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一种制备胎盘抗原肽复合物的工艺及其应用: 本发明公开了一种制备胎盘抗原肽复合物的工艺及其应用，包括以下步骤：步骤S1、将胎盘组织进行充分破碎匀浆后进行高速离心，收集溶液部分；步骤S2、将步骤S1中收集的溶液部分进行深层滤器过滤澄清，收获过滤澄清液；步骤S3、将步...; 李华楠熊云芳

HSP70-肝癌抗原肽复合物修饰DC瘤苗对CIK细胞增殖活性及表型变化的影响被引量：1: 2020年; 目的研究热休克蛋白70(HSP70)-肝癌抗原肽(SMMC7721人肝癌细胞株)复合物修饰的树突状细胞(DC)对细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞的增殖活性及表型的影响。方法获取健康供者的外周血单个核细胞(PBMC),培养2 h,贴壁细胞诱导分化DC,非贴壁细胞用于诱导培养CIK细胞,DC生长第7日开始负载HSP70(A组)、肝癌抗原肽(B组)、HSP70-肝癌抗原肽复合物(C组),另设单纯DC组(D组),流式细胞检测CD80、CD86的表达,体外构建HSP70-抗原肽复合物-DC瘤苗,并将其和CIK细胞按1∶10的比例混合培养5 d,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖能力,以流式细胞仪检测DC及CIK细胞膜表面分子表达。结果 HSP70-肝癌抗原肽复合物可促进DC成熟,DC表面分子CD86、CD80在C组表达均较D组高(P均<0.01)。HSP70-肝癌抗原肽复合物-DC瘤苗可明显刺激CIK细胞的增殖。HSP70-肝癌抗原肽复合物-DC瘤苗与CIK共培养可使CIK细胞CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+的表达提高,与单纯培养CIK细胞比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 HSP70-肝癌抗原肽复合物能提高DC表面分子CD80、CD86等表达,诱导DC的成熟,HSP70-抗原肽复合物-DC瘤苗与CIK细胞共培养可明显增加CIK细胞的增殖活性,提高CIK细胞CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+的表达。; 潘洁宋慧东王巧瑜萧间开; 关键词：热休克蛋白70

截短性HSP110抗原肽复合物免疫小鼠的CTL活性研究: 2015年; 目的观察基因工程来源的截短性热休克蛋白110(truncated heat shock protein110,tHSP110)抗原肽复合物免疫BALB/c小鼠在体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)的活性。方法基因工程来源的tHSP110在体外与人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2/neu)的胞外区(extracellular domain,ECD),非共价耦联方法构建tHSP110-ECD抗原肽复合物,并通过免疫共沉淀方法鉴定。分3次(每周1次)用HSP110、tHSP110、HSP110-P106-114(全长HSP110与HER2/neu ECD的一个CTL表位肽组成的复合物)、tHSP110-P106-114和HSP110-ECD复合物免疫BALB/c小鼠,末次免疫1周后,采用酶联免疫斑点(enzyme-linked immunospot,Elispot)法对T细胞分泌干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的水平进行检测,通过颗粒酶释放法检测tHSP110-ECD诱导的杀伤性T细胞的抗肿瘤效应。结果 T细胞IFN-γ分泌测定结果显示,全长HSP110组蓝色斑点数量为(17.50±3.89)个,tHSP110组为(17.75±3.54)个,HSP110-P106-114组为(72.16±4.22)个,tHSP110-P106-114组为(70.16±2.29)个,HSP110-ECD组为(90.38±5.85)个,tHSP110-ECD组为(88.38±6.14)个。tHSP110-P106-114组与tHSP110-ECD组分泌IFN-γ的小鼠脾细胞数目差异有统计学意义,P<0.05;tHSP110-ECD组与HSP110-ECD组相比,差异无统计学意义,P=0.741。特异性CTL检测的结果显示,HSP110组的杀伤率为(9.63±1.67)%,tHSP110组为(9.00±1.60)%,HSP110-P106-114组为(36.38±2.62)%,tHSP110-P106-114组为(38.50±4.37)%,HSP110-ECD组为(72.88±3.68)%,tHSP110-ECD组为(73.38±3.66)%。tHSP110-P106-114组与tHSP110-ECD组靶细胞杀伤率差异有统计学意义,P<0.05;tHSP110-ECD组与HSP110-ECD组相比差异无统计学意义,P>0.05。结论 tHSP110-ECD复合物作为肿瘤疫苗可刺激T淋巴细胞增殖为CTL,诱发机体的细胞毒性T细胞免疫反应,tHSP110具有同全长HSP110相同的结合大分子抗原的能力和激活CTL反应的能力。; 徐煌韩冬; 关键词：T淋巴细胞免疫应答

