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野大麦肌动蛋白基因片段的克隆及其表达特征分析: 2024年; 野大麦(Hordeum brevisubulatum)是重要的野生禾本科牧草,具有多种抗逆性。为深入挖掘野大麦的抗逆基因,本研究以RT-PCR法克隆了野大麦肌动蛋白基因(Actin,ACT)的核心片段。采用BLAST序列比对,qRT-PCR实时定量方法对其序列特征和表达特性进行了分析。结果表明,野大麦ACT的基因片段长518 bp,编码171个氨基酸。BLAST分析表明,野大麦的肌动蛋白基因片段与大麦(Hordeum vulgare)ACT基因核苷酸序列的一致性达97%,与ACT蛋白氨基酸序列的同源性达91%,并将其命名为HbACT。与11种相关植物进行ACT氨基酸序列比对发现,HbACT含152个保守氨基酸和19个非保守氨基酸,说明HbACT蛋白具有高度保守性。qRT-PCR分析表明,在不同盐浓度处理条件下,不同处理时间野大麦各器官的HbACT的Ct平均值为19.30,地上部的变异系数为3.5,峰度系数为0.262;地下部的变异系数为5.3,峰度系数为0.409,均属于尖峰分布,Ct值的稳定系数均小于1.7。综上所述,HbACT基因表达稳定,可作为内参基因用于研究野大麦功能基因的表达模式分析。; 袁惠君关玉晨王春梅冯欢张欢欢袁毅君; 关键词：野大麦肌动蛋白基因克隆

SATB1与肌动蛋白基因的异源表达与体外相互作用: 2023年; SATB1通过调节染色质高级结构变化,影响细胞内基因的表达。前人研究发现,细胞核肌动蛋白(Actin)与SATB1共同调控细胞凋亡相关基因的表达。然而,二者之间的相互作用机制并不清楚。本研究以人T淋巴细胞瘤细胞Jurkat c DNA为模板,通过PCR扩增获得β-actin和SATB1基因编码序列,分别插入p ET32a和p GEX4T-2载体中构建原核表达质粒pET32a-his-β-actin和pGEX4T-2-GST-SATB1,并对重组质粒进行酶切和DNA测序验证。然后,将pET32a-his-β-actin和pGEX4T-2-GST-SATB1质粒转化BL21(DE3)菌中进行诱导表达和纯化。通过体外蛋白pulldown实验检测肌动蛋白与SATB1二者体外结合情况。结果表明,重组质粒pET32a-his-β-actin和pGEX4T-2-GST-SATB1构建成功。体外蛋白pulldown实验发现肌动蛋白与SATB1在体外能够结合,二者具有相互作用。本研究为深入研究肌动蛋白和SATB1在基因表达中的相互作用机制提供了科学依据。; 齐文靖鄂明菊卜庆盼韩德复; 关键词：SATB1 肌动蛋白异源表达蛋白相互作用

布氏轮藻肌动蛋白基因家族的全基因组鉴定及表达分析: 2022年; 为了解肌动蛋白actin在轮藻植物生长发育中的潜在功能,本研究利用生物信息学方法对布氏轮藻肌动蛋白基因家族进行了鉴定及表达分析.在布氏轮藻中共鉴定出16个肌动蛋白基因,将其重命名为CbACT1~CbACT16,其氨基酸长度为361~1182 AA,相对分子质量为39 886.71~117 256.72 Da,等电点介于4.68~8.93;亚细胞定位预测显示15个肌动蛋白基因位于细胞质中,1个位于叶绿体中;二级结构结果表明肌动蛋白基因主要以无规则卷曲和α螺旋为主;共线性分析中仅发现一对源自片段重复的旁系同源基因;系统发育结果表明轮藻肌动蛋白基因可以分为两个亚家族,结合基因结构及保守基序分析,同一亚家族倾向于具有相似的外显子分布,较多的共有基序;基于启动子顺势作用元件分析表明,16个肌动蛋白基因参与了许多与生物和非生物胁迫、激素调节和光反应有关的生命活动.组织表达分析显示,16个基因在四种不同组织中存在差异性表达,表明它们在不同组织的生长发育过程中具有不同的功能.因此,轮藻肌动蛋白基因家族可能参与了轮藻植物不同组织的发育过程及响应生物和非生物胁迫等的过程.; 胡莎莎张冬群张苡芃韩鹏举兰利琼卿人韦; 关键词：系统进化分析

