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利用CRISPR/Cas13d抑制肠道病毒71型感染: 2025年; 肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染会导致手足口病和危及生命的神经系统疾病,目前尚无针对EV71的抗病毒药物可用。为了利用成簇规则间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein,CRISPR/Cas)系统抑制EV71感染,本研究选择CRISPR/Cas13d系统,构建U6启动子驱动的向导RNA(guide RNA,g RNA)、EF-1α启动子驱动的Cas13d和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达载体;将不同g RNA质粒分别转染人胚肾细胞293T(HEK293T)后感染EV71,通过实时荧光定量PCR检测EV71 VP1 m RNA的含量,采用Western-blot检测EV71 VP1蛋白的表达量,利用流式细胞术检测GFP蛋白的含量,运用CCK-8法检测细胞活力。结果显示,在5个靶向EV71基因组不同位置的g RNA质粒中,有4个可以显著抑制EV71 VP1 m RNA和蛋白质表达,其中1个质粒具有较强的旁切活性,但是所有的质粒均没有表现出显著的细胞毒性。实验结果初步表明,可以利用CRISPR/Cas13d系统抑制EV71感染,但是需要选择合适的g RNA,以保障抗病毒作用和避免细胞毒性。; 张晓晓古天乐吴朔徐溪王高文遆新宇张艳; 关键词：抗病毒活性

肠道病毒71型手足口病患儿血清miR-494、miR-155的表达及其临床意义: 2025年; 目的探讨肠道病毒71型手足口病(EV71-HFMD)患儿血清微小RNA(miR)-494、miR-155的表达,并分析血清miR-494、miR-155对EV71-HFMD的临床意义。方法选取2021年5月至2023年5月该院收治的145例EV71-HFMD患儿,根据病情严重程度分为轻症组(n=81)及重症组(n=64)。另选取同期73例于该院体检健康的儿童纳入健康组,检测并比较3组血清miR-494、miR-155水平及辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)及Th17/Treg。采用Pearson相关分析血清miR-494、miR-155表达水平与Th17、Treg及Th17/Treg的相关性。收集EV71-HFMD患儿的临床资料,采用多因素Logistic回归模型分析EV71-HFMD严重程度的影响因素。结果与健康组比较,轻症组及重症组血清miR-494、miR-155、Th17及Th17/Treg均升高,Treg水平降低(P<0.05),与轻症组比较,重症组血清miR-494、miR-155、Th17及Th17/Treg均升高(P<0.05),Treg水平降低(P<0.05);Pearson相关性分析显示,Th17及Th17/Treg与血清miR-494、miR-155表达水平呈正相关(P<0.05),Treg与血清miR-494、miR-155表达水平呈负相关(P<0.05);重症组体温峰值、发热时间≥3 d占比、咽峡部出疹均高于轻症组(P<0.05);多因素Logistic回归结果显示,发热时间≥3 d占比、咽峡部出疹占比、miR-494高表达及miR-155高表达是重症EV71-HFMD的危险因素(P<0.05)。结论血清miR-494、miR-155在EV71-HFMD患儿中异常升高,二者水平变化与Th17/Treg失衡密切相关。血清miR-494、miR-155水平升高是影响重症EV71-HFMD的危险因素。; 徐祝富丁宝发吴彬彬王晓玲高改宏; 关键词：肠道病毒71型手足口病

