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在小肠 上皮细胞 中稳定过表达ACE2的AAV血清型确立 2024年 血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2),是血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)的同源物,可将血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)裂解成血管紧张素1-7(angiotensin1-7,Ang1-7),后者通过G蛋白偶联受体Mas发挥作用,作为肾素-血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)的调节轴,与经典级联信号ACE/AngII/AT1(AngII type 1 receptor)相拮抗[1]。ACE2/Ang1-7/Mas信号途径的激活对维持胰岛、肝脏、骨骼肌、脂肪组织的代谢稳定性至关重要[2]。 杨卫利 赵莉莉 曹曦关键词:ACE2 血管紧张素转换酶2 小肠上皮细胞 血清型 姜黄素对小鼠小肠 上皮细胞 氧化应激损伤的保护作用及机制研究 2024年 本试验旨在研究姜黄素对小鼠小肠 上皮细胞 (MODE-K细胞 )氧化应激损伤的保护作用及机制。使用过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导小鼠小肠 上皮细胞 ,建立细胞 氧化损伤模型,并确定最佳造模H_(2)O_(2)浓度。对照组使用正常培养液培养细胞 ,不进行任何处理;模型组使用正常培养液培养细胞 后,加入H_(2)O_(2)处理细胞 4 h;姜黄素组使用正常培养液培养细胞 后,先加入不同浓度(1.25、2.50、5.00、10.00和20.00μmol/L)的姜黄素处理细胞 12 h,然后再加入H_(2)O_(2)处理细胞 4 h。测定小鼠小肠 上皮细胞 存活率、凋亡率以及细胞 中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量和乳酸脱氢酶(LDH)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,实时荧光定量PCR检测B细胞 淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞 淋巴瘤相关X蛋白(Bax)、半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)的mRNA相对表达水平,利用分子模拟研究姜黄素与Kelch样环氧氯丙烷关联蛋白1(Keap1)口袋结合的优势构象和相互作用,蛋白质印迹(Western blot)检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、Keap1、血红素加氧酶-1(HO-1)的蛋白相对表达水平。结果表明:1)最佳造模H_(2)O_(2)浓度为150μmol/L。2)与对照组相比,模型组的细胞 存活率及细胞 中SOD、GSH-Px活性显著降低(P<0.05),细胞 中ROS、MDA含量和LDH活性显著增加(P<0.05)。与模型组相比,5.00~20.00μmol/L姜黄素组的细胞 存活率及细胞 中SOD、GSH-Px活性显著增加(P<0.05),细胞 中ROS、MDA含量和LDH活性显著降低(P<0.05)。3)与对照组相比,模型组的细胞 凋亡率显著增加(P<0.05),细胞 中Bcl-2的mRNA相对表达水平显著降低(P<0.05),Bax和Caspase-3的mRNA相对表达水平显著提高(P<0.05)。与模型组相比,10.00μmol/L姜黄素组的细胞 凋亡率显著降低(P<0.05),细胞 中Bcl-2的mRNA相对表达水平显著提高(P<0.05),Bax和Caspase-3的mRNA相对表达水平显著降低(P<0.05)。4)分子对接结果表明,姜黄素通过与Keap1的Kelch结构域结� 贺莹 张夏夏 黄聪 冯彩平关键词:姜黄素 小肠上皮细胞 氧化应激 雷公藤红素促进小肠 上皮细胞 肝X受体α表达调控胆固醇代谢研究 2024年 目的运用网络药理学结合实验验证探讨雷公藤红素调控肠上皮细胞 胆固醇代谢的潜在靶点及作用机制。方法应用网络药理学筛选雷公藤红素调控肠上皮细胞 胆固醇代谢的关键靶点和通路。运用Autodock Vina软件进行分子对接验证。通过构建体外肠上皮细胞 高胆固醇模型,考察雷公藤红素对肠上皮细胞 胆固醇代谢及其关键通路和靶点表达的影响。结果共获得94个雷公藤红素靶点、15415个肠道靶点、14177个胆固醇代谢靶点。取交集得75个共有靶点。蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络筛选得到1个关键子网络。基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析发现网络中的靶点与多种生物功能相关。基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析发现,雷公藤红素调控肠道胆固醇代谢涉及多条途径,其中肠道脂质代谢的关键通路(fat digestion and absorption)与PPI网络中的关键子网络之一密切相关。