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引物延伸预扩增结合简并引物PCR在单细胞比较基因组杂交分析染色体异常中的应用被引量：2: 2010年; 目的建立一种可信的单细胞全基因组扩增（whole genome amplification.WGA）技术,结合比较基因组杂交（comparative genomic hybridization,CGH）分析单细胞的染色体拷贝数变化,探讨其在胚胎植入前遗传学诊断（preimplantation genetic diagnosis,PGD）中的应用前景.方法采用引物延伸预扩增结合简并核苷酸引物PCR（primer extension preamplification with degenerate oligonucleotide primed-PCR,PEP-DOP-PCR）的方法,扩增12个已知核型的单细胞标本（包括5个绒毛标本、4个干细胞标本和3个淋巴细胞标本）和4个经PGD检测发现染色体异常的单卵裂球标本,将扩增产物标记红色荧光染料后,与标记绿色荧光染料的正常DNA等量混匀,与正常中期分裂相进行比较基因组杂交分析.同时,应用单纯的简并寡核苷酸引物-PCR（DOP-PCR）扩增10个单细胞DNA,标记后进行CGH分析.比较两种单细胞全基因组扩增方法的扩增效率及随后用于CGH分析染色体拷贝数时的准确性.结果所有的单细胞采用PEP-DOP-PCR扩增时,均能获得稳定均匀的PCR产物,片段大小范围在100～1000 bp之间,集中分布于400 bp左右的区域,CGH分析结果显示染色体拷贝数变化与其它技术检测的结果一致.而10个单纯的DOP-PCR扩增只有6个标本成功,扩增产物进行CGH分析时,杂交信号不均匀,有2个显示与其它技术分析的结果不一致.结论 PEP-DOP-PCR技术能有效地扩增单细胞的全基因组DNA,其扩增产物可应用CGH技术成功检测单个细胞的染色体拷贝数变化,而单纯的DOP-PCR技术易于出现扩增失败、扩增产物杂交后信号不均一的缺点.PEP-DOP-PCR全基因组扩增结合CGH技术在胚胎植入前遗传学诊断中有良好的应用前景.; 谭珂狄玉芬程德华徐芳卢光琇谭跃球; 关键词：引物延伸预扩增比较基因组杂交全基因组扩增单细胞

引物延伸预扩增在β-地中海贫血产前基因诊断中的应用研究被引量：1: 2007年; 目的探讨孕妇外周血中单个胎儿有核红细胞(NRBC)经引物延伸预扩增(PEP)后在β-地中海贫血产前基因诊断中应用的可行性。方法以2004年7月至2005年6月在广西医科大学第一附属医院行产前诊断,夫妇均为轻型β-地中海贫血,孕龄9～34周的28例孕妇为研究对象。显微操作获取母血中NRBC,PEP对单个NRBC进行全基因组扩增,短串联重复序列(STR)鉴定所取细胞的来源。证实为胎儿细胞的PEP产物作为模板进行β-珠蛋白基因扩增,反向点杂交确定胎儿β-珠蛋白基因型。结果每例发现NRBC4～13个,约43.6%的NRBC来源于胎儿。单个NRBC经PEP后STR及β-珠蛋白基因扩增成功率分别为100.0%和90.8%。经反向点杂交可鉴定胎儿β-珠蛋白基因点突变类型,与传统的产前诊断结果相比较,符合率为85.7%,误诊率14.3%。结论母血中单个胎儿NRBC经PEP后可以进行产前基因诊断,不仅可以应用于β-地中海贫血,也可应用于其它遗传病,是一条可供尝试的无创性产前诊断途径。; 韦红英龙桂芳刘壮林伟雄; 关键词：Β-地中海贫血引物延伸预扩增

引物延伸预扩增后STR分型在鉴定母血中胎儿有核红细胞的应用被引量：3: 2006年; 目的探讨一种鉴定母血中胎儿有核红细胞(NRBC)的方法,为无创性产前基因诊断创造必要条件。方法联苯胺染色识别孕妇外周血中 NRBC,经显微操作获取,并以引物延伸预扩增(PEP)对单个 NRBC 进行全基因组扩增后,用短串联重复序列(STR)分析其基因型,与父母基因型比对,确定该细胞的来源。结果 28例轻型β地中海贫血孕妇外周血样本中每例发现 NRBC 4～13个/5ml,经鉴定每例有胎儿 NRBC 2～8个/5ml,约43.6%的 NRBC 来源于胎儿。结论 PEP 后 STR 基因型分析能有效鉴定孕妇外周血中 NRBC 的来源,使应用单个胎儿 NRBC 进行产前基因诊断成为可能。; 韦红英龙桂芳林伟雄李树全; 关键词：寡核苷酸序列分析幼红细胞胎儿

引物延伸预扩增用于胚胎种植前诊断的实验研究: 2003年; 目的　用引物延伸预扩增 (PEP)方法对种植前胚胎进行单基因病诊断的实验研究。方法　取IVF后剩余胚胎的一个卵裂球用PEP方法 ,扩增SRY、ZP3 、RhCE、RhD和FVIII 5个基因 ,而同一胚胎的另一个卵裂球双重套式PCR扩增SRY和ZP3 基因。结果　PEP分析分别由 6个胚胎获得的 6个卵裂球 ,1- 4号胚胎有 19个基因呈阳性 (19/ 2 0 ) ,1个基因阴性 ,5 ,6号胚胎除SRY均阴性 ,其余基因为阳性 ;而 6个胚胎的卵裂球双重套式PCR扩增SRY和ZP3 基因的结果与同一胚胎PEP的结果相同。结论　采用PEP方法进行种植前胚胎单基因病的诊断是可靠、准确的 ,且可用于无创性产前诊断。; 马锦琪盛毅赵亚南纪亚忠; 关键词：引物延伸预扩增单基因病误诊基因诊断

