搜索到221篇“ 报告基因系统“的相关文章
- 基于Luciferase报告基因系统的重组嵌合膜蛋白及其应用
- 本发明涉及一种基于Luciferase报告基因系统的重组嵌合膜蛋白及其应用,该重组嵌合膜蛋白可用于筛选针对CD47或SIRPα的特异性分子药物,检测其阻断CD47‑SIRPα信号通路的活性,具有检测方便、快速,稳定性好,...
- 刘贤钦钟钰婷陈玲伽黄贤明李胜峰
- 副溶血弧菌lux报告基因系统的建立与应用
- 2024年
- 目的:建立副溶血弧菌的lux报告基因融合实验平台,为后续研究基因转录调控机制奠定基础。方法:采用PCR扩增opaR的启动子区序列,并将其克隆入pBBRlux质粒中,构建重组质粒opaR-lux。将opaR-lux重组质粒分别转入野生株(WT)、opaR突变株(ΔopaR)和aphA突变株(ΔaphA)中,检测特定培养条件下三者发出的冷光值(Lux)以及在600 nm处的吸光度值(OD600),以“Lux/OD600”表示单位OD600下的相对平均冷光单位(relative light unit,RLU)。通过比较各菌株的RLU大小,判断OpaR和AphA对opaR的调控关系,以检验实验平台的稳定性。结果:成功构建出带有opaR的pBBRlux重组质粒;在低密度(OD600<0.4)时,AphA负调控opaR的转录,当细菌达到高密度(OD600=0.8)时,AphA则对opaR的转录不起调控作用;在细菌从低密度生长到高密度(即OD600<0.8)中,OpaR对自身的转录存在负调控作用。结论:成功建立了副溶血弧菌的lux报告基因融合实验平台,用于后续转录调控机制的研究。
- 薛星帆张苗苗张婷婷吴齐敏陆仁飞张义全
- 关键词:副溶血弧菌LUX
- 一种检测蛋白酶活性的荧光素酶报告基因系统的构建及应用
- 2023年
- 为建立一种检测蛋白酶活性的方法,本研究将IL-1β前体基因和荧光素酶基因融合,克隆至p CAGGS真核载体,构建了基于荧光素酶的报告基因系统(iGLuc),同时构建GLuc真核表达质粒作为对照。以PRRSV nsp4和ASFV S273R蛋白酶为检测对象,利用该报告基因系统对病毒蛋白酶活性进行检测,将iGLuc中蛋白酶酶切位点(FVCDAN)相对应的基因序列替换为Kpn I酶切位点,构建重组质粒Kpn I-iGLuc,然后分别将PRRSV nsp4和ASFV S273R蛋白酶切割位点对应的核酸序列插入至报告基因Kpn I-iGLuc中的Kpn I位点,构建重组质粒nsp4-iGLuc和S273R-i GLuc。分别将报告基因质粒(iGLuc、GLuc、Kpn I-i GLuc、nsp4-i GLuc和S273R-iGLuc)与不同剂量的相应蛋白酶真核表达质粒共转染HEK293T细胞,24 h后检测上清中荧光素酶GLuc的活性。结果显示,转染i GLuc、nsp4-iGLuc或S273R-iGLuc质粒的上清中荧光信号随着相应蛋白酶的剂量增加而升高,呈现剂量依赖性,而缺失蛋白酶切位点的对照质粒无该现象,表明构建的荧光素酶报告基因能够特异性地检测细胞蛋白酶和病毒蛋白酶的活性。本研究首次建立了一种检测蛋白酶活性的方法,并以PRRSV nsp4和ASFV S273R蛋白酶验证了该方法的应用价值,为后续开展高通量化筛选抗PRRSV、ASFV等药物的研究奠定了基础。
- 周仕君宋洁李帅刘佳李江南翁长江
- 关键词:蛋白酶活性荧光素酶报告基因
- 基于Luciferase报告基因系统的重组嵌合膜蛋白及其应用
- 本发明涉及一种基于Luciferase报告基因系统的重组嵌合膜蛋白及其应用,该重组嵌合膜蛋白可用于筛选针对CD47或SIRPα的特异性分子药物,检测其阻断CD47‑SIRPα信号通路的活性,具有检测方便、快速,稳定性好,...
- 刘贤钦 钟钰婷 陈玲伽 黄贤明 李胜峰
- 基于荧光素酶双报告基因系统体外验证长爪沙鼠Cip4基因受RXR及T4调控
- 目的探讨核转录因子TRB、RXR和激动剂T4对Cip4基因表达的调控作用。方法合成长爪沙鼠Cip4基因启动子区序列,构建报告载体pGL3-Cip4;将转录因子TRB、RXR克隆到pcDNA3.1表达载体上。将pGL3-C...
- 王志远刘月环
- 关键词:长爪沙鼠
- 一种基于荧光素酶报告基因系统鉴定circSMARCA5的方法
- 本发明公开了一种基于荧光素酶报告基因系统鉴定circSMARCA5的方法,属于基因工程技术领域。本发明公开的一种基于荧光素酶报告基因系统鉴定circSMARCA5的方法,利用pGL4‑circSMARCA5‑Luc‑CM...
- 陈华涛高登科靳亚平王爱华刘薇刘田马白荣
- 利用双荧光素酶报告基因系统及分子对接技术筛选PGC-1α小分子调控剂的方法
