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H_(2)O_(2)诱导的犊牛睾丸支持细胞氧化应激模型的建立及其效果: 2025年; 雄性家畜睾丸中的氧化应激会导致其繁殖能力下降。为了建立睾丸支持细胞的氧化应激模型,为研究睾丸的氧化应激机制奠定基础,试验使用50,100,300μmol/L过氧化氢(H_(2)O_(2))处理犊牛睾丸支持细胞,建立睾丸支持细胞氧化应激模型,以未处理细胞作对照,通过检测细胞活力和丙二醛(MDA)含量筛选最佳H_(2)O_(2)处理浓度,然后检测最佳H_(2)O_(2)处理浓度下细胞的活性氧(ROS)含量及谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并利用实时定量PCR分析核因子相关因子2(Nrf2)、Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、血红素加氧酶-1(HO-1)、NADPH醌脱氢酶1(NQO1)基因表达水平。结果表明:与对照相比,用300μmol/L H_(2)O_(2)处理的细胞活力显著降低(P<0.05),且显著低于50,100μmol/L H_(2)O_(2)处理的细胞(P<0.05);MDA含量显著增加(P<0.05),且显著高于50,100μmol/L H_(2)O_(2)处理的细胞,说明300μmol/L H_(2)O_(2)处理浓度为最佳浓度。与对照相比,300μmol/L H_(2)O_(2)处理的细胞中ROS含量显著增加(P<0.05),GSH、SOD活性显著降低(P<0.05),Nrf2、Keap1、HO-1和NQO1基因的mRNA表达量显著降低(P<0.05)。说明300μmol/LH_(2)O_(2)能够诱导犊牛睾丸支持细胞的氧化应激模型。; 唐颖王子铭王皓陈艳茹РОТАРЬЛюбовьНиколаевна郑鹏; 关键词：犊牛支持细胞氧化应激

褪黑素对LPS诱导的犊牛睾丸支持细胞氧化应激和凋亡的影响被引量：2: 2022年; 为了探究犊牛睾丸支持细胞(SCs)在血睾屏障形成过程中受到细菌感染的影响以及褪黑素的缓解作用。本试验使用CCK-8试剂盒测定SCs活力,活性氧(ROS)试剂盒、谷胱甘肽(GSH)试剂盒和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒分别测量ROS、GSH的表达和SOD活性,Western blot和RT-PCR分析Nfr2、HO-1、p53、Caspase3和Connexin43表达量。结果表明,5 mg/L LPS可以激活Nfr2/HO-1信号通路和p53信号转导,从而显著上调ROS和Caspase3的表达量,显著下调SOD和GSH的活性和表达,造成SCs氧化应激和细胞凋亡,进而下调Connexin43蛋白的表达,降低细胞活力。加入50μmol/L褪黑素后,可以显著抑制激活Nfr2/HO-1信号通路和p53信号转导,从而显著下调ROS和Caspase3的表达量,显著上调SOD和GSH的活性和表达,缓解LPS造成SCs氧化应激和细胞凋亡,进而恢复Connexin43蛋白的表达和细胞活力。结果说明,褪黑素可以缓解LPS诱导SCs的氧化应激和细胞凋亡,对Connexin43蛋白表达有保护作用。; 冯瑞王子铭黄富硕李玉龙张贵学; 关键词：睾丸支持细胞血睾屏障褪黑素氧化应激

犊牛睾丸支持细胞稳定转染pEGFP-N3的研究: 2021年; 为获得稳定表达绿色荧光蛋白(pEGFP-N3)的支持细胞,试验分离纯化了犊牛睾丸支持细胞,然后利用Lipofectamine 2000进行转染和G418筛选。结果表明:利用胶原酶和胰酶消化,结合差速贴壁培养法,能获得较纯的支持细胞,细胞表达波形蛋白,纯度达到95%以上。G418筛选两周后,可得到稳定整合pEGFP-N3的支持细胞克隆。; 秦雪李琦冯瑞赵骞郑鹏; 关键词：支持细胞转染

