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柯萨奇 病毒 A 组 16 型 被引量：21 2009年 柯萨奇 病毒 A 组 16 型 (Coxsackievirus A Group 16 Strain,CVA 16 )是手足口病(Hand,Foot and Mouth Disease,HFMD)的主要致病原之一,对其生物学特征、致病机理、临床表现、实验室诊断、流行病学和分子流行病学的认识,有助于提高HFMD及其它相关疾病的防治水平。研发CVA 16 的诊断方法和疫苗,建立健全CVA 16 的流行病学和实验室监测网络,可以对CVA 16 引起的HFMD的流行进行预测和预警,对预防CVA 16 引起的HFMD有重要的意义。关键词：柯萨奇病毒A组16型 手足口病 分子流行病学 柯萨奇 病毒 A 组 16 型 VP1-145位氨基酸变异影响对硫酸乙酰肝素结合能力的初步探究2024年 柯萨奇 病毒 A 组 16 型 (Coxsackievirus A 16 ,CVA 16 )与肠道病毒 A 71型 (Enterovirus A 71,EV-A 71)是国内导致手足口病的重要病原体,二者同源,来自共同祖先,基因组 结构相同,并且均使用硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)作为吸附受体。本研究基于EV-A 71的VP1-145位氨基酸位点的相关研究结果,分析CVA 16 的VP1-145氨基酸差异,选取3株中国流行的,在该位点具有差异的CVA 16 ,进行对HS结合能力影响的研究。使用不同浓度肝素酶Ⅰ处理人横纹肌肉瘤(Human rhabdomyosarcoma,RD)细胞,比较不同CVA 16 株对肝素酶Ⅰ处理前后的RD细胞的吸附能力,以及接种后12h,24h,48h后各毒株在RD细胞的复制情况。结果表明,在使用5mIU/mL和10mIU/mL浓度肝素酶Ⅰ水解RD细胞表面的HS后,VP1-145氨基酸位点为甘氨酸(Glycine,G)的CVA 16 对RD细胞的吸附能力下降,其下降程度与肝素酶Ⅰ的作用浓度呈正相关,且影响了后续12h,24h,48h病毒 在RD细胞中的复制,其差异具有统计学意义(P<0.05)。而VP1-145氨基酸位点为谷氨酸(Glutamic acid,E)的两株CVA 16 均未观察到此种趋势。为了进一步探究该种结合能力的差异与病毒 致病力之间的关系,对三株病毒 进行2日龄ICR乳鼠感染实验。通过观察乳鼠生存率、临床评分、体重变化,来评估不同CVA 16 株在小鼠感染模型 中的致病力差异。结果表明,CVA 16 (VP1-145E)的致病力明显强于CVA 16 (VP1-145G)。后对三株病毒 进行全基因组 测序,测序结果显示,除VP1-145位点外,三株CVA 16 还存在其他的差异位点,故后续我们又通过反向遗传学拯救病毒 ,对VP1-145位点的作用机制进行了进一步的探讨。本研究结果证实,VP1-145位点的氨基酸变异会影响CVA 16 与HS的结合能力,145位点为E的病毒 ,其与HS的结合能力较差,当145位点由E突变至G时,病毒 与HS的结合能力增强,其与RD细胞的结合能力受到肝素酶Ⅰ的影响。本研究为CVA 16 毒力位点与致病机制的研究提供了一定的理论基础关键词：柯萨奇病毒A组16型 硫酸乙酰肝素 致病力 福建省2020—2023年手足口病相关柯萨奇 病毒 A 组 16 型 的分子流行病学研究 2024年 柯萨奇 病毒 A 组 16 型 (coxsackievirus A 16 ,CVA 16 )在福建省的分子流行病学特征。方法对2020—2023年福建省CVA 16 相关手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)进行流行病学特征分析;RT-PCR扩增CVA 16 完整VP1基因并进行序列测定,采用MEGA X等软件进行CVA 16 的遗传进化分析。