分子对接结果表明,雷公藤红素与关键网络中的核心蛋白肝X受体α(liver X receptorα,LXRα)具有良好的结合亲和力。体外实验表明,雷公藤红素显著降低高胆固醇环境下肠上皮细胞 脂质堆积(P<0.05、0.01、0.001),显著上调三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G5和G8(adenosine triphosphate-binding cassette transporters G5 and G8,ABCG5/8)蛋白表达(P<0.05、0.01),并下调NPC1样细胞 内胆固醇转运蛋白1(NPC1 like intracellular cholesterol transporter 1,NPC1L1)表达(P<0.05)。结论雷公藤红素调控肠上皮细胞 胆固醇代谢的作用机制可能与调节LXRα促进胆固醇流出、抑制胆固醇摄取密切相关。 赵谭军 付可沁 施树成 卜兰兰关键词:雷公藤红素 肠上皮细胞 胆固醇代谢 肝X受体Α 一种制备功能性肝前体细胞 或肝细胞 或者功能性小肠 上皮 前体细胞 或小肠 上皮细胞 的方法 本发明提供一种功能性肝(前体)细胞 或功能性小肠 上皮 (前体)细胞 的制备方法,其包括在抗生素存在下培养包含肝(前体)细胞 或者小肠 上皮 (前体)细胞 的分离细胞 群的步骤。另外,本发明还提供一种包含功能性肝前体细胞 的实质上均匀的分离... 梅泽明弘 清野透茶树油对脂多糖诱导奶牛小肠 上皮细胞 损伤的影响 2024年 本试验旨在研究茶树油(TTO)对脂多糖(LPS)诱导奶牛小肠 上皮细胞 (BIECs)损伤的影响。试验选取3头健康新生中国荷斯坦犊牛的空肠组织,分离并获得BIECs进行培养。通过使用不同浓度的LPS(0、1、2和4μg/mL)和不同浓度的TTO(0、0.00625%、0.01250%、0.02500%、0.05000%和0.10000%),建立细胞 炎症模型。然后,对照组以不含TTO和LPS的培养基处理细胞 ;LPS组以1μg/mL的LPS处理细胞 12 h;LPS+TTO组采用0.01250%和0.02500%的TTO预处理细胞 12 h,经水洗后,再暴露于LPS处理12 h。结果表明:1)与对照组(未添加TTO)相比,添加0.00625%、0.01250%、0.02500%和0.05000%TTO对BIECs细胞 活力无显著影响(P>0.05),添加TTO显著提高跨膜电阻(TEER)(P<0.05)。与对照组相比,添加0.01250%TTO显著提高BIECs中闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、封闭蛋白(occludin)、闭合蛋白-1(claudin-1)和闭合蛋白-4(claudin-4)的mRNA相对表达量(P<0.05),显著降低肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA相对表达量(P<0.05)。2)与LPS组相比,LPS+TTO组TEER以及ZO-1、occludin和claudin-1的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05),TNF-α的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);LPS+TTO组ZO-1蛋白相对表达量显著提高(P<0.05)。综上可知,TTO可以通过上调紧密连接蛋白表达和下调炎性因子表达,缓解LPS诱导的犊牛小肠 上皮细胞 屏障功能障碍和炎症损伤。 陈明 蔡淑先 杨红 张佳豪 赵国琦关键词:茶树油 炎症 一种永生化荷斯坦公犊牛小肠 上皮细胞 系及其构建方法和应用 本发明属于引入外来遗传物质对细胞 的修饰领域,具体涉及一种永生化荷斯坦公犊牛小肠 上皮细胞 系及其构建方法和应用。本发明的永生化荷斯坦公犊牛小肠 上皮细胞 系,其保藏号为CGMCC No.45029,于2021年12月27日保藏于... 张才 何雷 孟素丹 王海蓉 邵琦 豆梦莹脂多糖诱导仔猪小肠 上皮细胞 炎性损伤模型的建立 2024年 LPS诱导IPEC-J2细胞 炎性损伤模拟仔猪体内早期断奶应激,构建IPEC-J2细胞 炎性损伤模型。首先采用0、0.1、1、10、100μg·mL^(-1)LPS处理IPEC-J2细胞 ,MTS法检测LPS处理IPEC-J2细胞 0、4、8、12、16、24 h后的增殖率,初步确定炎性损伤模型构建的适宜浓度为10μg·mL^(-1),适宜时间为16 h。为了进一步确定LPS的最佳浓度,采用0~100μg·mL^(-1)LPS处理IPEC-J2细胞 16 h,探究不同浓度LPS对IPEC-J2细胞 的影响。结果表明:0.1~100μg·mL^(-1)LPS均可以不同程度的提高IPECJ2细胞 IL^(-1)β、IL-6、IL-8和TNF-α含量及基因表达量,下调ZO-1、Occludin、Claudin-1基因表达量,降低IL-10、IgM、IgA和IgG含量,其中10μg·mL^(-1)的作用效果最佳;0.1~100μg·mL^(-1)LPS均可以不同程度的提高IPEC-J2细胞 中ROS含量和细胞 凋亡率,其中10μg·mL^(-1)的作用效果最佳。由此可见,LPS诱导细胞 构建炎性损伤模型的适宜条件为10μg·mL^(-1)和16 h。 