伴肌动蛋白基因突变杆状体肌病2型1例报告并文献复习被引量：1: 2021年; 目的总结伴肌动蛋白(NEB)基因突变导致的杆状体肌病(NM)的临床表现及遗传学特点。方法回顾性分析1例NM2型患者的病史、体征、实验室检查结果、NEB基因检测结果,并结合文献进行分析。结果先证者发病年龄为2岁半,因下肢肌无力、走路不稳就诊,多次反复呼吸道感染,15岁时因重症肺炎就诊,查血清肝酶心肌酶正常。二代测序结果提示患儿NEB基因存在c.23122-1G>C杂合突变,同时NEB基因的40~60号外显子存在杂合缺失,经一代测序验证c.23122-1G>C杂合突变来自于母亲。结论幼儿期起病、病程长,存在肌无力、肌张力低下的患者应警惕先天性NM可能,病理检查和基因检测是NM诊断的金标准;NEB基因c.23122-1G>C杂合突变为新发现的突变位点。; 黄坤玲刘建华牛波路素坤曹丽洁及立立吕文山帅金凤; 关键词：杆状体肌病肌无力遗传学特征

赤眼鳟β-肌动蛋白基因克隆、组织表达与稳定性分析被引量：1: 2020年; 为探究赤眼鳟(Squaliobarbus curriculus)β-肌动蛋白(β-actin)基因的结构和表达特性,本文采用RT-PCR技术和RACE法,从赤眼鳟肝脏中获得了赤眼鳟β-actin cDNA全长序列(GenBank:MT119965),该基因cDNA全长共1816 bp,由94 bp的5’端非编码区,594 bp的3’端非编码区和1128 bp的开放阅读框(95-1222)组成,阅读框共编码375个氨基酸。通过序列比对和系统进化树的构建,赤眼鳟β-actin与鲤科鱼类聚为一支且与鲮鱼、鲫鱼、黄颡鱼等多个物种的β-actin氨基酸同源性都为99%。荧光定量(qPCR)表达分析显示,β-actin在赤眼鳟肌肉、肠、脾脏、皮肤、血液、鳃、体肾、头肾、心脏和肝脏十个组织中都有表达,但不同组织的表达量存在差异。利用Best keeper软件对赤眼鳟体内的延伸因子1(elongation factor 1,EF1)和β-actin基因进行稳定性对比,发现β-actin基因稳定性低于EF1基因。以上结果为赤眼鳟的分子系统进化研究提供证据,也为赤眼鳟功能基因表达研究提供参考依据。; 陈蕾陈淑颐周刚黄宇宏李伟王静安肖调义刘巧林; 关键词：Β-肌动蛋白基因克隆稳定性

