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利用CRISPR/Cas13d抑制肠道病毒71型感染: 2025年; 肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染会导致手足口病和危及生命的神经系统疾病,目前尚无针对EV71的抗病毒药物可用。为了利用成簇规则间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein,CRISPR/Cas)系统抑制EV71感染,本研究选择CRISPR/Cas13d系统,构建U6启动子驱动的向导RNA(guide RNA,g RNA)、EF-1α启动子驱动的Cas13d和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达载体;将不同g RNA质粒分别转染人胚肾细胞293T(HEK293T)后感染EV71,通过实时荧光定量PCR检测EV71 VP1 m RNA的含量,采用Western-blot检测EV71 VP1蛋白的表达量,利用流式细胞术检测GFP蛋白的含量,运用CCK-8法检测细胞活力。结果显示,在5个靶向EV71基因组不同位置的g RNA质粒中,有4个可以显著抑制EV71 VP1 m RNA和蛋白质表达,其中1个质粒具有较强的旁切活性,但是所有的质粒均没有表现出显著的细胞毒性。实验结果初步表明,可以利用CRISPR/Cas13d系统抑制EV71感染,但是需要选择合适的g RNA,以保障抗病毒作用和避免细胞毒性。; 张晓晓古天乐吴朔徐溪王高文遆新宇张艳; 关键词：抗病毒活性

肠道病毒71型感染C57BL/6J小鼠原代神经元模型建立: 2025年; 目的本研究旨在探讨C57BL/6J小鼠原代神经元的分离培养方法,并建立肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染原代神经元的模型。方法采用新生24 h C57BL/6J小鼠,通过断头取脑,结合物理剪切与胰酶消化的方式分离神经元。通过光学显微镜观察不同培养时间点神经元的形态变化,并使用免疫荧光法鉴定细胞类型。在EV71感染原代神经元48 h后,观察细胞病变现象。利用共聚焦显微镜,通过免疫荧光法观察VP1蛋白与β-Ⅲtubulin的共定位,从而确认病毒感染情况。此外,采用不同感染时间点收集细胞上清液,检测半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective doses,TCID_(50)),以确定EV71感染原代神经元的增殖动力学。结果第6 d培养的原代神经元在显微镜下能够清晰地观察到细胞胞体及轴突,且神经元形成相互连接的网络结构;EV71感染48 h后,神经元出现典型的细胞病变效应(cytopathic effects,CPE),VP1与β-Ⅲtubulin显示出明显的共标现象。感染过程中,EV71病毒滴度呈现先升高后降低的趋势。结论通过物理剪切与胰酶消化联合方法成功分离并培养了原代神经元,成功建立了EV71感染原代神经元模型。该模型为后续研究EV71致病机制提供了新的平台和研究方法。; 王倩云汤仁树刘雪娟方伟朱彬彬张文艳芦宝静; 关键词：肠道病毒71型细胞培养

穿心莲内酯体外抗肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的作用: 2025年; 目的观察穿心莲内酯体外抗肠道病毒71型(enteroviruses 71,EV71)和柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CA16)的作用效果。方法采用细胞病变(cytopathic effect,CPE)法和噻唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)法测定穿心莲内酯对人恶性胚胎横纹肌瘤细胞(human rhabdomyosarcoma cells,RD)的最大无毒剂量和穿心莲内酯对感染细胞后的EV71和CA16体外抑制作用;通过荧光定量PCR法检测穿心莲内酯溶液对EV71和CA16中VP1基因,RD细胞中3种促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α在基因水平的变化。结果MTT结果显示穿心莲内酯对RD细胞的最大无毒剂量为78μg/mL;手足口病毒感染细胞,随后分别经78.00、39.00、19.50、9.75、4.88、2.44μg/mL的穿心莲内酯溶液处理,感染EV71病毒的细胞存活率增加至(82.41±1.76)%、(79.54±2.91)%、(81.02±1.99)%、(71.81±2.26)%、(52.87±1.51)%和(50.41±0.93)%,感染CA16病毒的细胞存活率增加至(81.00±0.64)%、(79.72±1.38)%、(61.59±3.47)%、(53.37±0.53)%、(52.41±1.37)%和(43.69±0.40)%,表明穿心莲内酯能明显降低EV71和CA16引起的细胞病变效应;手足口病毒感染后,用78.00、39.00、19.50、9.75μg/mL的穿心莲内酯溶液给药,显示EV71和CA16中VP1,RD细胞中促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达量与病毒对照组相比均有明显降低,结果表明手足口病毒感染后,用穿心莲内酯溶液给药,对手足口病毒的VP1基因表达产生明显抑制作用,且能降低IL-1β、TNF-α、IL-6在mRNA水平的表达。结论穿心莲内酯具有明显的体外抗EV71和CA16病毒的效果,其可能通过抑制促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-6的表达,从而发挥抗EV71和CA16病毒的作用。; 纪洵敏梁宇恒何炽明肖微彭晓放谭丽容曾宏强唐颜柯昌文张磊; 关键词：穿心莲内酯手足口病肠道病毒71型柯萨奇病毒A16型抗病毒作用