- 本发明公开了一种利用双荧光素酶报告基因系统及分子对接技术筛选PGC‑1α小分子调控剂的方法。通过构建PGC‑1α启动子序列的双荧光素酶报告基因载体,筛选直接激活PGC‑1α表达的小分子调控剂,同时对启动子序列进行截短,筛...
- 王旭郭璞黄玲利潘源虎陶燕飞程古月郝海红刘振利
- 应用于筛选生物被膜抑制剂的报告基因系统
- 本发明涉及一种应用于筛选生物被膜抑制剂的新型报告基因系统,本申请证明bsrA基因能够抑制铜绿假单胞菌生物被膜的形成,其编码基因在细菌中过表达,能够显著抑制生物被膜的产量。因此,以该基因为标记,构建一种新型报告基因系统,筛...
- 杨洪江杨肖静黄志伟张茜茜龚梦馨张志强
- 文献传递
- 基于ISRE报告基因系统的清肺口服液黄酮类化合物筛选与验证被引量:1
- 2022年
- 目的以干扰素激活反应元件(ISRE)启动子为靶点,建立受ISRE调控稳定表达荧光素酶活性的细胞模型,用以清肺口服液黄酮类化合物筛选,并对筛选结果予以验证。方法将高纯度ISRE荧光素酶报告基因质粒与海肾荧光质粒共同转染293T工具细胞,进行启动子活性检测。将ISRE报告基因质粒与病毒包装辅助质粒Helper 1.0、2.0共同转染工具细胞,收集慢病毒用于侵染A549细胞,经过药物筛选与RT-qPCR检测后得到稳定细胞株。利用稳定细胞株对清肺口服液中32个黄酮类化合物进行筛选,最后验证化合物对受ISRE正向调控的基因表达的影响。结果ISRE启动子活性良好,通过慢病毒转染成功,构建受ISRE调控稳定表达荧光素酶活性的细胞模型,并通过双荧光素酶检测予以功能确认。从32个黄酮类化合物筛选出6个能够促使ISRE表达的化合物。RT-qPCR与Western blot技术从受ISRE正向调控基因的转录水平与蛋白表达层面验证了筛选出的单体化合物能够促使ISRE的表达。结论成功构建能够高效检测ISRE活性的报告基因系统,利用该系统成功筛选出能促使ISRE表达的清肺口服液黄酮类化合物,具有一定的理论与应用价值。
- 孙亚磊陶嘉磊赵佩佩朱城璧袁斌
- 关键词:清肺口服液黄酮类化合物ISRE报告基因系统
- 鼠原始生殖细胞报告基因系统的建立及验证
- 2022年
- 目的:构建小鼠原始生殖细胞(PGCs)报告基因系统。方法:根据CRISPR基因编辑技术结合同源重组原理,针对鼠Prdm1和Dppa3基因的翻译起始位点ATG附近位置分别设计一对sgRNA,并根据Cas9切割位点以及拟插入目的片段构建相应的用于同源重组的供体质粒,将sgRNA与Donor质粒同时转染入小鼠胚胎干细胞(ESCs)中,并利用质粒携带的抗性基因筛选出目标单克隆细胞,并进行基因型鉴定。结果:通过提取单克隆细胞的基因组DNA进行基因型鉴定,PCR和Sanger测序结果显示,单克隆细胞的基因组中,Prdm1和Dppa3基因翻译起始位点后分别成功插入eGFP和mCherry荧光蛋白编码序列。利用细胞因子诱导eGFP-Prdm1/mCherry-Dppa3mESCs(mouse ESCs)定向分化为mPGCs(mouse PGCs),流式细胞仪检测显示诱导分化的mPGCs特异表达eGFP和mCherry荧光信号。结论:成功构建mPGCs报告基因系统,可用于后续研究mPGCs命运决定的分子机制,对于研究小鼠早期胚胎发育过程具有重要意义。
- 黄书奇阎晗胡德庆
- 关键词:胚胎干细胞原始生殖细胞基因敲入
相关作者
- 李晶哲

- 作品数:40被引量:126H指数:8
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- 研究主题:均匀设计 报告基因系统 配伍研究 多环芳烃 中药有效组分
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- 作品数:32被引量:40H指数:4
- 供职机构:中国中医科学院
- 研究主题:TRAIL 报告基因系统 骨质疏松 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 抗肿瘤
- 郭志兰

- 作品数:11被引量:12H指数:3
- 供职机构:中国中医科学院
- 研究主题:TRAIL 报告基因系统 荧光素酶 报告基因 血清
- 卢大儒

- 作品数:388被引量:1,290H指数:19
- 供职机构:复旦大学
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- 余细勇

- 作品数:679被引量:1,242H指数:16
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