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环形泰勒虫裂殖体转化细胞抑制性消减文库的构建及差异基因的鉴定: 环形泰勒虫病(Tropical theileriasis)是由环形泰勒虫（Theileria annulata）寄生于牛淋巴细胞、巨噬细胞和红细胞内所引起的一种蜱传性血液原虫病。环形泰勒虫及同属的小泰勒虫（T.parva...; 赵洪喜; 关键词：环形泰勒虫抑制性消减杂交转化细胞; 文献传递

环形泰勒虫感染细胞抑制性消减文库的构建及ESTs分析被引量：1: 2015年; 【目的】环形泰勒虫(Theileria annulata)可以感染牛B淋巴细胞、树突状细胞和巨噬细胞,并可使被感染细胞发生转化,体外培养时可获得类似肿瘤样细胞的无限增殖能力。本研究通过构建环形泰勒虫转化和非转化宿主细胞抑制性消减文库,筛选环形泰勒虫裂殖体基因及转化细胞与宿主正常细胞之间的差异表达基因。【方法】以环形泰勒虫裂殖体转化细胞和非感染牛外周血单个核细胞(即非转化宿主细胞)为试验材料,提取总RNA和m RNA,反转录合成c DNA;然后分别作为tester和driver,进行抑制性消减杂交(SSH),构建环形泰勒虫转化和非转化宿主细胞抑制性消减文库;对随机挑取的阳性克隆进行测序及生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR对文库部分差异基因进行验证。【结果】通过对文库454个阳性克隆进行测序,共获得了有效表达序列标签(ESTs)364条,大小主要分布在350—1 200 bp之间;将这些ESTs序列在Gen Bank中进行BLASTn网上序列比对,其匹配于192条基因序列;其中包括环形泰勒虫序列60条(11条为虫体蛋白酶基因序列、10条为膜蛋白基因序列、7条为假设蛋白基因序列、5条为凋亡相关虫体蛋白基因序列、5条为核糖体蛋白基因序列、4条为细胞周期蛋白基因序列、4条为虫体抗原基因序列和虫体其它基因序列14条)、牛基因序列131条(其中19条为肿瘤相关蛋白基因序列)和1条未知序列;其中已有功能注释的ESTs 285条,再将已知功能的ESTs通过WEGO软件从生物学过程(biological process)、细胞组成(cellular component)和分子功能(molecular function)3个部分进行GO聚类分析,结果表明,宿主细胞差异基因主要集中在细胞、细胞进程、结合、催化、代谢进程、生物调节等功能方面。另外,通过对部分环形泰勒虫裂殖体转化宿主细胞差异基因进行荧光定量PCR分析,结果表明,肿瘤相关基因HCLS1和SENP5在转化宿主细�; 赵洪喜刘军龙李有全杨聪山赵帅阳刘娟刘爱红谢俊仁田占成刘志杰刘光远殷宏关贵全罗建勋; 关键词：环形泰勒虫抑制性消减杂交 ESTS

杂交盘羊尾部抑制性消减文库的构建与转录组初步分析: 绵羊生产中一直有为羔羊断尾的工作，不仅增加了工作量而且操作不当会使羔羊死亡，本实验室羊场有含75％血盘羊，其尾部短小，无需断尾。为探讨盘羊小尾形成的分子机制，本研究以含25%血杂交盘羊和含75%血杂交盘羊尾部组织为研究对...; 张烨华; 关键词：抑制性消减杂交转录组; 文献传递

黄鳝性腺抑制性消减文库的构建及分析: 本研究以黄鳝为实验材料,利用组织学切片技术,选取Ⅳ期卵巢组织和Ⅳ期精巢组织作为材料,构建了双向消减文库。从文库中挑取阳性克隆进行EST测序,并进行生物信息学分析,试图筛选一些黄鳝性腺该发育时期差异表达的基因,以期为黄鳝性...; 陈敏文; 关键词：黄鳝性腺抑制性消减杂交文库表达序列标签; 文献传递

猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫抑制性消减文库的构建被引量：4: 2013年; 采用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)构建猪肺炎支原体(Mycoplasma hyo-pneumonia,Mhp)诱导家蝇幼虫后产生差异表达基因的消减cDNA文库,并利用反向Northern杂交技术获得差异基因。结果表明,随机挑取的阳性克隆的大小均为200～750bp,通过斑点杂交技术共筛选出186个差异基因片段,对其克隆、测序及同源性分析后鉴定出20种编码蛋白的基因片段和21个无同源序列。家蝇幼虫经猪肺炎支原体诱导后产生与抗病原体相关的基因及大量的未知基因。; 王东方张惠马红霞高云航段永杰王莹卞璐王艳芳; 关键词：猪肺炎支原体家蝇抑制性消减杂交