结果福建省2020—2023年合计13120份HFMD病例,CVA 16 相关HFMD构成比为16 .5%(216 0/13120),其中,2020—2023年各年度分别占4.7%(94/2019)、14.1%(457/3243)、47.6%(1521/3199)、1.9%(88/4659)。CVA 16 引起HFMD患者主要集中在1~5岁儿童,3岁居多。获取的福建省2020—2023年92条完整CVA 16 VP1基因序列遗传进化和基因型 特征分析显示,福建省CVA 16 毒株与原型 株遗传距离较远;2020—2023年福建省CVA 16 基因型 存在B1a、B1b、B1c三种基因进化分支,其中,福建省2020年B1a与B1b构成比各占40%和60%;2021年B1a与B1b各占81.8%和18.2%;2022年仅有B1a;2023年有B1a、B1b与B1c,分别占44.4%、7.4%、48.2%,1~9月以B1a为主要流行株,10月后福建省既往未曾发现且在国内罕见的B1c被检出,并成为优势基因分支。结论福建省CVA 16 优势基因进化分支从2020年的B1b逐渐转变为2021—2023年的B1a。2023年10月后,福建省新发现的B1c成为本省优势基因进化分支。关键词：手足口病 柯萨奇病毒A16 分子流行病学 大连市2022-2023年手足口病柯萨奇 病毒 A 组 16 型 分子流行特征分析 2024年 柯萨奇 病毒 A 组 16 型 的VP1区的基因进化特征。收集2022年1月-2023年12月手足口病疑似病例16 77例,利用Real-time PCR方法进行肠道病毒 核酸检测,利用RTPCR对CVA 16 核酸阳性标本VP1区进行扩增和测序,并使用肠道病毒 在线定型 工具(Enterovirus genotyping tool version 1.0)进行病毒 型 别鉴定。从GenBank下载参考序列利用DNA Star软件和MA GE11.0软件对CVA 16 的VP1区进行氨基酸变异分析和进化分析。结果显示全部16 77个病例中,检出肠道病毒 阳性1472病例,阳性率为87.78%,其中CVA 16 型 共252个病例(17.12%)。CVA 16 阳性病例主要分布在3~6岁,4岁以上儿童CVA 16 病毒 感染比例随年龄增长而呈下降趋势。大连市手足口病的2022年和2023年主要病原体分别是CVA 16 和CVA 6,其中CVA 16 在2022年的主要基因型 是B1c亚型 ,2023年的主要基因型 是B1a亚型 。本研究获得CVA 16 的VP1区序列16 8条,其中有82株属于B1a亚型 (82/16 8,48.81%);73株属于B1c亚型 (73/16 8,43.45%);13株属于B1b亚型 (13/16 8,7.74%)。关键词：手足口病 柯萨奇病毒A组16型 VP1区 基因特征分析 2019年云南省昆明市柯萨奇 病毒 A 组 16 型 毒株的分离鉴定及其VP1基因遗传特征分析 2024年 柯萨奇 病毒 A 组 16 型 (Coxsackievirus A 16 ,CVA 16 )毒株的全VP1基因遗传特征进行分析。方法使用人胚肺二倍体KMB-17细胞和非洲绿猴肾Vero细胞分离病毒 ,设计针对CVA 16 全VP1基因序列引物,采用RT-PCR扩增目的基因片段并测序;利用MEGA 7.0和Geneious 9.0.2等软件对全VP1序列进行分析。结果共分离获得26株CVA 16 毒株,其中有8株KMB-17分离株和18株Vero分离株。随机选取20株CVA 16 分离株进行分析,发现3株B1a和17株B1b基因亚型 ;其中17株CVA 16 B1b分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别为93.8%~100%和98.3%~100%,与国内其他分离株的核苷酸和氨基酸同源性为91.1%~99.2%和97.3%~99.0%;3株B1a分离株的核苷酸和氨基酸同源性为98.0%~98.1%和99.3%,与国内其他B1a分离株的核苷酸和氨基酸同源性为88.7%~98.7%和98.3%~99.7%;17株B1b分离株与其他3株B1a的核苷酸和氨基酸同源性为87.4%~88.4%和97.3%~98.7%。