引物延伸预扩增法应用于β-地中海贫血患者胚胎植入前遗传学诊断——附一例报告被引量：10: 2003年; 目的　探讨对 β 地中海贫血进行胚胎植入前遗传学诊断 (PGD)的方法。方法　两对夫妇双方均分别为密码子 41 42 ( TCTT)及插入序列 (IVS) Ⅱ 65 4(C→T)突变杂合子 ,在本中心进行超排卵和体外受精胚胎移植治疗 ,胚胎活检后应用全基因组扩增技术及反向点杂交进行胚胎PGD ,根据诊断结果选择健康的胚胎移植入子宫。结果　 2例患者共获卵 3 5个 ,受精率为 87% ,共活检胚胎16个 ,获卵裂球 2 5个 ,单卵裂球总扩增效率为 84% ,等位基因脱扣率为 15 %。 2例患者共移植 5个胚胎 ,1例获得妊娠 ,已分娩健康双胎。结论　应用引物延伸预扩增技术可对 β 地中海贫血进行PGD 。; 焦泽旭庄广伦周灿权舒益民李洁梁晓燕张敏芳邓明芬; 关键词：Β-地中海贫血遗传学诊断全基因组扩增胚胎植入卵裂球

应用引物延伸预扩增方法对地中海贫血进行植入前遗传学诊断的初步研究被引量：3: 2003年; 焦泽旭庄广伦周灿权梁晓燕张敏芳邓明芬; 关键词：地中海贫血植入前遗传学诊断

单细胞引物延伸预扩增分析多个基因被引量：5: 2001年; 目的　建立一种单细胞 (individual cell)水平引物延伸预扩增 (primer extensionpreamplification,PEP)方法 ,利用单个细胞同时分析多个基因。方法　采用 10 bp的随机引物先对单细胞的基因组预扩增 ,取其产物 5μl分别对 SRY、ZP3、Rh CE、Rh D、F 5个基因进行套式 PCR扩增。结果　单细胞 PEP后的产物能同时扩增 5个基因 ;对 4种已知基因型的白细胞进行诊断 ,正确率为 95 .6 %。结论PEP技术可以在单细胞水平分析 5个基因。; 马锦琪纪亚忠盛毅赵亚南; 关键词：引物延伸预扩增套式聚合酶链反应产前诊断

应用引物延伸预扩增反应技术检测孕妇血浆中的胎儿DNA被引量：1: 2001年; 目的 :建立一种检测孕妇血浆中胎儿DNA的新方法。方法 :对 6 5例 5～ 41孕周的孕妇血浆中胎儿DNA采用引物延伸预扩增 (PEP)后行特异性位点聚合酶链反应 (PCR)扩增 ,并用探针微孔板杂交法检测PCR产物。扩增的基因为Y染色体短臂SRY基因 ,扩增片段的大小分别为 35 1bp和 2 5 4bp。结果 :46例妊娠男性胎儿的孕妇中 41例血浆中出现SRY基因扩增带 ,检出率 89.13 % ;19例妊娠女性胎儿的孕妇中 3例 (15 .79% )为假阳性。本研究孕早、中、晚期的性别符合率分别为 10 0 %、90 .91%、75 % ,总符合率 86 .15 %。结论 :利用PEP法能解决孕妇外周血中胎儿细胞数量太少达不到常规扩增条件所要求的最低模板量的问题 ,同时配合探针微孔板杂交法能使诊断结果更准确。; 贺桂芳马旭陈汉平; 关键词：产前诊断引物延伸预扩增聚合酶链反应

应用引物延伸预扩增提高微量DNA拷贝数被引量：1: 2000年; 采用引物延伸预扩增方法 ,可普遍提高微量模板DNA的拷贝数 ,便于进行基因分析时克服标本量少、来源困难的制约。采用常规扩增、检测 2 4 8bp的DYZ1片段体系为观察对象 ,其最小模板量需 1.5ng/2 0 μl体系。以 15个碱基随机寡核苷酸为引物 ,对最小模板量进行预扩增 ,再以其产物 1/10为模板 ,特异扩增DYZ1片段。进行相对定量分析 ,判断原模板DNA拷贝数增加的程度。结果 1.5ng男性DNA经随机扩增后 ,此DYZ1片段拷贝数增加了 10倍以上 ,大大地提高了特异DNA片段扩增的模板量。表明经随机引物延伸预扩增后 ,微量标本DNA片段拷贝数获得普遍提高。; 赵庆国张郁李丽君焦保权朱爱萍朱军杰; 关键词：引物延伸预扩增微量DNA 拷贝数 PCR

引物延伸预扩增技术在β地中海贫血无创性产前基因诊断的应用研究: 目的:探讨孕妇外周血中单个胎儿有核红细胞(Nucleated red blood cell,NRBC)经引物延伸预扩增 (Primer extension preamplification,PEP)后在β地中海贫血无创性...; 韦红英龙桂芳刘壮林伟雄李树全; 关键词：无创性产前基因诊断 PEP 孕妇外周血 Β地中海贫血引物延伸预扩增; 文献传递

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