肠癌富伴侣分子-抗原肽复合物瘤苗及其制备方法: 本发明提供了一种富伴侣分子-抗原肽复合物的肠癌瘤苗及其制备方法，所述瘤苗为富含多种结合了抗原肽的蛋白分子(伴侣分子)的混合物，此混合物即为肠癌瘤苗。其制备方法如下：肠癌细胞加榄香烯后常规培养后经39℃～42℃热处理30分...; 黄常新吴正虎; 文献传递

负载重组人gp96-Ki67抗原肽复合物的树突状细胞疫苗的制备方法: 本发明公开了一种负载重组人gp96-Ki67抗原肽复合物的树突状细胞疫苗。包括：1.筛选、鉴定、合成Ki67抗原CTL表位肽；2.将合成的表位肽与重组人热休克蛋白gp96形成复合物；3.制备树突状细胞，并将该复合物负载于...; 郑骏年李慧忠李连涛张宝福刘俊杰张青杨洁章龙珍裴冬生; 文献传递

肾腺癌中T细胞亚群和HSP96肿瘤抗原肽复合物关系的探讨: 2011年; 目的:探讨肾腺癌无出血坏死者和肾腺癌有出血坏死与行肾动脉栓塞术者T细胞亚群的分布及意义、两组肾腺癌患者肿瘤组织中热休克蛋白(HSP96)的分布有无差异及意义。通过提取出肾腺癌患者癌组织中的HSP96肽复合物找到肿瘤相关的抗原肽。方法:1)选取肾腺癌无出血坏死患者30例,肾腺癌有出血坏死者17例,行肾动脉栓塞术患者13例。应用两步法免疫组织化学染色观察其T亚群的分布及HSP96的含量和分布。2)通过经典的HSP96-抗原肽复合物提取方法提取出热休克蛋白肽复合物并进行质谱分析。结果:1)两组比较CD3^+T细胞、CD4^+T细胞、CD8^+T细胞及CD4^+/CD8^+的比值有统计学差异(P<0.05)。2)两组比较肾腺癌中含有的HSP96没有统计学意义(P>0.05)。3)经LC-ESI-MS-MS测得其中两个主要肽段的序列分别为LVPLEGWGGNVM和PPVYYVPYVVL,其分子量分别为1 270.68和1 307.70。结论:术前行动脉栓塞术和肾腺癌有出血坏死者因为肿瘤细胞的坏死而使其细胞内具有抗原性的肽段释放出来,从而提高了效应T细胞在肿瘤局部的数量,对肿瘤组织的杀伤及抑制肿瘤细胞的扩散具有重要的意义。根据gp96结合肽的特点推测其可能为肿瘤抗原肽,有待进一步鉴定。; 李建民李慧中李黎明孙光畅继武; 关键词：肾腺癌 T细胞亚群肽复合物

