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基于scWGBS探究玻璃化冷冻对猪激活囊胚基因组甲基化水平的影响
2025年
旨在探究玻璃化冷冻对猪激活(parthenogenetic activation, PA)囊胚基因组甲基化水平的影响。以猪第6天PA囊胚为研究对象,分别采用常规玻璃化冷冻液(玻璃化冷冻Ⅰ组)和改良玻璃化冷冻液(玻璃化冷冻Ⅱ组)进行玻璃化冷冻-复苏试验,每组选择3枚复苏形态良好的囊胚用于单细胞全基因组甲基化测序(single cell whole-genome bisulfite sequencing, scWGBS),分析囊胚基因组甲基化水平变化。结果显示,与新鲜组相比,玻璃化冷冻Ⅰ组猪PA囊胚的基因组整体甲基化水平极显著降低(18%vs. 20.9%,P<0.01),而玻璃化冷冻Ⅱ组显著升高(21.5%vs. 20.9%,P<0.05)。与新鲜组相比,在玻璃化冷冻Ⅰ组共鉴定到2 717个差异甲基化区域(differential methylation region, DMR),而在玻璃化冷冻Ⅱ组共鉴定到1 964个DMRs。基因功能富集分析结果显示,玻璃化冷冻导致胚胎发育、ATP代谢、MAPK信号通路、Wnt信号通路等生物学过程相关基因的甲基化水平发生紊乱。在玻璃化冷冻Ⅱ组中,Hippo信号通路、PI3K-Akt信号通路和mTOR信号通路等生物学过程更为活跃。综上所述,玻璃化冷冻改变猪PA囊胚基因组甲基化水平,其可能通过扰乱胚胎发育、ATP代谢、MAPK信号通路、Wnt信号通路等相关基因的甲基化水平进而损害猪PA囊胚冻后发育。此外,Hippo信号通路、PI3K-Akt信号通路和mTOR信号通路可作为缓解玻璃化冷冻损伤的候选途径。
杨柏高徐皆欢张亮龙熙戴建军赵学明潘红梅
关键词:孤雌激活囊胚玻璃化冷冻
基于Smart-seq2探究玻璃化冷冻对猪激活囊胚基因表达的影响
2024年
旨在探究玻璃化冷冻对猪激活(parthenogenetic activation,PA)囊胚基因表达的影响。本研究以猪PA囊胚为研究对象,根据试验处理分为新鲜组、玻璃化冷冻组Ⅰ和玻璃化冷冻组Ⅱ,随后从每组挑选3枚形态良好的囊胚,利用Smart-seq2单细胞全长转录组测序技术进行转录组测序分析。结果显示,玻璃化冷冻组Ⅰ与新鲜组相比,共鉴定到772个差异表达基因(differential expression genes,DEGs),GO和KEGG富集分析结果显示,这些DEGs与细胞脂质代谢过程、细胞葡萄糖稳态、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路等相关;玻璃化冷冻组Ⅱ与新鲜组相比,共鉴定到1613个DEGs,主要与糖异生、代谢途径、氨基酸生物合成等相关;玻璃化冷冻组Ⅱ与玻璃化冷冻组Ⅰ相比,鉴定到822个DEGs,主要与丙酮酸代谢过程、N-聚糖生物合成、细胞衰老等相关。综上,本研究基于Smart-seq2单细胞全长转录组测序技术揭示了玻璃化冷冻对猪PA囊胚脂质代谢、能量代谢、MAPK信号通路等相关基因表达的影响。
杨柏高龙熙张亮徐皆欢戴建军赵学明潘红梅
关键词:玻璃化冷冻孤雌激活囊胚
滩羊卵母细胞体外成熟和激活试验
2024年
为建立滩羊卵母细胞体外成熟和激活培养体系,对离体卵巢来源的滩羊卵母细胞进行体外成熟培养,并用化学激活法进行激活。结果显示:滩羊离体卵巢平均得卵数为3.07枚,卵母细胞成熟率为54.78%,卵裂率为61.92%,囊胚率为17.72%,试验各重复之间差异不显著(P>0.05)。研究认为,本试验建立的培养体系较稳定,适合滩羊卵母细胞体外成熟培养,为体外受精胚和克隆胚生产奠定实验基础。
杨文琳许斌李冉张秀陶李生虎
关键词:滩羊卵母细胞体外成熟培养
鼠尾草酸对猪卵母细胞体外成熟及激活胚胎发育的影响
长期采食高能、高蛋白日粮饲料产生的活性氧自由基(ROS)易造成母猪性成熟推迟、排卵少、妊娠率低等繁殖力低的现象,制约着我国养猪业健康发展。而在日粮中添加抗氧化剂可有效缓解上述情况的发生。鼠尾草酸(Carnosic aci...