肠道病毒71型灭活疫苗(人二倍体细胞)游离甲醛含量的测定方法验证探讨: 2025年; 目的探讨肠道病毒71型灭活疫苗(人二倍体细胞)游离甲醛含量的测定方法。方法色谱条件:以乙腈∶水(70∶30体积比)为流动相,流速:0.6 ml/min,测定波长352 nm;衍生条件:加入2,4-二硝基苯肼乙腈溶液0.5 ml和pH 5.0的缓冲液0.25 ml,60℃水浴20 min。测定衍生物峰面积,并根据甲醛标准品计算疫苗中游离甲醛含量,分别从线性、专属性、重复性、准确度等进行方法学验证。结果甲醛标准品浓度在0.05~100.00μg/ml范围内与峰面积线性关系良好,R^(2)=0.9999;供试品重复性良好,6次重复性结果相对标准偏差(RSD)为1.86%;低、中、高3个不同浓度样品回收率为:85.9%~106.3%;检出限以及定量限分别为0.025、0.05μg/ml;样品衍生后48 h后能够稳定存在,耐用性较好。结论建立的色谱条件能够弥补品红亚硫酸比色法和乙酰丙酮比色法的不足,能对肠道病毒71型灭活疫苗(人二倍体细胞)中游离甲醛进行准确定量。; 杨欢非成瑞王思捷申雪杨力徐宏山; 关键词：甲醛含量

用于检测肠道病毒71型全基因组的引物组、试剂盒、方法及应用: 本发明属于微生物检测技术领域，具体涉及用于检测肠道病毒71型全基因组的引物组、试剂盒、方法及应用。本发明设计出一套特异性针对EV‑A71全基因组序列扩增的引物组，结合多重PCR测序方法，设计了两轮多重PCR引物，弥补了因...; 温红玲徐小莹寇增强王泽群梁昊

肠道病毒71型灭活疫苗研究进展: 2024年; 肠道病毒71型(Enterovirus type 71,EV71)传染性较强,可引起儿童手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)、疱疹性咽颊炎和中枢神经系统感染等。中国EV71感染所致HFMD的疾病负担和经济负担较重,接种EV71疫苗是预防EV71感染最经济有效的措施,2015年12月EV71灭活疫苗获批上市后中国HFMD发病呈下降趋势。本文综述了近年来EV71疫苗上市前和上市后研究结果、接种EV71疫苗对HFMD的影响和处于研发阶段的含EV71成分疫苗,为EV71疫苗应用和含EV71成分多价疫苗研发提供参考。; 肖金波史景红严冬梅祝双利冀天娇冀天娇李雅静; 关键词：肠道病毒71型手足口病

一种肠道病毒71型病毒样颗粒、其制备方法及应用: 本发明公开了一种肠道病毒71型病毒样颗粒、其制备方法及应用，属于基因工程和生物医药技术领域。所述肠道病毒71型病毒样颗粒是由表达肠道病毒71型的P1衣壳蛋白基因和3CD蛋白酶基因的重组杆状病毒感染SF9昆虫细胞，培养至9...; 刘启亮朱寒钰刘洪波章宁王婧甘燕媚

国产球状微载体在肠道病毒71型疫苗培养中的应用: 2024年; 目的研究国产细胞培养用球状微载体应用于肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗生产的可行性.方法采用进口与国产2种微载体于40 L反应器中培养Vero细胞并接种EV71,对比2种微载体的细胞贴壁效率、细胞生长状况、培养病毒的抗原含量及病毒滴度的差异.结果在40 L反应器培养阶段,2种微载体中细胞密度(t=1.05,P=0.354)、细胞贴壁效率(t=1.65,P=0.173)以及种毒后96 h病毒滴度(t=0.39,P=0.732)间差异均无统计学意义.在120 h时,国产·微载体上的细胞数量为进口微载体的90.11%.种毒后96 h,国产微载体的抗原含量为进口微载体的89.41%.结论综合对比结果及制造、运输成本,国产微载体具有应用于EV71灭活疫苗生产的可行性.; 张豆郭长福明平刚解庭波喻刚乔建陈金华张义锋宰家敏陈筱亚任彬李月影胡超唐革谷怿恒袁波陈晓琦; 关键词：细胞培养

