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一种大鼠原代生精细胞体外分离的方法: 本发明公开了一种大鼠原代生精细胞体外分离的方法，采用的方案包括：1)取新鲜离体大鼠双侧睾丸，剥除被膜及血管，获得睾丸组织；2)将睾丸组织消化处理制备单细胞悬液；3)将单细胞悬液培养直至非生精细胞贴壁后，吸出未贴壁的悬浮细...; 周党侠葛攀张健杨妍琪吕茉琦

DJ-1/Nrf2在精索静脉曲张相关性弱精症生精细胞氧化应激中的表达及意义: 2024年; 目的:考察蛋白DJ-1(DJ-1)/稳定核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)在精索静脉曲张相关性弱精症患者生精细胞氧化应激中的表达及意义。方法:收集本院2021年12月-2023年12月收治的120例确诊为精索静脉曲张相关性弱精症的男性患者临床资料,60例为新诊断患者纳入新诊断病例组,60例为接受维生素C联合维生素E治疗3个月的患者纳入病例治疗组;同期婚前健康检查健康男性40例为对照组。检测3组精液生精细胞形态、精液生精细胞的DJ-1、Nrf2蛋白及mRNA,外周血氧化应激[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)]、DJ-1、Nrf2。结果:3组年龄、体质指数、精液体积及精子尾部畸形率均无差异(P>0.05);对照组、病例治疗组、新诊断病例组精子正常形态依次降低,精子头畸形率、体畸形率、头体环合畸形率依次增高,生精细胞DJ-1(0.35±0.11、0.71±0.16、0.89±0.12)、Nrf2蛋白(0.31±0.09、0.62±0.14、0.78±0.13)及mRNA均依次增高,血清MDA、DJ-1、Nrf2依次增高,SOD、GSH-Px依次降低(均P<0.05)。结论:激活DJ-1/Nrf2通路有助于增强精索静脉曲张相关性弱精症生精细胞的抗氧化能力,保护细胞免受由氧化应激引起的损伤,DJ-1/Nrf2通路或是精索静脉曲张相关性弱精症的治疗的潜在分子靶点。; 吴元才蔡佳豆唐永泽罗顺文李晓伟; 关键词：弱精症精索静脉曲张生精细胞氧化应激

野外采集牦牛睾丸组织的冷冻保存及其生精细胞的复苏培养研究: 2024年; 采用玻璃化冷冻方法对野外采集的牦牛睾丸组织进行冷冻,通过HE(hematoxylin-eosin)染色分析发现玻璃化冷冻后的牦牛睾丸组织曲细精管结构保存较完好,曲细精管可见大量形态完好的各类生精细胞。采用台盼蓝染色检测细胞活率,发现冷冻复苏后细胞活率可达80.20%。分别通过生精细胞和精原干细胞标志蛋白DDX4和GFRA1免疫荧光染色发现复苏后培养14 d后的生精细胞和精原干细胞的数量明显减少。通过RT-qPCR对复苏后不同实验处理组牦牛睾丸细胞标志基因的表达分析,发现培养30 d的生精细胞中的精原干细胞标志基因%Thy1和UCHL1%的表达量显著增高。因此,玻璃化冷冻保存的牦牛睾丸组织中曲细精管及其生精细胞得到了较好的保护,该方法对于其他哺乳动物生精细胞的长久有效保存具有重要的参考价值。; 舒适易川平付长其罗辉王国文黄荣赵旺生蔡欣彭巍; 关键词：牦牛睾丸组织玻璃化冷冻