牛多杀性巴氏杆菌诱导家蝇幼虫抑制性消减文库的构建: 2013年; 采用牛多杀性巴氏杆菌针刺法诱导3日龄家蝇幼虫,提取诱导后的家蝇幼虫总RNA并分离纯化得到高质量的mRNA。运用抑制性消减杂交(Suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建家蝇幼虫差异表达的cD-NA消减文库,并利用反向Northern杂交技术筛选差异表达基因。结果表明,随机挑取的阳性克隆片段大小均在200～750bp,通过反向Northern杂交共筛选出183个差异表达基因,经BLAST比对分析后鉴定出大量与家蝇免疫防御功能相关的基因和一部分无同源性基因。; 王莹高云航马红霞裴志花唐艳; 关键词：家蝇幼虫抑制性消减杂交 BLOT

牛多杀性巴氏杆菌诱导家蝇幼虫抑制性消减文库的构建及部分差异表达基因的分析: 随着抗生素耐药性问题的日趋严峻,研究和筛选具有新型作用机理的抗菌药物已成为当前医药领域里亟待解决的问题。而抗菌肽具有独特的,不同于抗生素的抗菌机制,仅作用于原核细胞和发生病变的真核细胞,对正常的真核细胞几乎没有影响,且不...; 王莹; 关键词：抑制性消减杂交 CDNA末端快速扩增; 文献传递

陆地棉开花后20d纤维抑制性消减文库的构建及分析: 2012年; 本研究以高比强度纤维材料0-153和转基因抗虫棉sGK9708为亲本构建的高代重组自交系群体(F6:9)中选育出的高比强度纤维品系(69307)作为材料,利用抑制性消减杂交技术,以15DPA纤维为driver、20DPA纤维为tester,成功构建出陆地棉开花后20d纤维的cDNA消减文库。通过蓝白斑筛选、菌落PCR及反向Northern技术最终筛选出差异表达的阳性克隆340个。通过对阳性克隆测序及序列分析,共得到115个单一序列,其中35个重叠群,80个单拷贝。利用Blast2GO等对差异表达基因进行生物信息学分析,结果表明这些差异表达基因广泛参与糖类、脂类、氨基酸等物质的代谢,以及纤维素生物合成、细胞壁合成与修饰、氧化还原、细胞信号转导等生物学过程。; 王少干商海红计志斌闫恒超李俊文刘爱英石玉真龚举武巩万奎王涛袁有禄; 关键词：棉花棉花纤维次生壁纤维强度抑制性消减杂交

诱导子组合对白桦三萜合成调控及MeJA抑制性消减文库分析: 本文以白桦(Betula platyphylla Suk.)悬浮细胞为材料,考察MeJA(茉莉酸甲酯)、SA(水杨酸)及NO(一氧化氮)三种诱导子单独处理及诱导子组合处理后三萜类物质(总三萜、齐墩果酸及白桦脂醇)的积累动...; 任春林; 关键词：三萜类化合物茉莉酸甲酯抑制性消减杂交; 文献传递

梨小食心虫滞育与非滞育幼虫抑制性消减文库的构建与分析被引量：4: 2012年; 【目的】分离和鉴定梨小食心虫(Grapholita molesta(Busck))滞育相关基因。【方法】分别以梨小食心虫滞育和非滞育幼虫为材料,通过抑制性消减杂交技术(SSH),构建梨小食心虫滞育与非滞育正、反向差减cDNA文库,从中筛选梨小食心虫滞育相关基因,并对其进行测序和分析。【结果】在获得的128个滞育特异和132个非滞育特异的EST中,有滞育差异表达EST 42条(17条功能未知)、非滞育差异表达EST 46条(22条功能未知)。对差异表达EST同源检索后推测,其功能大部分与滞育或非滞育特性相关。在滞育个体中,代谢酶和滞育关联蛋白基因表达量较高;在非滞育个体中,贮存蛋白和信号传递基因表达量较高。【结论】这些EST基本反映了梨小食心虫在滞育与非滞育期间的基因表达谱,为今后深入研究梨小食心虫滞育的分子机理奠定了基础。; 陈浩杨杰成卫宁仵均祥; 关键词：梨小食心虫滞育抑制性消减文库

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