蓖麻肌动蛋白基因的克隆、抗体制备和表达分析: 2020年; 为探讨蓖麻肌动蛋白(Actin)基因(RcActin)是否可作为蓖麻基因表达研究中的内参基因。以蓖麻生长根为试验材料,根据GenBank中公布的RcActin全长cDNA序列(登录号:XM002522148.3)设计合成特异性引物,经PCR扩增获得RcActin的编码序列(CDS),并将其插入原核表达载体pET32a(+)中。重组表达载体pET32a(+)-RcActin转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合6个组氨酸标签的目的蛋白,表达蛋白经钴离子螯合磁珠纯化后,采用Western Blot验证,结果表明,pET32a(+)-RcActin可诱导表达分子量约为61.46 ku的融合蛋白His-RcActin。用纯化的His-RcActin免疫BALB/c小鼠,经细胞融合及筛选获得9株能分泌抗蓖麻RcActin蛋白质单克隆抗体(Monoclonal antibody, McAb)的杂交瘤细胞株。利用阳性杂交瘤细胞株刺激小鼠,取腹水,采用间接ELISA方法测定,结果表明,5株阳性单克隆细胞株腹水效价达到1∶1 000 000及以上。用蛋白A/G亲和层析法纯化His-RcActin McAb;采用间接ELISA方法对纯化McAb的特异性进行测定,3株阳性细胞株能分泌针对RcActin的特异性McAb;通过抗体亚类鉴定试剂盒鉴定纯化McAb的亚型,结果表明,3株阳性细胞株分泌的McAb亚类均为IgG1。采用间接ELISA方法对3株阳性细胞株分泌McAb的稳定性进行鉴定,获得1株在体外传19代或液氮冻存4个月后、能稳定分泌McAb的阳性细胞株。采用Western Blot和间接ELISA方法对从该细胞株中纯化的McAb的特异性、效价进行验证,结果表明,获得的McAb具有针对RcActin的特异性且效价为1∶512 000。以制备的McAb为一抗,利用Western Blot方法分析RcActin在正常水肥管理且时空一致条件下的蓖麻8个组织中的表达量,结果表明,蓖麻不同组织中RcActin的含量存在显著性差异(P<0.05)。RT-qPCR分析结果表明,蓖麻不同组织中RcActin mRNA也存在显著性差异(P<0.05)。通过Western Blot方法分析RcActin在不同浓度NaCl胁迫下盆栽蓖麻根系中的表达量;通�; 王芳汤璧蔚董乐刘宝刘宝黄苹苹张立群栾芙蓉; 关键词：蓖麻肌动蛋白基因克隆单克隆抗体

细粒棘球绦虫肌动蛋白基因的克隆表达: 2020年; 目的克隆表达细粒棘球绦虫肌动蛋白(EgACT)基因,并获得EgACT纯化蛋白.方法将经全序列合成、密码子优化合成的目的基因EgACT克隆入PET28a-SUMO表达载体中、转化入Rosetta(DE3)中,诱导表达采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG),经镍琼脂糖凝胶亲和层析法获得纯化蛋白.结果重组质粒PET28a-SUMO-EgACT构建成功.SDS-PAGE结果显示,目的蛋白在Rosetta(DE3)中获得高效表达,相对分子量约为60 kDa.结论完成细粒棘球绦虫肌动蛋白基因的克隆及其在Rosetta(DE3)中的表达,并获得纯化蛋白.; 高瑞雪李超群张耀刚李凤辉赵婧姜博璠张发斌; 关键词：细粒棘球绦虫肌动蛋白基因克隆原核表达

一个棉花肌动蛋白基因突变体及其应用: 一个棉花肌动蛋白基因突变体及其应用，属于基因工程技术领域。该突变体基因cDNA ORF的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明的基因突变体能重塑拟南芥和棉花的外观形态，且获得的转基因植株均能正常开花结果，转化基因...; 曹跃芬戎均康代华琴涂礼莉

扁果枸杞肌动蛋白基因片段的克隆及其表达特征分析被引量：1: 2019年; 为克隆扁果枸杞(Lycium barbarum Bianguo)肌动蛋白基因作为基因表达模式分析的内参基因,根据几种茄科植物肌动蛋白氨基酸序列保守区设计引物,以扁果枸杞3周龄叶总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增肌动蛋白基因片段并连接到p MD18-T载体上,阳性克隆经PCR检测后测序。结果表明,该基因片段长598 bp,编码198个氨基酸,与枸杞(Lycium chinense)核苷酸序列的相似度和同源性分别达97%和100%,说明是肌动蛋白基因片段,命名为Lb ACT。荧光定量PCR分析表明,盐处理下Lb ACT基因在各器官中的Ct值稳定,可作为内参基因用于研究扁果枸杞功能基因的表达模式分析。; 袁惠君李学勇高泽王春梅李虎军; 关键词：肌动蛋白基因克隆 RT-PCR

赤眼鳟β-肌动蛋白基因cDNA全长序列、扩增引物及扩增方法: 本发明公开一种赤眼鳟β‑肌动蛋白基因cDNA全长序列的扩增方法，通过RT‑PCR技术和RACE法，从赤眼鳟肝脏中克隆获得了赤眼鳟β‑肌动蛋白基因cDNA全长序列，并利用软件对其进行氨基酸理化性质分析、信号肽预测、一级、二...; 刘巧林李伟肖调义许宝红

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