非梗阻性无精子症患者精液生精细胞脱落状态与生殖激素水平分析被引量：1: 2023年; 目的:探讨非梗阻性无精子症(Nonobstructive azoospermia,NOA)患者精液中生精细胞脱落状态与血清促黄体生成素(Luteinizing hormone,LH)、卵泡刺激素、(Follicle-stimulating hormone,FSH)、睾酮(Testosterone,T)及抑制素B(Human inhibinB,INHB)水平的相关性。方法:对既往诊断为NOA的320例患者进行精液细胞学分析,根据精子及生精细胞的检出将其分为隐匿精子症组(A组)、NOA生精细胞存在组(B组)和NOA生精细胞缺乏组(C组);根据精子细胞检出的有无,将B组分为精子细胞存在组(D组)和精子细胞缺乏组(E组)。并对A、B、C三组和D、E两组间的生殖激素(LH、FSH、T、INHB)的水平进行相关性分析。结果:B和C两组LH、FSH水平明显增高,INHB水平明显降低,与A组比较均具有统计学差异(P<0.05);与B组比较,C组FSH水平明显增高,INHB水平降低,比较均具有统计学差异(P<0.05),而LH水平比较无差异;E组LH、FSH水平明显高于D组,INHB水平低于D组,比较均具有统计学差异(P<0.05);而T水平各组间比较均无统计学差异(P>0.05);B组次级精母细胞及精子细胞的检出率明显低于A组,而C组支持细胞检出率要明显高于A、B两组,比较均具有统计学差异(P<0.01)。结论:NOA患者血清LH、FSH及INHB水平与精液中精子、精子细胞及生精细胞检出的有无密切相关,与T水平不相关;NOA患者精液中若检出精子细胞则提示睾丸内可能存在微量生精灶,而支持细胞的检出为睾丸生精功能受损程度的评估提供了新的依据。; 袁长巍曹兴午; 关键词：非梗阻性无精子症生精细胞生殖激素抑制素B

基于FOXO1信号通路观察杜仲补天素对睾丸障碍大鼠生精细胞凋亡及生精功能的研究: 2023年; 目的探究基于叉头转录因子O1型(FOXO1)信号通路观察杜仲补天素对睾丸障碍大鼠生精细胞凋亡及生精功能的研究。方法选取40只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、生精胶囊组、杜仲补天素组,每组10只,对模型组、生精胶囊组、杜仲补天素组采用热激法建立睾丸障碍大鼠模型,建模成功后,对生精胶囊组给予灌胃450 mg/kg的生精胶囊,对杜仲补天素组给予灌胃970 mg/kg的杜仲补天素,正常组、模型组同期给予灌胃同体积生理盐水,观察并记录大鼠生精功能相关指标,苏木素-伊红(HE)染色法检测大鼠睾丸组织病理形态,末端脱氧核苷酸标记(TUNEL)法检测生精细胞凋亡,实时荧光定量PCR法检测大鼠睾丸组织中凋亡相关基因表达。另外选取20只SPF级SD雄性大鼠,采用热激法建立睾丸障碍大鼠模型,建模成功随机将其分为AS1842856组(给予灌胃30 mg/kg的FOXO1信号通路抑制剂AS1842856)和AS1842856+杜仲补天素组(给予AS1842856联合杜仲补天素),免疫印迹法检测FOXO1信号通路相关蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠精子总数、精子活动率、睾丸组织中Bcl-2 mRNA水平显著降低,精子畸形率、生精细胞凋亡率以及睾丸组织中Caspase-3、Bax mRNA水平显著升高,差异均有统计学意义(P均<0.05);与模型组比较,生精胶囊组、杜仲补天素组大鼠精子总数、精子活动率、睾丸组织中Bcl-2 mRNA水平显著升高,精子畸形率、生精细胞凋亡率以及睾丸组织中Caspase-3、Bax mRNA水平显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.05);且杜仲补天素组各指标均比生精胶囊组变化明显,差异均有统计学意义(P均<0.05)。正常组大鼠睾丸生精小管直径宽且排列密集,生精上皮较厚,生殖细胞层次和数量较多,可见精子形成;模型组大鼠生精小管直径明显缩短且排列稀疏,生精上皮明显变薄,生殖细胞数量明显减少,且未见明显精子形成;与模型�; 常庆玲蔡文涛陈丽华胡华; 关键词：生精细胞凋亡生精功能

