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红景天苷改善顺铂引起的小鼠耳蜗毛细胞和螺旋神经节神经元损伤的机制
2024年
目的探究红景天苷(SAL)改善顺铂(CIS)引起的耳蜗毛细胞(CHC)和螺旋神经节神经元(SGN)损伤的作用及其与环磷腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP效应元件结合蛋白(CREB)通路的关系。方法分离新生C57BL/6小鼠的耳蜗基底膜,分为对照组(C组)、CIS组、SAL组、SAL+SQ22536(cAMP抑制剂)组和SAL+H-89(PKA抑制剂)组,每组20条。C组仅加入无血清BME培养液;CIS组在培养液中加入15μmol/L CIS;SAL组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL;SAL+SQ22536组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL和5μmol/L SQ22536;SAL+H-89组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL和30μmol/L H-89。各组在培养箱中孵育48 h后,免疫荧光染色观察各组CHC和SGN损伤;试剂盒检测各组耳蜗基底膜中ROS和cAMP含量;Western blot检测各组PKA、p-CREB、CREB、Bcl-2、BDNF、NF-M蛋白水平。结果CIS组CHC排列混乱、体积肿大,SGN细胞核破碎、神经突缺失,SAL可减轻CHC和SGNs损伤。与C组相比,CIS组CHC、SGN数量较少(P<0.05),ROS、cAMP含量、PKA、BDNF、NF-M、Bcl-2蛋白及p-CREB/CREB水平较高(P<0.05);与CIS组相比,SAL组CHC、SGN数量较多(P<0.05),ROS含量较低(P<0.05),cAMP含量、PKA、BDNF、NF-M、Bcl-2蛋白及p-CREB/CREB水平较高(P<0.05)。SQ22536和H-89均可逆转SAL对CHC和SGN的保护作用。结论SAL可能通过激活cAMP/PKA/CREB通路,促进抗凋亡蛋白和神经保护因子表达,缓解CIS引起的CHC和SGN损伤。
李兆龙徐义策李泽文周洁
关键词:红景天苷顺铂毛细胞螺旋神经节神经元
当归芍药散调控IKK/IκBα/NF-κB通路对老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的影响被引量:1
2024年
目的探究当归芍药散调控核转录因子-κB抑制蛋白激酶(IKK)/核因子κB抑制蛋白(IκBα)/核因子-κB(NF-κB)通路对老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的影响。方法将48只C57BL/6J小鼠随机分为老年性聋模型组(Model组)、低剂量当归芍药散组(中药-L组,3.2 g/kg生药)、高剂量当归芍药散组(中药-H组,6.4 g/kg生药)和高剂量当归芍药散+IKK/IκBα/NF-κB信号通路激活剂白藜芦醇(RES)组(中药-H+RES组,6.4 g/kg生药+43.33 mg/kg RES),每组12只小鼠;取12只2月龄的C57BL/6J小鼠作为对照组(Control组)。采用听性脑干反应(ABR)检测各组小鼠听阈值;HE染色观察小鼠耳蜗螺旋神经节的病理变化,并对小鼠耳蜗中回与底回的螺旋神经节细胞的数量进行计数;TUNEL染色法检测小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的凋亡。ELISA法检测小鼠耳蜗组织中丙二醛(MDA)与超氧化物歧化酶(SOD)水平。qRT-PCR法检测小鼠耳蜗组织中IL-1β、IL-6与TNF-αmRNA水平。Western blot法检测小鼠耳蜗组织IKK/IκBα/NF-κB通路与凋亡相关蛋白的表达。