结论2019年昆明地区流行的CVA 16 属于B1a和B1b基因亚型 ,以B1b为主,且均为中国内地流行株。关键词：柯萨奇病毒A组16型 进化分析 2021—2023年安徽省手足口病柯萨奇 病毒 A 组 16 型 分子分型 研究 2024年 柯萨奇 病毒 A 组 16 型 (coxsackievirus A 16 ,CV-A 16 )基因型 别分布情况和VP1基因进化特征。方法通过中国疾病预防控制信息系统对2021—2023年安徽省HFMD发病情况和病原学检测情况进行统计。收集HFMD患者咽拭子样本,分离得到CVA 16 毒株,对其VP1区进行PCR扩增和基因序列测定,使用肠道病毒 在线分型 工具鉴定基因亚型 ,运用MegA lign比较核苷酸和氨基酸同源性,利用MEGA 6.0构建进化树,并分析VP1区氨基酸变异位点。结果2021—2023年安徽省累计报告HFMD病例155640例,年均报告发病率为84.83/10万。2021—2023年安徽省16 个地市共报告HFMD实验室确诊病例12643例,其中CV-A 16 占18.16 %(2296/12643),各年度构成比分别为25.81%(1127/4366)、33.69%(782/2321)和6.50%(387/5956)。2021—2023年安徽省共分离到HFMD CV-A 16 毒株72株,其中B1a和B1b基因亚型 分别为58株(占80.56%)、14株(占19.44%)。两种亚型 毒株与CV-A 16 原型 株G-10的核苷酸和氨基酸同源性分别为73.80%~76.20%和90.60%~92.30%。进化树显示B1a基因亚型 流行株在遗传进化上分为4个分支簇,B1b基因亚型 流行株形成3个分支簇。72条VP1区基因序列与原型 株比较发现了26个氨基酸位点发生变异。结论2021—2023年安徽省HFMD CV-A 16 主要流行的基因亚型 为B1a和B1b,B1a为优势基因亚型 ,应加强对CV-A 16 流行毒株的分子监测。关键词：手足口病 柯萨奇病毒A组16型 VP1编码区 进化分析 具有抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用的柯萨奇 病毒 A 组 16 型 单克隆抗体及其应用 柯萨奇 病毒 A 组 16 型 单克隆抗体，其重链氨基酸序列如SEQ No.1所示，其轻链氨基酸序列如SEQ No.5所示。本发明还提供上述单克隆抗体在制备治疗柯萨奇 病毒 A 组 16 型 疾...柯萨奇 病毒 A 组 16 型 抗原ELISA 定量检测方法的建立与初步应用2023年 柯萨奇 病毒 A 组 16 型 (coxsackievirus A 16 ,CA 16 )抗原双抗体夹心ELISA 定量检测方法,用于CA 16 灭活疫苗的研发和生产。本文以纯化的CA 16 病毒 颗粒免疫新西兰兔,分离含有CA 16 -IgG的血清,经纯化得到纯度较好的CA 16 -IgG作为包被抗体;将辣根过氧化物酶标记到CA 16 -IgG上作为酶标抗体。用CA 16 抗原国家标准品对建立方法的特异性、稳定性、精密度、准确度及线性和最低检测下限进行验证。用建立的方法检测疫苗生产中各工艺段关键中间品(包括CA 16 收获液、超滤浓缩液、纯化液、原液)的抗原含量。结果显示建立了CA 16 抗原的ELISA 定量检测方法。该方法的线性范围为0.71~45.45 ng/mL,决定系数>0.99,最低检测下限为2.84 ng/mL;精密度良好,变异系数<15%;不同浓度的样本相对偏倚(RB)均≤±12%,准确度良好;将检测板密封后置于37℃5 d,决定系数>0.99且变异系数<15%,稳定性良好;与CA 16 以外的其他样品无交叉反应,特异性良好。随着CA 16 疫苗制备过程的不断推进,中间品的比活呈上升趋势。构建的CA 16 抗原ELISA 定量检测方法符合定量检测需要,可用于CA 16 疫苗研发及生产。