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烟草脆裂病毒介导的茶树VIGS体系的构建被引量：1: 2024年; 以茶树(Camellia sinensis)八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase)基因CsPDS和咖啡碱合成酶1(caffeine synthase 1)基因TCS1为指示基因,本氏烟草(Nicotiana benthamiana)为载体增殖积累烟草脆裂病毒,探究侵染液浓度、培养温度、不同载体和培养时间对增殖病毒的影响。并探究不同接种方式和不同茶树品种对构建VIGS(Virus-Induced Gene Silencing)体系的影响。结果显示,用乙酰丁香酮(Acetosyringone,AS)浓度为200μmol·L^(-1)、菌液浓度OD_(600)=1.0的侵染液接种烟草后,23℃培养有利于病毒在烟草中增殖。使用‘舒茶早’的叶片通过注射接种构建茶树的VIGS体系并成功利用该体系进行以GFP为指示基因探究外源基因表达的可能性。; 胡锦瑜刘桂芝陈兰黄梦迪苏芹谭月萍刘硕谦田娜; 关键词：茶树烟草脆裂病毒绿色荧光蛋白基因

烟草脆裂病毒介导的人参基因沉默体系的构建: 2024年; 目的人参Panax ginseng中构建烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默体系,为人参中基因功能的验证提供新方法。方法通过序列比对得到人参中八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,PDS)基因的完整序列,利用保守结构域预测工具得到核心片段,将其整合进pTRV2载体内。重组载体转化农杆菌后侵染人参叶片,观察表型并利用q PCR检测沉默效率。结果通过序列比对得到了2条PDS基因。PgPDS1基因c DNA序列全长1746 bp,编码581个氨基酸;PgPDS2基因c DNA序列全长1299bp,编码432个氨基酸。2个PgPDS蛋白均具有典型的PDS结构域。将重组载体通过农杆菌转化人参叶片,接种3周后叶片表型无变化,5周后叶片尖端以及边缘出现枯萎现象。经q PCR检测,接种后3周和5周人参内源PgPDS基因表达量分别下降至接种前的70.37%和37.35%,表明体系构建成功。结论人参中成功构建了TRV介导的基因沉默体系。; 李冉琪李雅淑汤淼淼曲正义郑培和侯微; 关键词：人参八氢番茄红素脱氢酶烟草脆裂病毒农杆菌

基于烟草脆裂病毒的多基因递送平台构建及其在植物基因组DNA修饰中的应用: 基于植物病毒构建的表达载体系统目前已被广泛应用到植物基因组功能研究、药用蛋白的表达等领域。目前,越来越多的基础及应用研究需在同一细胞内同时表达多个外源基因,大多数来源于植物病毒的递送载体难以实现。烟草脆裂病毒（tobac...; 郭歌; 关键词：烟草脆裂病毒多基因荷载能力

利用烟草脆裂病毒同时表达两种外源蛋白的载体构建法: 本发明公开了一种同时非融合表达两个外源蛋白载体pTRV2e<Sup>3</Sup>的构建方法：以TRV基因组RNA2的农杆菌侵染性克隆pYL156为材料，采用病毒基因缺失策略构建包含TRV的2b和2c基因启动子载体pTR...; 廖乾生郭歌常发光赖家良杜志游

基于烟草脆裂病毒构建同时表达2种外源蛋白的载体及其应用: 2022年; 目的构建在整个寄主植物中能同时表达两个非融合蛋白的病毒载体。方法以烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)基因组RNA2的农杆菌侵染性克隆pYL156为材料,缺失TRV RNA2的2b基因5’端279 bp并将其起始密码子ATG改变为AGG、同时引入豌豆早枯病毒(pea early-browning virus,PEBV)外壳蛋白(coat protein,cp)基因启动子,获得pTRV2e2载体;在pTRV2e2载体的2b和PEBV的cp启动子下游插入不同的外源基因,测定病毒TRVe2表达外源蛋白的能力、携带外源基因后重组病毒的稳定性以及分析蛋白质的生物学功能。结果病毒TRVe2能快速同时表达2个非融合的外源蛋白,且至少能表达70 ku外源蛋白,且该病毒携带~2.0 kb外源基因能稳定存活于寄主植物中;病毒TRVe2可用于分析蛋白质的生物学功能以及2个蛋白质间的相互作用。结论本文构建的重组病毒TRVe2为快速有效地表达2个外源蛋白以及分析2个蛋白质间的相互作用提供技术工具。; 郭歌常发光赖家良张先文杜志游廖乾生; 关键词：烟草脆裂病毒双元表达载体