结果Model组小鼠较Control组小鼠8 kHz、16 kHz、24 kH、32 kHz听阈值、耳蜗螺旋神经节组织TUNEL阳性细胞数、耳蜗组织MDA及IL-1β、IL-6与TNF-αmRNA水平、p-IκBα、凋亡蛋白(Bax、cleaved-Caspase-3)表达水平、IKK、NF-κB p65磷酸化水平均显著升高(均P<0.05),耳蜗螺旋神经节细胞数量、SOD水平、IκBα蛋白表达水平显著降低(均P<0.05),耳蜗螺旋神经节细胞的形态异常、排列疏松紊乱,发生空泡化,出现病理学损伤。中药-L组、中药-H组小鼠较Model组相应指标变化程度较轻(均P<0.05)。RES减弱了当归芍药散对老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的抑制作用。结论当归芍药散可能通过下调IKK/IκBα/NF-κB通路抑制老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡。
祝晓宇邓华孙川惠曹庆新
关键词:当归芍药散老年性聋耳蜗螺旋神经节细胞
FAM134B在顺铂致螺旋神经节损伤中的作用机制研究
王帆
Waardenburg综合征患者螺旋神经节细胞数量分布特征的分析
2023年
目的本研究旨在研究Waardenburg综合征(Waardenburg Syndrome,WS)患者的耳蜗中螺旋神经节细胞(spiral ganglion neuron,SGN)的数量与非综合征性感音神经性聋(Nonsyndromic sensorineural hearing loss,NS)患者相比是否具有差异,以及耳蜗不同位置之间的数量分布差异。方法本研究采用横断面研究,收集2000年至2020年间就诊于中国人民解放军总医院行人工耳蜗植入的WS患者,收集患者相关信息,包括植入年龄、植入侧别、植入电极型号以及人工耳蜗植入术中的电刺激复合动作电位(Electrical compound action potential,ECAP)测量数据以及其幅值增长曲线(amplitude growth function,AGF)。为控制植入年龄,植入电极类型等混杂因素带来的偏倚,制定对照组患者纳入标准,通过采用窗函数的计算方式,应用Matlab(R2016a)计算两组中不同刺激电极的slope值。依据刺激电极在耳蜗中的位置,将电极分为近蜗顶组,中间组以及近蜗底组,应用采用t检验比较两组患者中不同位置之间的slope值。结果依据纳入以及排除标准,最终纳入16名WS患者以及16名NS患者,经两独立样本t检验证实两组之间具有可比性。WS患者与NS患者的总体slope具有显著差异(P=0.007<0.05;Cohen's d=1.022>1),在不同位置中,以中间组以及近蜗底组的slope值具有显著差异(P=0.001<0.05;P=0.026<0.05,Co⁃hen's d=1.302>1;Cohen's d=0.828>0.8)。结论WS患者SGN的数量明显少于NS患者,并且在耳蜗的不同位置数量改变不同,尤其以底回以及中回的数量改变尤为显著。
倪晓琛罗意李佳楠陈伟陈伟
关键词:WAARDENBURG综合征螺旋神经节细胞ECAP
α2-肾上腺素能受体在水杨酸钠诱导大鼠耳蜗螺旋神经节神经元兴奋毒性中的表达变化
2023年
目的 观察α2-肾上腺素能受体(α2-adrenergic receptor, α2-AR)在大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(spiral ganglion neuron, SGN)中的分布,以及水杨酸钠(sodium salicylate, SS)作用SGN不同时间点后α2-AR各亚型的表达改变,以探讨其在SGN兴奋毒性中的作用。方法 将新生SD大鼠随机分成:对照组、SS处理6 h组、SS处理12 h组和SS处理24 h组,每组2只。急性分离各组SGN后进行原代培养48 h,对照组用新的培养基培养,不做处理,余三组分别用5 mM水杨酸钠处理6 h、12 h、24 h,用免疫荧光染色技术检测SGN中α2-AR各亚型的表达情况;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot方法检测SS作用不同时间后α2-AR各亚型的mRNA和总蛋白表达改变情况。