赵磊 刘云卓 王毅 孙会 张爱忠 李沐阳关键词:仔猪 脂多糖 谷氨酰胺二肽对奶牛小肠 上皮细胞 增殖与凋亡的影响 2024年 【目的】旨在研究2种谷氨酰胺二肽对奶牛小肠 上皮细胞 增殖及凋亡的影响。【方法】对体外培养的奶牛小肠 上皮细胞 进行谷氨酰胺(Glutamine,Gln)饥饿处理后,分别添加Gln、丙氨酰谷氨酰胺(Alanyl-glutamine,Ala-Gln)和甘氨酰谷氨酰胺(Glycyl-glutamine,Gly-Gln)进行处理,检测各处理组细胞 的细胞 活力、细胞 凋亡率及周期、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)漏出量及凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2和Caspase-3)的表达量。【结果】与CK(Gln饥饿处理组)相比,添加Ala-Gln或Gly-Gln的奶牛小肠 上皮细胞 的细胞 活力显著提高(P<0.05),LDH漏出量显著降低(P<0.05)。此外,与CK相比,添加Gln、Ala-Gln及Gly-Gln均能显著降低G0/G1和G2/M期阻滞细胞 比率,提高S期细胞 比率(P<0.05),也能显著提高抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达,而显著降低促凋亡因子Bax和Caspase-3蛋白表达(P<0.05),从而显著降低细胞 凋亡率(P<0.05)。【结论】谷氨酰胺二肽(Ala-Gln及Gly-Gln)能够促进奶牛小肠 上皮细胞 增殖并减缓其凋亡,从而保护肠道黏膜结构的完整性。该研究结果可为谷氨酰胺二肽在奶牛肠道营养中的应用提供理论依据。 贺光祖 叶惠慧 李逢振 邹振兴 钟金凤 黄通灵 蒋真良 马勇关键词:谷氨酰胺二肽 细胞增殖 细胞凋亡 伪狂犬病病毒感染猪肺泡巨噬细胞 和小肠 上皮细胞 的转录组动态分析 2024年 为探究伪狂犬病病毒(pseudorbies virus,PRV)与猪肺泡巨噬细胞 及小肠 上皮细胞 的相互作用,将PRV感染猪肺泡巨噬细胞 株3D4/21及小肠 上皮细胞 株IPEC-J2,测定其感染后病毒滴度及0~48 h内各时间点病毒gE基因拷贝数,观察细胞 病变(CPE)和免疫荧光,采用荧光定量PCR(RT-qPCR)、ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6),对PRV感染后0、6、12、18 h样本进行转录组测序(RNA-seq)分析。结果显示:PRV感染3D4/21细胞 及IPEC-J2细胞 96 h时,病毒滴度分别为10^(-8.16)TCID_(50)/0.1 mL、10^(-7.76)TCID_(50)/0.1 mL,病毒gE基因拷贝数分别在18、24 h达到最大,CPE分别在10、12 h开始出现,病毒蛋白表达随感染时间延长逐渐增加;TNF-α、IL-6和IL-1β表达量在PRV感染后均逐渐升高;PRV感染3D4/21细胞 及IPEC-J2细胞 后,经RNA-seq联合分析,在0、6、12、18 h的4个时间点筛出2种细胞 共有差异表达基因分别为8313、6999、6693、5714个,其中Ras关联域家族成员6(RASSF6)、锌指蛋白667(ZNF667)、激肽超家族蛋白3C(KIF3C)、早期应答基因3(IER3)显著变化基因可能与细胞 炎症反应有关,且RT-qPCR验证与RNA-seq分析结果一致。基因本体论(GO)分析显示差异基因富集到细胞 过程、生物调控、细胞 代谢调节等;京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集显示差异基因主要涉及癌症通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、Toll样受体(TLRs)信号通路等,其中参与炎症的Toll样受体4(TLR4)-髓样分化因子88(MYD88)-核转录因子кB(NF-кB)通路验证结果与KEGG通路分析数据变化趋势总体一致。提示:PRV感染会影响3D4/21细胞 及IPEC-J2细胞 的炎症反应。本研究为进一步探索PRV的致病机制提供了参考。 张王芝 舒相华 张莹 黄鑫 储宗秀 宋春莲关键词:伪狂犬病病毒 差异表达基因 奶牛小肠 上皮细胞 系细胞 染色体核型与G-带分析 2024年 为了鉴定奶牛小肠 上皮细胞 系(BIECs-21)的生物学遗传稳定性,体外贴壁培养BIECs-21细胞 ,制备染色体标本和G-带标本,分析BIECs-21细胞 的染色体核型和G-带。结果表明:BIECs-21细胞 染色体数为2n=60,包括常染色体29对和性染色体(X和Y染色体)1对。其中,29对常染色体均为端部着丝点染色体;性染色体中,X染色体是较大的中着丝粒染色体,Y染色体是较小的中着丝粒染色体。除X、Y性染色体外,BIECs-21细胞 常染色体的G-带带纹的数量和位置无显著差异。BIECs-21细胞 与荷斯坦牛的正常染色体核型相比,染色体数目及形态结构均没有明显变化,证明该细胞 系遗传特性稳定,可以用于牛肠道相关疾病分子机制的研究。 王雪莹 孟素丹 何雷 赵淑娟 王聪慧 李日顺 钱伟锋 张才关键词:染色体核型分析
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