犊牛睾丸支持细胞分离培养与纯度鉴定被引量：4: 2020年; 为了优化现有的犊牛(新生7 d内)睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)分离纯化方法,并建立一种简单、快捷地获得高纯度SCs的原代培养方法,试验采用两步酶(1.0 mg/m L胶原酶Ⅳ、2.5 mg/m L胰蛋白酶)消化法和差速贴壁法分离纯化SCs。在显微镜下观察经HE染色后SCs的形态学特征及生长增殖情况。再经RT-PCR方法检测SCs标志基因的表达,以及采用免疫荧光方法检测SCs标志蛋白(WT1和Vimentin)的表达,并对SCs进行纯度鉴定。结果表明:通过优化分离培养的犊牛睾丸SCs纯度较高,能完全除去间质细胞和大部分类肌细胞。说明该优化方法可有效地分离犊牛睾丸SCs并可在体外长时间培养。; 王雪王子铭李晓宇冯瑞张贵学; 关键词：犊牛支持细胞原代培养纯度

犊牛睾丸生殖干细胞与支持细胞体外共培养体系的建立被引量：2: 2015年; 旨在建立牛雄性生殖干细胞(mGSCs)-支持细胞(SCs)体外共培养体系,并比较不同密度SCs共培养mGSCs的效果。分离、培养mGSCs和SCs并鉴定,然后在密度不同的SCs上共培养mGSCs,观察细胞形态、统计mGSCs集落数、测定两种细胞特异基因的相对表达量。结果表明,培养的mGSCs具有与小鼠mGSCs相同的形态特征,AKP染色细胞克隆阳性,各培养体系均表达SCs和mGSCs特异基因SCF、OCT-4;低密度SCs(225个/cm2)培养mGSCs比中密度(1 300个/cm2)和高密度(5 600个/cm2)培养mGSCs效果好:mGSCs集落纯度、体积较大;mGSCs集落比例显著(P<0.05)和极显著增高(P<0.01);mGSCs特异基因表达量均极显著增高(P<0.01)。说明建立睾丸干细胞体外共培养体系时,采用较低密度的支持细胞共培养可获得理想的睾丸生殖干细胞。; 张倩齐晓楠杨文浩丛霞李华涛曹荣峰田文儒; 关键词：睾丸支持细胞共培养集落

牦牛犊牛睾丸结构特征及细胞外基质相关蛋白的分布被引量：6: 2015年; 目的观察9头健康牦牛犊牛睾丸结构特征及细胞外基质相关蛋白的分布特点。方法采用组织化学染色和透射电镜技术,观察睾丸显微及超微结构特点,免疫组织化学SP法及IPP图像分析技术,研究层黏连蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）和硫酸乙酰肝素糖蛋白（HSPG）的分布特征。结果睾丸生精上皮由Sertoli细胞和生殖母细胞构成1～2层,未形成空腔。电镜下,Sertoli细胞异染色质丰富,相邻Sertoli细胞胞膜下分布有典型外质特化与肌动蛋白丝形成的胞膜下纤维束;生殖母细胞较大,胞质丰富。免疫组织化学显示,LN、ColⅣ和HSPG在生精小管基膜和肌样细胞表达较弱,LN在生殖母细胞内的表达量显著低于ColⅣ和HSPG（P〈0.05）,而在Sertoli细胞及Leydig细胞均无表达;ColⅣ和HSPG在Sertoli细胞均为强阳性表达;HSPG在Leydig细胞的表达量显著高于ColⅣ（P〈0.05）。结论牦牛犊牛生精上皮以幼稚型Sertoli细胞为主,Leydig细胞处于胚胎型向成熟型过渡时期;细胞外基质（ECM）相关Ⅰ及Ⅳ型Col、LN及HSPG的分布适应于其在高原低氧环境中的发育。; 袁莉刚曲亚玲朱俊峰谷来凤田旦增; 关键词：睾丸层黏连蛋白牦牛犊牛

不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34^(cdc2)表达的差异被引量：1: 2015年; 旨在探究不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34cdc2的表达情况。本试验选取发育正常、体重相似的5~6d荷斯坦哺乳公犊18头,随机分为3组,每组6头,饲喂相同的基础日粮,分别在30(断奶)、60和90d时从各组分别随机抽取2头,采集其睾丸备用;通过qRT-PCR技术检测不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34cdc2 mRNA表达规律,免疫组化技术对睾丸CyclinB1和p34cdc2进行定位分析。结果表明:90d时CyclinB1和p34cdc2 mRNA表达量显著高于30与60d(P<0.05),但30与60d两种基因mRNA表达量均差异不显著(P>0.05);p34cdc2蛋白在不同日龄犊牛表达差异显著(P<0.05);CyclinB1蛋白在60、90d的表达量显著高于30d(P<0.05),但60和90d差异不显著(P>0.05)。综上表明,CyclinB1和p34cdc2 mRNA和蛋白在睾丸的表达量随着犊牛日龄的增加而增加,且不同的日龄CyclinB1和p34cdc2 mRNA和蛋白表达量存在一定的差异。; 姚晓磊宋瑞高吕丽华李鹏飞刘强黄洋陈建伟姜晓龙曹霞赵妙妙张贵花王永新石磊; 关键词：细胞周期调控 CYCLINB1