结果 (1)免疫荧光染色表明SGN上存在α2A-AR、α2B-AR、α2C-AR三种亚型的表达;(2)RT-qPCR结果显示在SGN中α2-AR各亚型mRNA相对表达量α2A-AR>α2B-AR(P<0.01),α2A-AR>α2C-AR(P<0.01),α2B-AR和α2C-AR之间差异无统计学意义;与对照组相比,5 mM SS作用SGN 6 h、12 h、24 h后α2A-AR表达量均明显增高(P<0.05);SS作用12 h后α2C-AR表达量开始增高(P<0.05),而α2B-AR呈升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);(3)Western blot结果显示SGN中α2-AR各亚型蛋白表达量α2A-AR>α2B-AR(P<0.01),α2A-AR>α2C-AR(P<0.05),α2B-AR和α2C-AR之间差异无统计学意义,与mRNA表达一致。与对照组相比,5 mM SS作用SGN 12 h后α2A-AR总蛋白开始下降(P<0.05),作用24 h后α2C-AR总蛋白下降(P<0.05),α2B-AR总蛋白不变。结论 α2-AR三种亚型在SGN中均有表达,其中α2A-AR、α2C-AR可能介导了SS诱导的SGN兴奋毒性且α2A-AR比α2C-AR反应更快速。
易健启林晓宇刘金兰陈慧英祝小婷叶莞丽黄佳琳李睿琳苏纪平
关键词:Α2肾上腺素能受体水杨酸钠螺旋神经节神经元兴奋毒性
大鼠螺旋神经节干细胞体外优化培养方法的研究
2023年
目的探索贴壁法进行螺旋神经节(Spiral Ganglion,SG)干细胞培养,同时与传统悬浮培养法对比培养的SG干细胞形态、增殖效率及分化表型。方法取新生1天SD大鼠耳蜗的螺旋神经节位置,以悬浮和单层贴壁的方式进行培养,观察SG干细胞的形态学特点。通过活/死细胞染色和Annexin-V/PI双染法比较其生长状态。通过Nestin、Sox2、Ki67等免疫荧光染色及生长曲线测定等方法对其增殖能力进行比较分析。体外胎牛血清诱导SG干细胞分化,通过Tuj1免疫荧光染色鉴定分化表型并比较分化效率。结果两种培养方式均可获得状态良好的高纯度SG干细胞,免疫荧光染色和生长曲线测定结果提示贴壁培养的干细胞的增殖活性较悬浮培养的干细胞更强。诱导分化后,两种培养方式获得的SG干细胞均可分化为Tuj1染色阳性的双极神经元样细胞。结论本研究结果表明单层贴壁可培养出状态良好的SG干细胞,并且其增殖能力较悬浮培养的干细胞更强。贴壁培养的干细胞可被可成功诱导分化为神经元。提示单层贴壁方式可作为一种稳定的SG干细胞培养方法,从而为SG干细胞的相关研究提供重要技术支持。
朱一丹吴翠萍金越凡殷善开李春燕
关键词:增殖
NT-3对耳蜗螺旋神经节发育的调控机制研究进展被引量:2
2023年
耳蜗螺旋神经元(spiral ganglion neurons,SGN)的存活和增殖依赖于各种神经营养因子的调。SGN的损伤和发育异常均可导致感音神经性耳聋,但SGN无再生能力,听力下降往往很难恢复。因此,对听力下降进行早期干预,防止其不可逆的损伤尤为重要。神经营养素3(neurotrophin-3,NT-3)在耳蜗中高表达并促进SGN的存活、轴突的生长和损伤的修复,这已得到广泛的共识,但对其如何将信息传递到细胞内,从而调SGN的发育仍然不清楚。本文就NT-3在SGN发育期中作用机制的研究进展作一综述。
王雪艳侯书乐金永德孙莲花贾彦均权海燕金玉莲杨军
关键词:NT-3发育MAPK信号通路
生物医学工程技术在螺旋神经节神经元再生中的应用研究进展
2023年
耳聋已成为影响社会政治和经济的全球性健康问题,其中感音神经性聋是最常见的耳聋形式。导致感音神经性聋的途径和机制多样,其中螺旋神经元的神经突退化和丧失是造成感音神经性聋的核心原因。随着生物医学工程技术的飞速发展,构建能够模拟螺旋神经元组织生长微环境的仿生支架来诱导其生长,是实现螺旋神经元再生的关键步骤。本文系统回顾和总结了通过仿生支架和电刺激等诱导螺旋神经元再生的研究进展,并讨论了未来潜在的治疗方法。
郑莎莎崔庆悦齐艳茹程红魏浩胡扬楠柴人杰
关键词:感音神经性耳聋电刺激
水杨酸钠增强氧化应激介导耳蜗螺旋神经节神经元损伤作用的实验观察
2023年