北京市石景山区肠道病毒71型疫苗接种前后手足口病发病趋势与接种相关性分析: 2025年; 目的对北京市石景山区肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)疫苗接种前后手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)发病趋势与接种的相关性进行分析,为HFMD的防控策略提供参考。方法汇总“中国疾病预防控制信息系统”2011—2022年HFMD发病资料和“北京市儿童免疫规划信息系统”中提取的2017—2022年北京市石景山区EV71灭活疫苗接种数据、EV71疫苗接种前后6月龄~12岁儿童HFMD发病率和EV71检出率随年份变化趋势,采用无序分类变量Spearman秩相关分析和χ^(2)趋势检验分析EV71疫苗累计接种比例与HFMD发病率、EV71检出率的相关性。结果石景山区6月龄~12岁儿童HFMD发病率在(71.32~2447.7)/10万之间,发病趋势为EV71疫苗接种后HFMD发病强度明显下降;重症病例构成比逐渐降为0,重症病例和EV71感染下降趋势明显,对托幼儿童的保护效果优于散居儿童。但还不能认为6月龄~12岁儿童HFMD发病率、EV71检出率与EV71疫苗接种呈负相关(rs分别为-0.771和-0.638,P分别为0.072和0.173)。结论EV71疫苗接种可有效预防控制HFMD流行,特别是由EV71感染引起的HFMD流行。; 史曼丽郭伟杰任丽君白晓潇李艳辉李敏; 关键词：手足口病发病趋势

肠道病毒71型手足口病患儿血清miR-494、miR-155的表达及其临床意义: 2025年; 目的探讨肠道病毒71型手足口病(EV71-HFMD)患儿血清微小RNA(miR)-494、miR-155的表达,并分析血清miR-494、miR-155对EV71-HFMD的临床意义。方法选取2021年5月至2023年5月该院收治的145例EV71-HFMD患儿,根据病情严重程度分为轻症组(n=81)及重症组(n=64)。另选取同期73例于该院体检健康的儿童纳入健康组,检测并比较3组血清miR-494、miR-155水平及辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)及Th17/Treg。采用Pearson相关分析血清miR-494、miR-155表达水平与Th17、Treg及Th17/Treg的相关性。收集EV71-HFMD患儿的临床资料,采用多因素Logistic回归模型分析EV71-HFMD严重程度的影响因素。结果与健康组比较,轻症组及重症组血清miR-494、miR-155、Th17及Th17/Treg均升高,Treg水平降低(P<0.05),与轻症组比较,重症组血清miR-494、miR-155、Th17及Th17/Treg均升高(P<0.05),Treg水平降低(P<0.05);Pearson相关性分析显示,Th17及Th17/Treg与血清miR-494、miR-155表达水平呈正相关(P<0.05),Treg与血清miR-494、miR-155表达水平呈负相关(P<0.05);重症组体温峰值、发热时间≥3 d占比、咽峡部出疹均高于轻症组(P<0.05);多因素Logistic回归结果显示,发热时间≥3 d占比、咽峡部出疹占比、miR-494高表达及miR-155高表达是重症EV71-HFMD的危险因素(P<0.05)。结论血清miR-494、miR-155在EV71-HFMD患儿中异常升高,二者水平变化与Th17/Treg失衡密切相关。血清miR-494、miR-155水平升高是影响重症EV71-HFMD的危险因素。; 徐祝富丁宝发吴彬彬王晓玲高改宏; 关键词：肠道病毒71型手足口病