一种烟草脆裂病毒粒体原位分离固定电子显微镜诊断方法: 本发明提供了一种烟草脆裂病毒粒体原位分离固定电子显微镜诊断方法，包括取样、切丝固定、负染色、电镜观察等步骤。整个过程仅用时十几分钟，具有快速、准确、高效等特点。; 张仲凯方琦张丽珍; 文献传递

逆转录环介导等温扩增技术检测烟草脆裂病毒被引量：3: 2021年; 为实现进境种球中烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)的快速检测,本研究应用逆转录环介导等温扩增技术,建立了TRV-RT-LAMP检测方法,在60℃,60 min条件下,能特异性地检测到TRV,灵敏度可达到10 pg/μL,是普通RT-PCR的100倍。用SYBR Green I染色后可以使检测结果可视化,方便快速。同时结合RNA粗提,建立了一步法RT-LAMP技术,可以快速检测植株中的TRV。; 陆辰晨祝秀丽杨小凤邵沛泽谌运清杨万风汪连军; 关键词：烟草脆裂病毒

基于烟草脆裂病毒沉默体系提高石竹转化率的方法: 本发明属于园艺花卉植物基因工程技术领域，具体涉及基于烟草脆裂病毒沉默体系提高石竹转化率的方法。本发明的沉默体系含有SEQ ID NO：1所示的PDS基因序列，根据石竹PDS基因片段设计特异引物，通过PCR在石竹中扩增出3...; 傅小鹏林胜男包满珠张晓妮; 文献传递

第十届中国花博会中烟草脆裂病毒生物学特性及检测监控技术应用被引量：2: 2021年; 第十届中国花博会于2021年5月21日7月2日在上海崇明岛举办。其中从国内外大规模输入新品种植物种球、种苗、种子、种植介质及木质包装品。这些植物及其相关产品很可能会携带大量外来生物,使得崇明岛的生态安全遭受重大威胁。病毒是迄今为止人们在超微世界里所认知的最小生物之一,其随植物传播扩散更为隐秘,这严峻考验着防控能力。其中烟草脆裂病毒是一种能侵染多种花卉植物的植物病毒,通过寄主植物繁殖材料(种球、砧木、芽条等)的贸易活动进行远距离病毒传播,或借助带毒介体线虫进行短距离扩散,为阿根廷、巴西、加拿大、墨西哥、土耳其等国家的检疫性有害生物,在我国局部地区有发生。本次花博会大面积布置的百合、芍药、玉簪等都是其主要寄主,一旦传入可引起严重生态影响和经济损失。研究从烟草脆裂病毒的寄主范围、危害症状、传播扩散途径等生物学特性及经济影响、检测监控技术应用等方面进行阐述,为防止其再次入侵和进一步传播扩散提供参考,为花博会生态安全提供技术保障。; 田沂民朱雅君印丽萍陈仲兵滕凯于翠; 关键词：烟草脆裂病毒生物学特性

利用烟草脆裂病毒同时表达两种外源蛋白的载体构建法: 本发明公开了一种同时非融合表达两个外源蛋白载体pTRV2e<Sup>3</Sup>的构建方法：以TRV基因组RNA2的农杆菌侵染性克隆pYL156为材料，采用病毒基因缺失策略构建包含TRV的2b和2c基因启动子载体pTR...; 廖乾生郭歌常发光赖家良杜志游; 文献传递

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