彭艳侠
关键词:卵母细胞孤雌激活胚胎
一种利用激活胚胎干细胞体外分化形成卵子的方法
本发明公开了一种利用激活胚胎干细胞体外分化形成卵子的方法,该方法用锶离子和细胞松弛素D处理获得激活胚胎并建立胚胎干细胞细胞系,进一步分化形成原始生殖细胞样细胞,将所述原始生殖细胞样细胞与小鼠性胚胎性腺...
田成磊曾明叶孝颖刘林
一种利用激活胚胎干细胞体外分化形成卵子的方法
本发明公开了一种利用激活胚胎干细胞体外分化形成卵子的方法,该方法用锶离子和细胞松弛素D处理获得激活胚胎并建立胚胎干细胞细胞系,进一步分化形成原始生殖细胞样细胞,将所述原始生殖细胞样细胞与小鼠性胚胎性腺...
田成磊曾明叶孝颖刘林
外源性ROS对绵羊激活胚胎发育影响的研究
2021年
为了探讨外源性活性氧(ROS)短期孵育绵羊体外成熟后卵丘卵母细胞复合体(in vitro matured cumulus oocyte complexs,IVM-COCs)对激活(parthenogenetic activation,PA)胚胎发育能力和凋亡的影响,试验以0(对照组),10,100,1000μmol/L的过氧化氢(H2O2)处理液孵育绵羊IVM-COCs 1 h,然后进行激活并培养,通过荧光探针DCHF-DA测定ROS水平,使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的UTP缺口末端标记(TUNEL)法和碘化丙锭(PI)技术评估激活胚胎囊胚中DNA碎片化程度。结果表明:100μmol/L H2O2处理液孵育IVM-COCs 1 h后胚胎的囊胚率为(50.50±4.30)%,显著高于对照组及其他浓度处理组(P<0.05);而1000μmol/L H2O2处理液孵育IVM-COCs 1 h后激活胚胎的卵裂率显著降低且未能发育至囊胚阶段,并诱导永久性的胚胎发育阻滞或死亡。与对照组相比,100μmol/L H2O2处理液孵育IVM-COCs 1 h后ROS水平显著升高(P<0.05),而2-细胞阶段胚胎ROS水平差异不显著(P>0.05);激活胚胎的卵裂率、囊胚平均细胞数以及囊胚中DNA碎片化比率均差异不显著(P>0.05)。说明用适量的外源性ROS短期孵育绵羊IVM-COCs对激活胚胎的形成有积极作用。
张通张家新孙树茂章培军
关键词:过氧化氢绵羊胚胎
Ca-A23187及6-DMAP对小鼠卵母细胞激活的研究
2021年
生殖(parthenogenesis)是指无雄性配子的任何作用,由性配子产生个体的繁殖。生殖技术通过人工刺激模拟受精过程,提高胞质内钙离子浓度,从而使卵母细胞在无需精子条件下被激活,是一项重要的生物技术。钙离子载体A23187作为常用的化学激活介质广泛应用于哺乳动物卵母细胞的激活,钙离子载体A23187通过Ca^2+的跨膜转运,能迅速诱导卵母细胞内Ca^2+浓度升高,激活哺乳动物的卵母细胞,而6-DMAP是蛋白质磷酸化抑制剂,能阻止蛋白质磷酸化,抑制MPF和CSF活性,同时抑制第二极体的释放,保证激活偶数目细胞的染色体为二倍体。本实验是来观察钙离子载体A23187(Ca-A23187)及6-甲基嘌呤(6-DMAP)对小鼠卵母细胞的激活作用。
龙燕
关键词:小鼠卵母细胞孤雌激活
