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均相时间分辨荧光法检测德谷胰岛素生物学活性: 2024年; 本研究以CHO_INSR_1284转基因细胞系为靶细胞,利用均相时间分辨荧光技术建立德谷胰岛素生物学活性检测方法。对关键参数进行优化,并依据中国药典(2020版四部通则9401、1431)进行验证。结果表明,德谷胰岛素在本方法中存在良好的剂量效应关系,符合四参数曲线。经优化,细胞种板密度为每毫升3.5×10^(5)个,德谷胰岛素初始浓度为57.18μg·m L^(-1),稀释倍数为4倍,刺激时间为45 min,孵育时间为4 h。本方法专属性强,5个效价水平几何变异系数GCV%为4.1%~10.6%,线性拟合的直线回归方程为y=1.015x-0.0277,R^(2)=0.9996,结果证明此方法具有的较好中间精密度和线性。且回归项非常显著(P<0.01),偏离平行项和模型失拟项均不显著(P≥0.05),均符合中国药典要求。本研究建立了一种基于均相时间分辨荧光技术的德谷胰岛素生物学活性检测方法,该方法可用于德谷胰岛素类产品的生物学活性评价和质量控制。; 高婧王绿音李晶吕萍高向东梁成罡; 关键词：生物学活性转基因细胞

均相时间分辨荧光法测定阿达木单抗结合活性被引量：2: 2022年; 目的建立一种基于均相时间分辨荧光(HTRF)技术的分析方法,用于快速、简便、稳定地检测阿达木单抗与TNF-α抗原的结合活性。方法将检测试剂、梯度稀释的标准品及待测样品加入96孔板,孵育后在酶标仪上读取荧光信号值,用软件对信号值和抗体浓度进行四参数曲线拟合,根据标准品及待测样品的EC_(50)值计算样品的相对结合活性;同时对方法的专属性、准确性、精密度、线性与范围及稳定性指示能力进行验证;此外对该方法与常规酶联免疫吸附法(ELISA)进行了对比研究。结果建立的HTRF检测法呈典型的“S”型剂量-效应曲线;方法验证结果显示,本法专属性强,相对结合活性的检测范围为50%~150%,在此范围内线性良好,相关系数在0.99以上,斜率接近1.0;平均回收率范围为92.5%~104.8%;重复性及不同人员之间精密度的CV均不超过15%;本法可反映加热破坏的单抗样品的结合活性变化趋势;对比研究显示,HTRF法与ELISA法测得的结果等效。结论建立了一种新的检测阿达木单抗与TNF-α结合活性的测定方法,该法经验证符合要求,可代替ELISA法用于该类单抗药物结合活性的测定,适用于细胞克隆筛选、原液或成品质量放行检测及稳定性研究等。; 邓春平陈航谢建华刘翠华; 关键词：阿达木单抗肿瘤坏死因子-Α 结合活性酶联免疫吸附法

均相时间分辨荧光法测定人胰岛素生物学活性被引量：1: 2022年; 建立基于均相时间分辨荧光免疫分析技术的人胰岛素体外生物学活性测定方法。利用CHO-INSR B1284转基因细胞,通过均相时间分辨荧光免疫分析系统检测人胰岛素的体外生物学活性;对靶细胞铺板密度、药物的量效范围、刺激时间等关键参数进行优化;验证方法的专属性、相对准确度、中间精密度、线性与范围,以及细胞的传代稳定性;以重组人胰岛素国家标准品为参比品,将本研究建立的方法应用于其他人胰岛素类似物原料药、制剂的生物学活性测定。结果表明人胰岛素及其类似物存在剂量效应曲线,R^(2)>0.995,符合四参数方程y=(A-D)/[1+(x/C)^(B)]+D。本方法专属性良好,64%、80%、100%、125%、156%共5个效价浓度的待测品相对效价(n=8)的几何均值、相对偏倚、几何变异系数(GCV,%)均符合《中华人民共和国药典》2020版四部通则9401的要求;且方法可适用于其他胰岛素类似物的生物学活性测定。该方法操作简便、耗时短、准确度高、精密度好,可用于胰岛素类产品的生物学活性评价和质量控制。; 王绿音杨艳枫张孝明吕萍张慧李晶梁成罡; 关键词：生物学活性人胰岛素转基因细胞

均相时间分辨荧光法测定抗PD-1/PD-L1单抗药物活性被引量：1: 2019年; 目的:探索并建立一种均相时间分辨荧光(homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF)检测方法,用于快速、灵敏、稳定检测单克隆抗体的活性。方法:将检测试剂、待检样品加入96半孔板,室温振荡孵育3 h后在酶标仪上读取荧光信号值,用软件对信号值进行四参数曲线拟和,根据四参数方程计算单抗的相对活性;同时对该方法进行验证。结果:本文构建的检测方法呈典型的反S型剂量效应曲线,且反应缓冲液中添加0.4 mol·L^(-1)氟化钾可提高荧光响应值。对该方法进行验证,专属性强,只与抗PD-1/PD-L1单抗发生反应;2名不同分析人员重复检测6次,相对效价范围为85%～117%,总RSD为13%;准确性良好,不同浓度供试品溶液回收率均在80%～120%范围内;理论相对活性与实际测得相对活性线性良好,相关系数在0.99以上,斜率接近1.0,符合方法验证要求。结论:通过对HTRF检测条件的摸索及验证,建立了一种新型测定单抗活性的方法,且该方法快速简便,可用于单抗的前期筛选或后期活性检测。; 孙亮李萌于传飞王兰; 关键词：单克隆抗体药物活性氟化钾