Zfx在小鼠睾丸生精细胞中的表达: 2023年; 目的:了解Zfx基因在各级生精细胞中的表达情况。方法:本试验采集6、8、17日龄和成年小鼠睾丸,采用组合酶消化法制备单细胞悬液,BSA铺设密度梯度法分离生精细胞,运用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)及Western印迹法(WB)方法检测Zfx基因的表达。结果:组合酶消化法制备单细胞悬液、BSA铺设密度梯度法可获得纯度>85%的各级生精细胞;Zfx基因在原始A型精原细胞、A型精原细胞、B型精原细胞中表达水平低,前细线期精母细胞、粗线期精母细胞、圆形精子细胞中表达量高,长形精子、成熟精子不表达。结论:Zfx基因在各级生精细胞中呈现阶段性表达,可能是参与调控生精细胞减数分裂的重要转录因子。; 王香祖席继锋赵义龙; 关键词：小鼠睾丸生精细胞细胞分离精子发生

从内质网应激研究高脂饮食对小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响被引量：1: 2023年; 目的从内质网应激的角度研究高脂饮食对小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。方法将C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常组和高脂饮食组,每组6只,分别给予普通饲料和高脂饲料持续喂养5个月。小鼠称体质量,麻醉后处死,取睾丸组织,称质量并计算睾丸指数;取附睾组织进行精液分析;HE染色检测睾丸组织形态学变化;TUNEL染色检测生精细胞凋亡;Western blot检测睾丸凋亡及内质网应激相关蛋白的表达水平;免疫荧光法检测GRP78蛋白表达和定位的变化。结果与正常组相比,高脂饮食组小鼠体质量明显增加,睾丸指数明显下降;精子浓度和精子活率明显下降;睾丸生精细胞排列松散,生精上皮厚度明显变薄,生精小管直径无明显变化;生精细胞凋亡增多,凋亡指数明显增加;Bax和cleaved-caspase-12蛋白的表达明显增加,Bcl-2蛋白表达明显降低;GRP78,p-IRE1,XBP1,ATF6α蛋白的表达水平明显上调,而p-PERK,p-eIF2α,ATF4蛋白的表达无明显变化,免疫荧光结果进一步显示睾丸组织中GRP78的表达明显增加,表达位置无明显变化。结论高脂饮食可诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡,其机制可能与激活内质网应激IRE1信号通路和ATF6信号通路有关。; 周本文张长城邓何陈思敏常言语杨焱娜付国庆袁丁赵海霞; 关键词：高脂饮食睾丸生精细胞内质网应激未折叠蛋白反应

电针对2型糖尿病大鼠睾丸形态及生精细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响: 2023年; 目的:观察电针对2型糖尿病大鼠睾丸形态及睾丸生精细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响,探讨通过电针降糖改善T2DM大鼠生精细胞凋亡的作用机制。方法:12只雄性Wistar大鼠高糖高脂饲料喂养结合2%链脲佐菌素溶液(35 mg/kg)腹腔注射制备2型糖尿病模型,以大鼠随机血糖(BG)>16.67 mmol/L、空腹血糖(FBG)>11.1 mmol/L为成模标准。成模后的糖尿病大鼠按血糖高低随机区组分为模型组和电针组,后续仍以高糖高脂饲料喂养。同时设立空白对照组6只,普通饲料喂养。电针组大鼠选取双侧“胃脘下俞”“脾俞”“足三里”“三阴交”进行针刺,电针同侧“胃脘下俞”“足三里”,每周6次,持续6周。干预前后检测各组大鼠空腹血糖(FBG);干预结束后取大鼠血清Elisa法检测血清胰岛素(INS)、睾酮(T)含量;HE染色法观察各组大鼠睾丸形态学变化;Western Blot法检测各组大鼠睾丸Bcl-2、Bax蛋白表达水平,Image J软件测定条带灰度。结果:干预前,模型组、电针组大鼠FBG均显著高于空白组(P<0.01),两组大鼠FBG差异无统计学意义(P>0.05)。干预6周后,与空白组相比,模型组大鼠FBG显著升高(P<0.01),血清INS、T水平显著降低(P<0.01),睾丸Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01),Bax蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,电针组大鼠FBG显著降低(P<0.01),血清INS、T水平升高(P<0.05或P<0.01),睾丸Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),Bax蛋白表达降低(P<0.05)。HE染色显示模型组较空白组病理改变明显,电针组整体情况优于模型组。结论:高血糖状态下,雄性大鼠血清睾酮水平下降,生精细胞凋亡增加;电针可明显降低2型糖尿病大鼠FBG水平,缓解高血糖状态下大鼠生精小管内部形态的病理性改变,保护精子正常发育,其机制可能与电针下调促凋亡因子Bax蛋白表达、上调抑凋亡因子Bcl-2蛋白表达和抑制生精细胞凋亡的功能有关。; 郭卫星李瑞董滢宋姗姗段浩茹庄舒婷莫芳芳郭孟玮; 关键词：2型糖尿病生精细胞 BAX BCL-2