线粒体靶向抗氧化剂MitoQ对猪激活囊胚冷冻保存的影响被引量:1
2021年
在卵母细胞体外成熟、胚胎培养及玻璃化冷冻与解冻过程中全程添加200 nmol∕L MitoQ,观察其对猪激活囊胚解冻后线粒体膜电位、TUNEL凋亡水平、活性氧(ROS)水平、脂质氧化产物(MDA)水平、总Caspase蛋白表达水平及凋亡氧化相关基因表达水平的影响。结果表明:添加MitoQ冷冻后其囊胚线粒体膜电位(0.83)相比对照组(0.52)显著升高;囊胚凋亡阳性细胞比例(22.36%)相比对照组(36.42%)显著降低;MDA含量(37.64 nmol∕L)与ROS荧光强度(26.32)相比对照组(49.83 nmol∕L与35.70)显著降低;总Caspase活性荧光强度(20.65)相比对照组(42.47)显著降低;相比对照组,Bcl-2、DNM1、CuZnSOD和MFN2基因的表达水平显著提升,Bax和TNF-α基因的相对表达量则显著下降。综上,全程添加MitoQ能够降低猪激活囊胚的氧化损伤、改善线粒体功能,并通过调节相关基因的表达水平,达到降低其细胞凋亡和提高其抗冻能力的目的。
王文杰葛雷张树山吴彩风戴建军张德福
关键词:孤雌激活囊胚氧化应激冷冻保存
小鼠激活胚胎早期发育过程中胞吞作用相关蛋白的动态表达分析
2021年
为探索哺乳动物激活胚胎早期发育过程中胞吞作用相关蛋白的动态表达,通过体外生产小鼠激活胚胎,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测不同发育时期小鼠激活胚胎胞吞作用相关蛋白Cav1、Cav2基因和蛋白相对表达水平,并采用免疫荧光技术进行不同发育时期小鼠激活胚胎中Cav1、Cav2表达定位分析。结果表明,在小鼠激活胚胎不同时期均可检测到Cav1、Cav2基因及其蛋白的表达,其中囊胚和桑椹胚中该2个基因的表达水平最高,4-8细胞时期次之,2细胞最低;各发育时期激活胚胎中Cav1、Cav2蛋白主要定位在胚胎细胞胞质内;囊胚中内细胞团(ICM)细胞中Cav1的荧光强度高于滋养层细胞。说明胞吞作用相关蛋白Cav1、Cav2可能参与小鼠早期胚胎发育的生理调控,桑椹胚和囊胚时期可能是其发挥生理功能的重要时期,并且在囊胚时期对内细胞团发育的调控作用更为显著。研究结果可为探索胞吞作用参与哺乳动物胚胎早期发育的调控机制提供重要参考。
许瑞华周应聪孙莹王萌芮弦王靖雷马睿余四九潘阳阳
关键词:孤雌激活胚胎发育

相关作者

石德顺
作品数:602被引量:1,157H指数:14
供职机构:广西大学
研究主题:水牛 卵母细胞 体外成熟 猪卵母细胞 体外受精
卢克焕
作品数:338被引量:997H指数:15
供职机构:广西大学动物科学技术学院
研究主题:卵母细胞 水牛 体外受精 体外成熟 猪卵母细胞
卢晟盛
作品数:224被引量:565H指数:12
供职机构:广西大学
研究主题:卵母细胞 猪卵母细胞 体外成熟 水牛 胚胎培养
张涌
作品数:531被引量:1,918H指数:20
供职机构:西北农林科技大学
研究主题:山羊 卵母细胞 体细胞核移植 核移植 小鼠
戴建军
作品数:250被引量:376H指数:9
供职机构:上海市农业科学院
研究主题:卵母细胞 冷冻保存 猪卵母细胞 玻璃化冷冻 猪精液