TD-PCR技术用于肠道病毒71型检测的效能: 2024年; 目的探究降落聚合酶链反应(TD-PCR)技术用于肠道病毒71型检测的效能。方法抽取2021年3月至2024年3月陕西省疾病预防控制中心计划免疫所收治的90例手足口病患儿的临床资料进行回顾性分析,采集患儿人口学信息资料及生物标本。90例手足口病患儿粪便标本均经TD-PCR技术检测,分析TD-PCR技术对肠道病毒71型的阳性检出率及定量检测效能。结果90例手足口病患儿中,肠道病毒71型阳性检出率为100.00%(90/90),cDNA最低检测浓度为1.023μg/mL。结论TD-PCR技术可用于快速检测肠道病毒71型,为手足口病病原体诊断提供了可靠依据。; 李鹂秦维宁曾云; 关键词：手足口病肠道病毒71型

E3泛素连接酶斑点型锌指结构蛋白调控RLR信号通路抑制肠道病毒71型复制: 2024年; 目的探讨斑点型锌指结构蛋白[speckle-type POZ(pox virus and zinc finger protein)protein,SPOP]在肠道病毒71型(EV71)感染中的作用。方法免疫共沉淀分析SPOP对EV71非结构蛋白2A蛋白酶(2Apro)泛素化水平的影响,Western blot检测干扰素调节因子3(IRF3)蛋白磷酸化水平,过表达或敲低细胞中SPOP后感染EV71,RT-qPCR分析IFN-β转录水平,RT-qPCR和Western blot检测EV71结构蛋白VP1的转录水平及蛋白质水平。结果过表达HA-SPOP后感染EV71,发现EV71感染RD细胞受抑,同时EV71-2Apro的泛素水平呈HA-SPOP梯度依赖增多。转染shSPOP质粒进行内源性SPOP敲低后,黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)、接头蛋白线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)、磷酸化干扰素调节因子3(p-IRF3)水平呈剂量依赖地减少,而转染HA-SPOP质粒后,MDA5、MAVS、p-IRF3蛋白质水平呈剂量依赖地增加。SPOP高、低表达促进或降低EV71感染的细胞表达IFN-βmRNA,同时抑制和增加VP1在mRNA或蛋白质水平表达。结论SPOP可提高EV71-2Apro的泛素化水平从而促进2Apro降解,推测SPOP可通过抑制2Apro对视黄酸诱导基因蛋白-Ⅰ(RIG-Ⅰ)样受体(RLR)信号通路中关键分子MAVS和MDA5的降解,从而上调IRF3磷酸化水平促进IFN-β释放,最终活化宿主细胞抗病毒固有免疫抑制EV71复制。; 杨歆煜臧利超彭阳蒋丽娟马锦洪史伟峰周围; 关键词：肠道病毒71型

ι-卡拉胶体外抗肠道病毒71型活性研究: 2024年; 目的对海洋来源的化合物ι-卡拉胶进行体外抗肠道病毒71型活性研究。方法细胞病变效应(CPE)抑制实验评价ι-卡拉胶抗肠道病毒71型的活性,CPE实验探究ι-卡拉胶的细胞毒性。通过空斑实验、Western blot实验、实时荧光定量PCR实验探究ι-卡拉胶的抗病毒活性。利用Co-IP实验探究其作用靶点。结果ι-卡拉胶具有高效低毒的抗肠道病毒71型活性,在Vero细胞中效果最好,半抑制浓度(IC_(50))为6.29μg/mL,半数毒性浓度(CC50)大于1 mg/mL,不同作用方式和不同作用时间实验表明,ι-卡拉胶主要起作用于病毒吸附后阶段,且0~2 h给药可以显著抑制病毒VP1蛋白表达。此外,ι-卡拉胶可以与病毒VP1蛋白结合,从而影响病毒感染细胞。结论ι-卡拉胶具有良好的体外抗肠道病毒71型活性,为发现和改造新的海洋来源的糖类化合物提供了借鉴,为寻找新的抗肠道病毒71型药物提供了新思路。; 贺福杰马骁尧徐灿吴瑾瑾王世欣王伟; 关键词：VP1蛋白

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