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一种用于水牛角鉴定的条形码、引物、试剂盒及其方法: 本发明涉及一种用于水牛角鉴定的条形码、引物、试剂盒及其方法。本发明首先提供了一种DNA条形码，所述DNA条形码的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。进一步本发明提供了包含上述DNA条形码的DNA条形码组合物及其检测引...; 钱润周海琴海丰胡剑虹陈盛君李松张开雪曹杰楠程梦娟陈研

位点特异性PCR鉴别水牛角及其伪品: 2024年; 目的:开发一种针对水牛角的特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法,快速、准确地鉴别水牛角与其他混伪品。方法:通过比对水牛、黄牛、牦牛、山羊等动物的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列差异,筛选水牛的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,设计出相应的鉴别引物,并对影响PCR体系的相关条件进行优化,考察验证方法的耐受性和适用性。结果:PCR条件为扩增体系20μL、退火温度60℃、循环次数32次、DNA模板量为100 ng、10μmol·L^(-1)正反引物对各0.8μL时,使用设计的鉴别引物SN1对水牛角进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳后出现约358 bp的特异性条带,其他物种的样品均无条带出现。结论:该PCR鉴别方法特异性好,能迅速、准确地鉴别水牛角和其他常见动物角类样品,为水牛角的真伪鉴别提供参考。; 张竞研谭冰艳康安王协和李松陈盛君刘睿段金廒; 关键词：水牛角聚合酶链式反应

水牛角含巯基类成分解热效应评价研究: 2024年; 目的制备水牛角含巯基类成分(-SH active fractions,SHF),评价其解热效应。方法通过十二烷基硫酸钠-二硫苏糖醇(SDS-DTT)联合提取法制备水牛角SHF,并采用Ellman法测定游离巯基(-SH)浓度;基于nano LC-MS/MS分析表征水牛角SHF物质组成。采用脂多糖(LPS)建立大鼠发热模型评价水牛角SHF解热活性,采用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒测定血浆中前列腺素E 2(PGE 2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,测定下丘脑环磷酸腺苷(cAMP)、PGE 2、TNF-α的水平;采用非靶向代谢组学的方法,探究水牛角SHF对发热大鼠血浆代谢物干预情况。结果SDS-DTT联合提取法可有效制备水牛角SHF,其中主要成分为含丰富半胱氨酸残基(Cysteine,Cys)的Ⅰ型、Ⅱ型角蛋白、角蛋白相关蛋白等,SHF的-SH占蛋白质比例较水牛角水提液提高了约20倍。发热大鼠给予水牛角SHF 0.5 h后大鼠体温显著下降(P<0.01),且解热效应持续4.5 h;同时显著降低血浆及下丘脑PGE 2、IL-1β、TNF-α、cAMP等水平。从空白组与模型组血浆样本中共鉴定出137个潜在差异代谢物,水牛角SHF可回调其中31个代谢物,包括溶血磷脂酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸、甘油三酯、磷脂酰胆碱等,主要涉及甘油磷脂代谢通路。结论水牛角SHF解热效应确切,给药剂量为水提液的1/10即可显示与其相当的解热效应,为水牛角清热功效物质基础研究提供了方向和依据。; 黄思莹冯旗园包旺林黄潇正武文星赵明段金廒刘睿; 关键词：水牛角解热抗炎

基于DNA指纹图谱的水牛角真伪及掺杂鉴别方法研究: 2024年; 是否存在掺杂是中药鉴定的难点问题。水牛角主要以水牛角丝或水牛角粉2种形态流通于药材市场,缺乏明显的鉴定特征,存在掺杂风险。然而目前水牛角的掺杂鉴定方法缺失。为解决中药水牛角的真伪及掺杂问题,控制药材水牛角的质量,保证临床用药的真实性。使用DNA指纹图谱对来自药材企业和药材市场的43批样品进行鉴定,筛选出可鉴定水牛角和牦牛角的荧光DNA指纹图谱扩增引物,利用荧光毛细管分型技术获得水牛角的DNA指纹图谱。并检测了荧光毛细管分型技术对不同掺杂比例的鉴别效果。筛选出了2对可区分水牛角和牦牛角的荧光STR分型引物16Sa和CRc,建立DNA指纹图谱鉴别方法,牦牛角16Sa迁移峰为223.4~223.9 bp、水牛角为225.5~226.1 bp,牦牛角CRc迁移峰为518.8~524.8 bp、水牛角为535.9~542.5 bp。通过迁移峰的峰高可对掺伪比例在50%以下的掺杂品进行初步定量,定量结果与掺入比例相似。该研究建立了一种简单快捷,可用于中药水牛角及其掺杂品的通用DNA指纹图谱鉴别方法,能够实现对药材水牛角鉴定的同时对掺杂品进行半定量。; 熊辕陈天韵张恬田娜蒋超; 关键词：水牛角掺杂 DNA指纹图谱 STR分型分子鉴别动物药

一种适用于水牛角真伪鉴别的位点特异性PCR鉴别方法: 本发明公开了一种适用于水牛角真伪鉴别的位点特异性PCR鉴别方法，该方法采用引物SN1，正向：CATAATTGGGGGATTTGGC和反向：GGCGGTGATTATTACGGAT对水牛角DNA进行扩增，得到鉴别水牛角的特异...; 康安陈盛君刘睿李松段金廒