不同冷冻保护剂对犊牛睾丸组织冷冻效果的研究: 2014年; 通过探讨不同冷冻保护剂对犊牛睾丸组织冷冻保存的效果以及睾丸组织低损伤冷冻保存的机理,为保护珍稀濒危物种、恢复人类未成年男性生育能力等提供依据。研究将二甲基亚砜(DMSO)、甘油、丙二醇、蔗糖和葡萄籽原花青素(GSP)五种冷冻保护剂设置八个浓度梯度,用以进行犊牛睾丸组织的冷冻保存,7d后解冻,解冻后检测睾丸组织内的一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)和细胞活率。结果表明,经10%DMSO、丙二醇、蔗糖和GSP冷冻犊牛睾丸组织7d解冻后,组织细胞活率分别达到77%、62%、34%和24%,DMSO组优于其他组(P<0.05);NO水平分别为0.52、0.51、0.64和0.49μmol/mgprot,NOS活性分别为1.03、0.98、1.04和0.96U/mgprot,GSP组优于其他组(P<0.05)。7.5%甘油冷冻犊牛睾丸7d解冻后,细胞活率、NO和NOS分别为41%、0.54μmol/mgprot和1.07U/mgprot,优于组内其他浓度(P<0.05)。表明10%DMSO能有效地冷冻保存犊牛睾丸组织。; 王春伟洪洁赟张卫艺吕妍郭秋平赵军胡建宏; 关键词：冷冻保护剂一氧化氮一氧化氮合酶

不同冷冻保护剂对犊牛睾丸组织冷冻保存效果的研究: 睾丸组织的冷冻保存为雄性生殖细胞的保存、珍稀濒危物种的保护以及人类辅助生殖技术等提供了新的途径。冷冻睾丸组织能够避免酶解造成细胞存活率降低，机械分离破坏细胞间连接造成细胞缺氧加重等影响。但与常见的细胞冷冻保存相比较，冷冻...; 王春伟; 关键词：冷冻保存冷冻保护剂

冷冻保护剂对犊牛睾丸组织标志性酶活性的保护作用被引量：2: 2014年; 为了探讨犊牛睾丸组织适宜的冷冻保存体系,设计以甘油、DMSO、乙二醇、海藻糖、BSA和睾丸液作为主要成分的6种冷冻保护液,以碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)和β-D葡萄糖苷酶(β-D-Glucosidase)的酶活性作为测定指标,以新鲜犊牛睾丸组织的4种酶活性为空白对照,使用6种冷冻保护液将睾丸组织于液氮中冷冻保存7d,然后37℃水浴解冻并无菌培养24h,再制备成φ=10%的睾丸组织匀浆液并测定4种酶活性,最后分析6种冷冻保护液对犊牛睾丸组织标志性酶活性的冷冻保护效果。结果表明,含ρ=0.015g/mL牛血清白蛋白(BSA)的冷冻保护液冷冻7d后,睾丸组织AKP、ACP、LDH和β-D葡萄糖苷酶的活性分别为599.99、129.11、1 891.53和489.98U/g,均显著优于其他组(P<0.05);含ρ=0.04g/mL海藻糖的冷冻保护液冷冻7d后,AKP、ACP、LDH和β-D葡萄糖苷酶活性分别为454.88、114.63、1 862.79和457.8U/g,其保护效果次于0.015g/mL BSA组,但均显著优于其他组(P<0.05);经DMSO、乙二醇和睾丸液冷冻7d后,4种标志性酶的活性均低于0.015g/mL BSA组和0.04g/mL海藻糖组,甘油组冷冻保护液的效果最差。因此,含ρ=0.015g/mL BSA和ρ=0.04g/mL海藻糖的冷冻保护液能够较好地保护犊牛睾丸组织的酶活性,是犊牛睾丸组织适宜的冷冻保护剂。; 洪洁赟王春伟尚华扶晓波吕妍赵军胡建宏; 关键词：冷冻保存冷冻保护剂酶活性

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