关键词：柯萨奇病毒A组16型 酶联免疫吸附测定 手足口病 2018—2019年北京市柯萨奇 病毒 A 组 16 型 分子流行病学研究 被引量：6 2023年 柯萨奇 病毒 A 组 16 型 (coxasckievirus A 16 , CVA 16 )结构蛋白VP1序列进行变异分析,了解其与手足口病(hand-foot-mouth disease, HFMD)流行的关系。方法 对2018—2019年首都医科大学附属北京佑安医院HFMD患儿标本进行逆转录聚合酶链反应(reverse triscription polymerase chain reaction, RT-PCR),测序扩增产物,获得CVA 16 的VP1全长序列,结合GenBank中北京及国内外CVA 16 代表性毒株构建系统进化树,分析VP1的氨基酸置换熵值和氨基酸的年替换比例。结果 分子进化分析表明,2018—2019年首都医科大学附属北京佑安医院26株CVA 16 全部为B1基因型 。其中,有16 株B1b型 ,占61.54%;10株B1a型 ,占38.46%。北京B1a型 毒株明显分属早期和近期2个进化分支。B1a型 近期分支与国内近期流行B1a型 毒株、越南和泰国流行株的亲缘关系较近。通过分析VP1氨基酸置换熵值,发现2007—2019年北京CVA 16 B1b型 和B1a型 毒株的易突变位点不同,分别为VP1-23;VP1-16 4和VP1-251。2012年起B1b型 毒株VP1-23位点的蛋氨酸逐渐替代亮氨酸成为优势氨基酸;而近年北京B1a型 毒株呈VP1-16 4K251I模式,与近年国内其他地区B1a型 流行株及越南,泰国毒株一致。结论 2018—2019年北京市CVA 16 主要流行基因型 为B1b型 ,新出现的B1a型 毒株的易突变氨基酸模式与B1b型 及早期B1a流行株不同,近期B1a型 毒株可能由越南和泰国等国输入并在国内传播、流行。今后应加强对CVA 16 不同基因型 及不同进化分支的动态监测和精细分析,为疫苗设计等疾病防控策略的制定和调整提供科学依据。关键词：柯萨奇病毒A组16型 分子进化 手足口病 2016 —2020年安徽省手足口病相关柯萨奇 病毒 A 组 16 型 分子分型 研究 被引量：2 2023年 柯萨奇 病毒 A 组 16 型 (coxsackievirus A 16 ,CV-A 16 )基因型 别分布情况。方法通过中国疾病预防控制信息系统传染病报告管理信息系统收集安徽省2016 —2020年HFMD病例资料,并收集HFMD患儿咽拭子标本。对荧光定量PCR检出的CV-A 16 核酸阳性病例样本采用RT-PCR扩增VP1区基因片段并测序。运用肠道病毒 在线分型 工具确定基因型 别,再利用MEGA 6.0生物软件构建CV-A 16 VP1区基因进化树并分析VP1区氨基酸变异位点。结果2016 —2020年安徽省累计报告HFMD实验室确诊病例16 650例,其中CV-A 16 确诊病例3809例(占22.88%),各年中CV-A 16 确诊病例占比依次为20.72%(219/1057)、22.91%(677/2955)、23.89%(1004/4202)、42.58%(16 87/3962)、4.96%(222/4474)。对获取的436份CV-A 16 阳性标本进行测序,获得290条VP1区基因序列,均属于B基因型 ,其中B1a基因亚型 65条,B1b 225条。290条VP1区基因序列核苷酸同源性为86.80%~100.00%,与CV-A 16 原型 株G-10核苷酸同源性为74.10%~76.80%。65条B1a毒株VP1区基因序列与B1a参考株核苷酸同源性为93.00%~99.90%,225条B1b毒株VP1区基因序列与B1b参考株核苷酸同源性为88.40%~99.60%。B1a基因亚型 流行株在遗传进化上分为4个分支簇,B1b基因亚型 流行株在遗传进化上分为6个分支簇。与原型 株G-10 VP1区编码氨基酸位点变异分析显示,290条VP1区基因存在多个位点变异。结论2016 —2020年安徽省HFMD CV-A 16 流行株B1a与B1b基因亚型 二者共同流行,应持续关注安徽省肠道病毒 病原监测与分子进化变异情况。关键词：手足口病 柯萨奇病毒A组16型 分子分型