B、T淋巴细胞弱化因子胞外段联合热休克蛋白70-子宫颈癌TC-1细胞抗原肽复合物治疗小鼠子宫颈癌模型的效果被引量：3: 2010年; 目的探讨B、T淋巴细胞弱化因子（BTLA）胞外段联合热休克蛋白（HSP）70-宫颈癌TC-1细胞（HSP70-TC-1）抗原肽复合物治疗小鼠宫颈癌模型的效果。方法（1）将TC-1细胞接种于C57BL／6小鼠成瘤后，实时荧光定量PCR技术检测小鼠肿瘤组织中BTLA、疱疹病毒侵入介质（HVEM）mRNA的表达，流式细胞仪检测肿瘤组织中浸润的淋巴细胞细胞膜表面BTLA、HVEM的表达（以荧光强度表示）。（2）小鼠接种TC-1细胞后，根据处理方法的不同分为5组，即pcDNA3．1（注射空载体pcDNA3．1质粒，作为对照）、psBTLA（注射表达BTLA胞外段的真核表达载体psBTLA质粒）、HSP70（注射HSP70-TC-1抗原肽复合物）、HSP70＋pcDNA3．1（注射HSP70-TC-1抗原肽复合物和pcDNA3．1质粒）、HSP70’psBTLA（注射HSP70-TC-1抗原肽复合物和psBTLA质粒）组，观察各组小鼠体内肿瘤的生长情况；并采用实时荧光定量PCR技术检测各组肿瘤组织中相关免疫基因包括．y干扰素（IFN-γ）、白细胞介素（IL）2、IL-10、转化生长因子B（TGF—β）和人叉头型基因P3（FoxP3）mRNA的表达；免疫组化法计数各组瘤旁组织中CD8＋T淋巴细胞；7-氨基放线菌素D／羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯双标法检测各组脾淋巴细胞的杀伤效应（以杀伤率表示）；氚标记胸腺嘧啶核苷掺入法测定各组脾淋巴细胞的增殖活性，酶联免疫吸附试验测定各组脾淋巴细胞培养上清液中IL-2和IFN-γ的浓度。结果（1）小鼠接种TC-1细胞后第7、14、21、28天，其肿瘤组织中BTLAmRNA的表达水平逐渐上调，第14天达最高，为2．83±0．35，与第7天的1．66±0．25比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；而HVEMmRNA的表达水平无明显变化（P〉0．05）。接种TC-1细胞后第7、14天，肿瘤组织中浸润的淋巴细胞细胞膜表面BTLA的平均荧光强度分别为33．5和51．8，两者比较，差异有统计学意义（P〈0; 韩凌斐邱伟民胡程王玲姚红霞熊诗诣孟梦方勇马丁; 关键词：HSP70热休克蛋白质类疱疹病毒科

富伴侣分子肿瘤抗原肽复合物的制备: 2009年; 目的:探索制备高免疫原性的富伴侣分子的肿瘤抗原肽复合物的方法与实验条件。方法:设置35℃、37℃、39.5℃和42℃等4种不同温度结合天花粉蛋白处理小鼠结肠癌CT26细胞,制备富伴侣分子肿瘤抗原肽复合物,采用淋巴细胞增殖刺激效应实验测定肿瘤抗原肽复合物的免疫活性。结果:随着温度的升高,诱导伴侣分子合成效应越强,以42℃诱导的肿瘤细胞合成伴侣分子效应最强烈。结论:42℃时配合天花粉诱导的肿瘤细胞合成伴侣分子效应最强烈,可提高肿瘤细胞的免疫原性,可在体外致敏树突状细胞(DC)和制作瘤苗,以期在防治大肠癌和其复发上有较好的应用价值。; 吴小昌杨关根黄常新沈忠丁菁王青青余海; 关键词：热应激天花粉蛋白大肠癌

感染非典型新城疫蛋鸡组织中HSP70抗原肽复合物提取与纯化被引量：1: 2009年; 为建立从患有非典型新城疫的蛋鸡组织细胞中提取、纯化热休克蛋白HSP70抗原肽复合物的方法,采取三步蛋白纯化法从非典型新城疫蛋鸡肝脏组织中提取、纯化HSP70抗原肽复合物。经分级硫酸铵盐析后,依次用ConA-Sepharose亲和层析和DEAE-Sephacel离子交换层析分离纯化。所得蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blotting进行蛋白分子量及性质鉴定,Bradford法测定蛋白浓度。分离、纯化得到的蛋白经SDS-PAGE、银染鉴定为单一带,分子量为70ku;Western blotting结果证实为HSP70。每克新鲜肝脏细胞最终获得90～110μgHSP70。使用本分离纯化方法可获得高纯度HSP70抗原肽复合物。; 石娇于维军吴高峰冯影; 关键词：非典型新城疫蛋鸡

肠癌富伴侣分子－抗原肽复合物瘤苗及其制备方法: 本发明提供了一种富伴侣分子－抗原肽复合物的肠癌瘤苗及其制备方法，所述瘤苗为富含多种结合了抗原肽的蛋白分子(伴侣分子)的混合物，此混合物即为肠癌瘤苗。其制备方法如下：肠癌细胞加榄香烯后常规培养后经39℃～42℃热处理30分...; 黄常新; 文献传递

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