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大片形吸虫外泌体对水牛外周血单核巨噬细胞极化的影响: 2023年; 为探讨大片形吸虫外泌体(FgExo)在宿主免疫调节方面的作用,本研究采用聚合物沉淀法和超速离心法从大片形吸虫分泌排泄产物(FgESP)中分离得到FgExo;采用荧光定量PCR(qPCR)法检测不同浓度的FgESP或FgExo作用于水牛外周血单核巨噬细胞(Mφ)后γ-干扰素(IFN-γ)、白介素-10(IL-10)的转录水平;根据qPCR结果选择50μg/mL FgExo(+5μg/mL脂多糖)、200μg/mL FgESP(+5μg/mL脂多糖)作为试验组,以PBS为阴性对照组、脂多糖为阳性对照组,分别作用于Mφ后采用qPCR检测Mφ分型相关基因诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、CD86、精氨酸酶2(Arg-2)、CD206的转录水平;ELISA检测白介素-1β(IL-1β)、转化生长因子-β1(TGF-β1)分泌水平。结果显示:FgExo和FgESP可显著上调MφIL-10 mRNA的转录水平,显著抑制IFN-γmRNA的转录水平;显著上调M2型Mφ标记物CD206及相关因子Arg-2、TGF-β1的表达,显著抑制M1型Mφ标记物CD86及相关因子iNOS、IL-1β的表达。本研究结果表明,FgExo和FgESP均能够使水牛外周血单核巨噬细胞向M2型极化,利于大片形吸虫在水牛体内生存。; 王渝瑞王乐铭朱彬王冬英; 关键词：大片形吸虫外泌体

感染大片形吸虫水牛脊髓全基因组DNA的甲基化及其功能的分析被引量：3: 2023年; 为探究感染大片形吸虫后不同时间水牛脊髓全基因组DNA甲基化的类型、占比及其感染后差异甲基化区域(DMR)涉及的功能及信号通路,本研究将大片形吸虫囊蚴经口灌胃感染8~10月龄水牛,分别于感染后3 d(J01)、10 d(J02)、28 d(J03)、42 d(J04)、70 d(J05)和98 d(J06)采集水牛脊髓,利用全基因组重亚硫酸盐测序技术(WGBS)对基因组DNA的甲基化测序,测序数据经过滤筛选后,采用Bismark软件分析各组水牛脊髓基因组DNA甲基化的类型及其占比(某种类型甲基化序列在该组全部可用测序序列中的占比以及该组某种C类型甲基化的数量在全部C类型甲基化中的占比),并采用weight methylation level对各组水牛脊髓基因组DNA 7个功能区域的甲基化进行聚类分析。WGBS测序结果经过滤后显示,平均每组测序长度为100.29 Gp,Q20%(质量值≥20的碱基占总碱基数的百分比)和Q30%分别达到95%和85%以上,6组样品亚硫酸盐(BS)转化率均大于99%,表明WGBS测序结果准确可靠;各组样品DNA甲基化类型和占比的分析及统计结果显示,J01~J06组基因组分别包含CG、CHG、CHH 3种类型的甲基化(mCG、m CH及m CHH),且以m CG类型占比最多(63.1%~71.7%,80.11%~85.73%),m CHH类型(0.9%~1.2%,11.27%~15.18%)及m CHG类型均较少(1.0%~1.2%,3.00%~4.84%);聚类分析结果显示,上述3种类型的甲基化主要分布在水牛脊髓基因组第1内含子和内部内含子。上述结果表明,感染大片形吸虫后水牛脊髓基因组DNA甲基化类型以m CG为主,且第1内含子和内部内含子的甲基化可能影响该两个区域相关基因的正常表达。利用R软件包分析各组水牛脊髓基因组之间是否存在DMR,并采用基于模型的亚硫酸氢盐测序数据分析(MOABS)筛选并统计各组之间的DMR及DMR的数量;采用DAVID软件分析各组DMR在其相应基因组中的分布;采用R语言对各组的DMR进行GO功能注释和KEEG富集分析。DMR的筛选及统计结果显示,各基因组; 钟舒红盛兆安李军彭昊吴翠兰马春霞彭红艳黄维义施维潘艳; 关键词：水牛大片形吸虫脊髓

