型脑炎多重RT-PCR