一种水牛角药材、标准汤剂及其配方颗粒HPLC特征图谱构建方法: 本发明提供了一种水牛角药材、标准汤剂及其配方颗粒HPLC特征图谱构建方法，包括：A)将水牛角原料采用溶剂提取，得到待测液；B)将待测液进行柱前衍生化反应后，采用高效液相色谱法测定，得到水牛角原料的HPLC特征图谱；所述高...; 周厚成欧益静周靖惟喻荣平沈东杨露阿杜罗林陈蓉陈岚

一种鉴定水牛角的方法: 本发明公开了一种鉴定水牛角的方法。本发明发现了水牛、黄牛及牦牛线粒体基因位点的差异，水牛线粒体基因中，所述线粒体基因的登录号为MT237632.1，其第5380位核苷酸为G、其第5378位核苷酸为T、其第5377位核苷酸...; 周海琴钱润陈盛君李松张开雪浦香兰曹杰楠程梦娟海丰胡剑虹

水牛角对血热出血模型大鼠的止血作用及机制被引量：3: 2023年; 目的:探讨水牛角对血热出血模型大鼠的止血作用及机制。方法:将60只SD大鼠随机分为正常对照组、出血模型组、云南白药组、水牛角高剂量组、水牛角中剂量组、水牛角低剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠均采用干姜水煎液结合5%乙醇给药复制血热出血模型。造模6 h后,云南白药组大鼠予云南白药溶液(0.5 g/kg)灌胃,水牛角高、中、低剂量组大鼠分别灌胃高(36 g/kg)、中(18 g/kg)、低(9 g/kg)剂量水牛角水煎液,正常对照组、出血模型组大鼠灌胃等体积生理盐水。1次/d,连续14 d。末次给药1 h后检测各组大鼠体质量、饮水量、摄食量、尿量、粪便含水量、体质量增长率、肛温;腹主动脉取血检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白降解产物(FDP)、抗凝血酶(AT);HE染色观察肺、胃组织病理学变化。结果:出血模型组大鼠肛温高于正常对照组(P<0.01),体质量增长率、摄食量、饮水量、尿量、粪便量及粪便含水量均低于正常对照组(P<0.01);云南白药组大鼠肛温低于出血模型组(P<0.05),体质量增长率高于出血模型组(P<0.01);水牛角高、中剂量组大鼠肛温低于出血模型组(P<0.01或P<0.05),体质量增长率、摄食量、饮水量、尿量、粪便量及粪便含水量均高于出血模型组(P<0.01或P<0.05)。出血模型组大鼠PT、APTT均低于正常对照组,FIB、TT均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05);云南白药组大鼠TT、FIB均低于出血模型组(P<0.05);水牛角高、中剂量组大鼠PT、APTT均高于出血模型组,FIB、TT均低于出血模型组,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。出血模型组大鼠AT、FDP高于正常对照组(P<0.01);云南白药组大鼠FDP低于出血模型组(P<0.01);水牛角高、中剂量组大鼠AT、FDP均低于出血模型组(P<0.01)。正常对照组大鼠肺、胃组织�; 李海霞周民周有君常依王雅露; 关键词：水牛角凝血功能

水牛角中含巯基肽类成分的富集及抗氧化、抗炎活性研究被引量：6: 2023年; 目的富集水牛角Bubali Cornu中含巯基肽类成分(thiols-rich peptide fractions,SHPF)并探讨其抗氧化、抗炎活性。方法通过巯基亲和树脂Thiopropyl Sepharose 6B从水牛角提取液中富集得到SHPF,并采用Ellman法测定游离巯基(-SH)含量;应用单因素实验法优选富集工艺;基于Nano LC-MS/MS技术鉴定SHPF。体外通过H_(2)O_(2)诱导小鼠脑微血管内皮细胞bEnd3氧化损伤,采用细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测SHPF抗氧化活性;通过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症损伤,采用实时荧光定量PCR法测定炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌。结果优化SHPF富集工艺为上样量10μmol游离-SH、吸附时间1 h、洗脱剂为含β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol,β-Me)洗脱剂。从水牛角富集液中共鉴定到704条肽段,其中154条含半胱氨酸(cysteine,Cys)肽段,占总肽段的21.9%,主要来源于角蛋白和角蛋白相关蛋白。体外细胞实验结果表明,SHPF能够提高氧化损伤bEnd3细胞的存活率,同时降低其LDH的泄露,并减少炎症损伤RAW264.7细胞炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌。结论采用优选富集工艺能明显提高SHPF的富集效率,SHPF具有良好抗氧化和抗炎活性,为水牛角“清热解毒”功效物质基础的研究提供了研究思路和方向。; 汤佳瑶黄思莹武文星朱悦郭盛赵明段金廒刘睿; 关键词：水牛角抗氧化抗炎实时荧光定量PCR法

一种鉴定或辅助鉴定水牛角药材的引物对及DNA条形码、方法和应用: 本发明公开了一种鉴定或辅助鉴定水牛角药材的引物对及DNA条形码、方法和应用，所述DNA条形码的核苷酸序列选自SEQ ID NO1 Bubalus Bubalis。本发明设计的3种牛角通用引物对可有效区分水牛角、牦牛角和黄...; 钱润周海琴胡剑虹海丰李松陈盛君邵琪张开雪钱茂祥曹杰楠

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