大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A的原核表达及不同时期表达水平分析: 2023年; 【目的】克隆大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A(Ser/Thr protein phosphatases 2A,PP2A)基因并构建原核表达载体,获得原核表达蛋白,为探究PP 2 A基因功能及其在大片形吸虫的发育中的作用奠定基础。【方法】提取大片形吸虫成虫虫体组织总RNA,应用RT-PCR方法扩增PP 2 A基因的完整编码区序列,并以双酶切的方式连接pET-28a(+)载体;经酶切、测序鉴定后获得阳性质粒pET-28a-PP2A,将pET-28a-PP2A重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达,并对重组蛋白的诱导条件进行优化;通过SDS-PAGE及Western blotting检测大片形吸虫PP 2 A基因的表达效果;应用实时荧光定量PCR检测PP 2 A基因在大片形吸虫虫卵、囊蚴、6周龄童虫和成虫阶段中的表达情况。【结果】克隆的大片形吸虫PP 2 A基因编码区序列长1161 bp,编码386个氨基酸,分子式为C_(1980)H_(3105)N_(535)O_(566)S_(24),分子质量为44.23 ku。生物信息学分析结果显示,大片形吸虫PP 2 A基因编码的蛋白为PP2Ac,分子功能为信号转导(GO:0004871),生物学过程为蛋白去磷酸化(GO:0006470),细胞组分为细胞质(GO:0005829)。PP2A蛋白无信号肽,不存在跨膜结构域,为亲水性蛋白,共含有37个磷酸位点。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,大片形吸虫PP2A在30℃、0.8 mmol/L IPTG诱导6 h时表达量最大,表达产物主要以包涵体的形式存在,且Western blotting检测结果显示,重组蛋白可被抗His标签识别;实时荧光定量PCR结果显示,PP 2 A基因在大片形吸虫6周龄童虫阶段表达量最高,极显著高于其他阶段(P<0.01);在囊蚴阶段的表达量最低,与虫卵阶段差异不显著(P>0.05)。【结论】本研究成功构建了大片形吸虫PP2A原核表达载体并获得相应蛋白,为研究PP 2 A基因在大片形吸虫生长发育中的功能奠定了基础。; 章志涛李祥龙孔令丽罗雨昕王冬英; 关键词：大片形吸虫原核表达

水牛大片形吸虫抗体的快速检测方法: 本发明公开了水牛大片形吸虫抗体的快速检测方法，属于牛疫病检测技术领域。本发明包括如下步骤：S1、抗水牛IgG单克隆抗体2G7金标抗体结合垫的制备；S2、检测带的制备，将羊抗鼠IgG抗体和大片形吸虫ES抗原分别喷涂在硝酸纤...; 吴文德张为宇侯林静

大片形吸虫分泌排泄产物诊断抗原的制备方法与应用: 本发明提供大片形吸虫分泌排泄产物诊断抗原的制备方法与应用，一种大片形吸虫分泌排泄产物诊断抗原有效成分的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)大片形吸虫分泌排泄产物制备；(2)层析组分收集；(3)层析组分的筛选。本发明...; 张为宇侯林静吴文德靳纬坤吴正姣

牛大片形吸虫病免疫学诊断方法的建立与应用: 背景及目的：片形吸虫病对畜牧业危害严重，广西地区牛大片形吸虫病感染率较高。本研究旨在利用F22及其所含的关键分子作为诊断抗原建立起牛大片形吸虫病免疫学诊断方法，并利用该方法对广西地区牛大片形吸虫病进行流行病学调查;同时对...; 靳纬坤; 关键词：免疫学诊断流行病学药物驱虫

大片形吸虫CatL1蛋白的原核表达及其特异性多克隆抗体的制备被引量：1: 2020年; 为了制备大片形吸虫诊断抗体,试验采用原核表达制备大片形吸虫组织蛋白酶L1重组蛋白(rFgCatL1),用该蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗体效价,Western-blot法检测多克隆抗体的特异性。结果表明:CatL1基因大小为981 bp,蛋白质分子质量为39.0 ku左右,与预期分子质量大小一致。制备的小鼠多克隆抗体血清效价达1∶128 000,能特异性识别大片形吸虫排泄-分泌物(ESP)抗原。说明制备的rFgCatL1多克隆抗体可作为良好的诊断抗体用于研制快速诊断试剂盒。; 王乐铭侯林静饶国顺梅雪芳施维王渝瑞吴正姣王冬英张为宇; 关键词：大片形吸虫原核表达多克隆抗体特异性

大片形吸虫新脱囊童虫对巨噬/枯否细胞体外作用的初步探究: 巨噬细胞是一种广泛分布于机体微环境中的免疫效应细胞,它能介导固有免疫的防御机制。枯否细胞(Kupffer cells,KCs)为定居在肝脏中的一类特定的巨噬细胞,可吞噬入侵的病原微生物,是肝脏免疫保护的第一道屏障。大片形...; 杨曦; 关键词：枯否细胞巨噬细胞极化

大片形吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶的特性研究及其抑制物的筛选: 片形吸虫病是由大片形吸虫和肝片形吸虫寄生在草食性哺乳动物或人的肝胆内引起的一种人畜共患寄生虫病。硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶（TGR）是片形吸虫氧化还原系统中一个非常重要的抗氧化酶，TGR抑制物的研究和筛选可为研发抗大片形吸...; 何宇婷; 关键词：生物活性药物筛选; 文献传递

大片形吸虫分泌排泄产物诱导的小鼠腹腔巨噬细胞极化的蛋白质组学及代谢组学分析: 研究背景:蠕虫在宿主体内迁移和发育的过程当中,会通过不间断的释放分泌排泄产物(excretory-secretory product,ESP)来调控宿主的免疫微环境,降低甚至沉默宿主的免疫反应,从而达到免疫逃避的目的。一...; 张瑶瑶; 关键词：大片形吸虫巨噬细胞蛋白质组学代谢组学

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