肠道病毒71型灭活疫苗(人二倍体细胞)游离甲醛含量的测定方法验证探讨: 2025年; 目的探讨肠道病毒71型灭活疫苗(人二倍体细胞)游离甲醛含量的测定方法。方法色谱条件:以乙腈∶水(70∶30体积比)为流动相,流速:0.6 ml/min,测定波长352 nm;衍生条件:加入2,4-二硝基苯肼乙腈溶液0.5 ml和pH 5.0的缓冲液0.25 ml,60℃水浴20 min。测定衍生物峰面积,并根据甲醛标准品计算疫苗中游离甲醛含量,分别从线性、专属性、重复性、准确度等进行方法学验证。结果甲醛标准品浓度在0.05~100.00μg/ml范围内与峰面积线性关系良好,R^(2)=0.9999;供试品重复性良好,6次重复性结果相对标准偏差(RSD)为1.86%;低、中、高3个不同浓度样品回收率为:85.9%~106.3%;检出限以及定量限分别为0.025、0.05μg/ml;样品衍生后48 h后能够稳定存在,耐用性较好。结论建立的色谱条件能够弥补品红亚硫酸比色法和乙酰丙酮比色法的不足,能对肠道病毒71型灭活疫苗(人二倍体细胞)中游离甲醛进行准确定量。; 杨欢非成瑞王思捷申雪杨力徐宏山; 关键词：甲醛含量

用于检测肠道病毒71型全基因组的引物组、试剂盒、方法及应用: 本发明属于微生物检测技术领域，具体涉及用于检测肠道病毒71型全基因组的引物组、试剂盒、方法及应用。本发明设计出一套特异性针对EV‑A71全基因组序列扩增的引物组，结合多重PCR测序方法，设计了两轮多重PCR引物，弥补了因...; 温红玲徐小莹寇增强王泽群梁昊

肠道病毒71型灭活疫苗研究进展: 2024年; 肠道病毒71型(Enterovirus type 71,EV71)传染性较强,可引起儿童手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)、疱疹性咽颊炎和中枢神经系统感染等。中国EV71感染所致HFMD的疾病负担和经济负担较重,接种EV71疫苗是预防EV71感染最经济有效的措施,2015年12月EV71灭活疫苗获批上市后中国HFMD发病呈下降趋势。本文综述了近年来EV71疫苗上市前和上市后研究结果、接种EV71疫苗对HFMD的影响和处于研发阶段的含EV71成分疫苗,为EV71疫苗应用和含EV71成分多价疫苗研发提供参考。; 肖金波史景红严冬梅祝双利冀天娇冀天娇李雅静; 关键词：肠道病毒71型手足口病

一种肠道病毒71型病毒样颗粒、其制备方法及应用: 本发明公开了一种肠道病毒71型病毒样颗粒、其制备方法及应用，属于基因工程和生物医药技术领域。所述肠道病毒71型病毒样颗粒是由表达肠道病毒71型的P1衣壳蛋白基因和3CD蛋白酶基因的重组杆状病毒感染SF9昆虫细胞，培养至9...; 刘启亮朱寒钰刘洪波章宁王婧甘燕媚

国产球状微载体在肠道病毒71型疫苗培养中的应用: 2024年; 目的研究国产细胞培养用球状微载体应用于肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗生产的可行性.方法采用进口与国产2种微载体于40 L反应器中培养Vero细胞并接种EV71,对比2种微载体的细胞贴壁效率、细胞生长状况、培养病毒的抗原含量及病毒滴度的差异.结果在40 L反应器培养阶段,2种微载体中细胞密度(t=1.05,P=0.354)、细胞贴壁效率(t=1.65,P=0.173)以及种毒后96 h病毒滴度(t=0.39,P=0.732)间差异均无统计学意义.在120 h时,国产·微载体上的细胞数量为进口微载体的90.11%.种毒后96 h,国产微载体的抗原含量为进口微载体的89.41%.结论综合对比结果及制造、运输成本,国产微载体具有应用于EV71灭活疫苗生产的可行性.; 张豆郭长福明平刚解庭波喻刚乔建陈金华张义锋宰家敏陈筱亚任彬李月影胡超唐革谷怿恒袁波陈晓琦; 关键词：细胞培养

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