依据“阳化气,阴成形”理论探讨支持细胞支持功能与生精细胞精子发生被引量：1: 2023年; “阳化气,阴成形”概括了阴与阳的功能和特性:阳推动人体无形的功能活动,阴生成人体有形的形质。由此可阐释人体生理、病理情况及宏观、微观生命活动,即可应用“阳化气,阴成形”从中医学角度理解解剖定位的器官、组织、细胞的结构与功能。支持细胞与生精细胞共同存在于生精上皮,二者在结构和功能上具有紧密联系。支持细胞发挥无形的支持功能,归属于“阳化气”;生精细胞则通过精子发生形成有形的精子,归属于“阴成形”。支持细胞发挥营养支持、免疫保护等功能,推动、保障和维持生精细胞的精子发生,生精细胞也会对支持细胞的功能发挥一定调控作用,二者互根互用。该文将有助于理解支持细胞和生精细胞在生精过程中的互作关系,并为涉及支持细胞和生精细胞异常的男性不育症的辨证论治提供中医理论参考。; 姜荟茜庄鑫丽叶一帆徐文慧胡素敏; 关键词：支持细胞生精细胞精子发生阳化气阴成形

精子浓度在精子凋亡率及生精细胞脱落状态中的作用分析: 2023年; 目的探讨不同精子浓度精液的精子凋亡率及各级生精细胞的脱落状态。方法收集2022年8~12月来北京美中宜和北三环妇儿医院生殖男科就诊的861例不育症患者为研究对象。根据不同精子浓度分为两组:精子浓度≥15×10^(6)个/ml的为正常精子浓度组(n=775),精子浓度<15×10^(6)个/ml的为低精子浓度组(n=86)。采用计算机辅助精子分析(CASA)系统,比较两组精液的精子活动率;采用Diff-Quik染色法,比较两组患者正常形态精子百分率、精子凋亡率及各级生精细胞的脱落数量。结果与正常精子浓度组比较,低精子浓度组的精子活动率、正常形态精子率均显著降低,而精子凋亡率显著升高(P均<0.05);正常精子浓度组精液中生精细胞检出率显著低于低精子浓度组(52.90%vs.88.37%)(P<0.05),在计数200个精子范围内,正常精子浓度组共检出995个生精细胞,平均每例精液标本检出1.28个生精细胞;低精子浓度组共检出440个生精细胞,平均每例精液标本检出5.12个生精细胞,其检出数量为正常精子浓度组的4倍;两组间各级生精细胞的占比情况无显著性差异(P>0.05)。结论Diff-Quik染色可作为精子凋亡率和生精细胞分析的有效方法;低精子浓度患者行精液生精细胞和精子凋亡率检查,对进一步了解睾丸生精障碍程度及精子异常染色质状态有着重要价值,临床应给予重视,并积极开展。; 袁长巍沈肖方袁晓立谭双曹兴午; 关键词：精子浓度精子形态精子凋亡生精细胞

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