时间分辨荧光法检测乙肝表面抗原LOD及参考区间的验证和建立被引量：1: 2019年; 目的验证时间分辨荧光分析法检测乙肝表面抗原(HBs Ag)的检出限(LOD),评价参考区间的合适性。方法自2017年10月～2018年1月对HBs Ag二级标准物倍比稀释后采用时间分辨荧光分析法及酶联免疫吸附法(ELISA)进行配对检测,标准物浓度除以稀释后检测结果出现阴性的上一稀释度为LOD,验证厂商的声明,比较两种方法检测同一稀释度样品结果,评估厂商声明的参考区间的合适性;根据美国临床实验室标准委员会(CLSI)EP17-A2规定的方法建立空白限(LOB)及LOD,评价已建立的LOD作为参考区间上限的合适性。结果时间分辨荧光法的LOD验证结果为0.1 U/m L,与厂商声明相符。如使用时间分辨荧光检测系统厂商声明的参考区间,标准物稀释3倍后结果判为假阴性,与ELISA检测结果不符。重庆医科大学附属永川医院(以下简称"我院")检验科建立的HBs Ag的LOB及LOD分别为0.048 ng/m L及0.137 ng/m L,如以我院检验科建立的LOD制订参考区间,稀释3倍后两种方法结果一致,均为阳性。结论时间分辨免疫荧光分析系统声明的LOD可以接受,但厂商声明的参考区间不适宜,易导致假阴性。检验科应建立自己的LOD来制订参考区间。建议在对病毒标志物定量检测项目进行性能验证时增加参考区间的验证。; 黄利君常凡莫展刁奇志; 关键词：乙肝表面抗原 LOD

时间分辨荧光法对泰州地区宠物弓形虫感染情况分析: 2019年; 弓形虫病是一种人畜共患病,应引起宠物饲养者的重视。本试验采用时间分辨荧光抗体检测法对泰州地区采集的不同来源犬、猫血清样本进行弓形虫抗体检测。结果表明,该地区宠物血清样本总阳性率为12.06%,其中犬血清阳性率为8.31%,猫血清阳性率为18.87%;并且农村散养与流浪的犬、猫弓形虫抗体阳性率最高。; 卓国荣穆洪云周红蕾张斌高雪敏; 关键词：弓形虫病

单值质控图在生乳钙含量时间分辨荧光法测定中的应用被引量：2: 2018年; 目的研究单值质控图在生乳钙含量时间分辨荧光法快速测定中的应用,借助单值质控图表征合理地赋予被测量之间的分散性,了解测量结果所处的范围,分析影响测量结果的主要因素,从而减少测量的误差。方法利用纯牛奶核查样品(核查样品指质量控制测量中附有参考量值的物料,指定实验室检测样品的检测值),收集钙含量测定数据,分析和计算质量控制图参数,绘制质量控制图幵分析应用效果。结果单值质量控制图法实现了对生乳中钙含量测试结果控制,建立了一种预警响应机制。单值质量控制图法是实现问题快速查找的有效方法之一。结论单值质量控制图应用为实验室技术要素管理和考核评价提供依据。; 李梅智丽慧王丹慧王丹侯占林; 关键词：生乳时间分辨荧光法

时间分辨荧光法检测宫颈脱落细胞p16^(INK4a)蛋白用于宫颈肿瘤筛查被引量：1: 2018年; 目的应用时间分辨荧光法(TRFIA)检测宫颈脱落细胞p16^(INK4a)蛋白,将其应用于宫颈肿瘤筛查。方法搜集2015年1月-2016年5在荆门市第一人民医院病理科进行宫颈组织学活检并进行过TCT和/或DNA倍体分析检测标本,宫颈脱落细胞离心甩片进行TCT检测,Feulgen染色行DNA倍体分析,TRFIA方法检测p16^(INK4a)蛋白。结果 694例标本中组织病理学诊断宫颈炎性病变501例,宫颈肿瘤性病变193例,包括低级别上皮内病变(LSIL)83例、高级别上皮内病变89例(HSIL)、鳞状细胞癌(SCC)21例。TCT检测筛查宫颈肿瘤敏感性为76.68%,特异性为87.03%;DNA倍体分析检测敏感性84.97%(优于TCT,χ2=4.280,P=0.039),特异性73.45%(低于TCT,χ~2=29.105,P<0.001)。TRFIA检测p16^(INK4a)筛查宫颈肿瘤敏感性为86.01%,与DNA倍体分析相似(χ~2=0.084,0=0.773),优于TCT检测(χ~2=5.532,P=0.019),且特异性达92.42%,亦优于TCT检测(χ~2=7.889,P=0.005)。结论时间分辨法检测宫颈脱落细胞p16^(INK4a)蛋白用于宫颈肿瘤筛查,敏感性及特异性均较好。如果试剂盒商品化,还具有操作简便、成本低廉、能用仪器自动化检测并给出客观判读结果的优点。; 丁莉陈琼邹先进郑杰; 关键词：宫颈肿瘤 P16^INK4A 时间分辨荧光法

一种时间分辨荧光法四项综合检测卵巢癌试剂盒及其应用: 本发明涉及生物和医学检测技术领域，具体涉及一种在同一反应体系内同时综合检测卵巢癌肿瘤标志物四项指标HE4、CA125、CEA、TPS的时间分辨荧光免疫检测试剂盒，同时还涉及该试剂盒在综合检测四项卵巢癌肿瘤标志物HE4、C...; 王嘎程自卿

一种时间分辨荧光法综合检测子宫癌试剂盒及其应用: 本发明涉及生物和医学检测技术领域，具体涉及一种在同一反应体系内同时综合检测子宫癌肿瘤标志物SCC、CEA、CA125、β-HCG的时间分辨荧光免疫检测试剂盒，同时还涉及该试剂盒在综合检测子宫癌肿瘤标志物SCC、CEA、C...; 王嘎程自卿

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