目的观察水杨酸钠(SS)作用大鼠耳蜗螺旋神经节神经元(SGN)后,SGN中氧化应激水平的变化。方法将6只SD大鼠随机分为对照组和SS组,每组3只。通过耳蜗器官培养48 h后,用5 mM SS处理48 h,对照组不予处理,采用免疫荧光染色技术定位耳蜗器官中活性氧自由基(ROS)的主要生成位置。将15只SD大鼠随机分成5组,即对照组、SS组、SS+N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)组、阳性对照过氧化氢(H_(2)O_(2))组、H_(2)O_(2)+NAC组,每组3只。通过急性分离SGN,原代培养48 h后分别用5 mM SS、5 mM SS联合100μM NAC、300μM H_(2)O_(2)、300μM H_(2)O_(2)联合100μM NAC处理48 h,对照组不予处理。采用荧光染色法检测并量化各组大鼠SGN中ROS荧光探针DCFH-DA的平均荧光强度;采用CCK8法检测SGN细胞存活率。结果在耳蜗器官培养中,SS作用后,免疫荧光染色显示ROS荧光增强,并且主要在SGN中表达,而在其他细胞中荧光强度无明显变化。为进一步量化荧光强度,在原代培养SGN中加入5 mM SS处理后,荧光染色法显示ROS平均荧光强度较对照组升高(P<0.001),与H 2O 2组结果一致(P<0.0001)。在加入ROS抑制剂NAC之后,ROS平均荧光强度较SS组下降(P<0.01)。CCK8法结果显示,SS作用之后细胞存活率较对照组下降41.34%(P<0.01);在加入NAC之后,细胞存活率较SS组上升36.05%(P<0.01),与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。H_(2)O_(2)组细胞存活率较对照组下降52.31%(P<0.001),在加入NAC之后,细胞存活率较H_(2)O_(2)组上升34.73%(P<0.01)。结论SS增强SGN的氧化应激,并且导致了SGN损伤。氧化应激抑制剂NAC可以降低SGN的氧化应激,并且对SS致SGN损伤具有保护作用。
祝小婷黄佳琳林晓宇苏纪平
关键词:水杨酸钠氧化应激免疫荧光
耳聋左慈丸上调SIRT1减轻老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞损伤的作用机制研究被引量:4
2023年
目的探讨耳聋左慈丸对老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞损伤的保护作用及其机制。方法①将27只C57BL/6J小鼠随机分为3组,即对照组、老年性聋组和耳聋左慈丸组,每组9只。耳聋左慈丸组小鼠从3月龄开始给予含有中药的饲料喂养至9月龄,老年性聋组同时喂养普通饲料;对照组采用2月龄小鼠。听性脑干反应(ABR)法检测小鼠听阈值的变化;苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠耳蜗螺旋神经节细胞形态学变化;免疫荧光染色法观察小鼠耳蜗螺旋神经节细胞微管相关轻链蛋白3(LC3)、选择性自噬接头蛋白(p62)和沉默信息调因子1(SIRT1)蛋白的表达;转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷-生物素刻痕末端标记(TUNEL)法检测小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的凋亡情况。②体外实验采用C57BL/6J小鼠耳蜗基底膜离体培养模型,分为空白对照组、过氧化氢(H2O2)模型组(0.3 mmol·L^(-1))和耳聋左慈丸低、中、高剂量组(5μg·mL^(-1)、10μg·mL^(-1)和50μg·mL^(-1))。神经丝蛋白200(NF200)免疫荧光染色法观察耳蜗基底膜螺旋神经节细胞形态变化;Western blot法检测SIRT1、LC3-Ⅱ、p62、切割的半胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、半胱天蛋白酶-3(Caspase-3)的蛋白表达。结果①与对照组比较,老年性聋组小鼠(9月龄)听阈值显著升高(P<0.05),耳蜗底回螺旋神经节细胞数量显著下降(P<0.05),SIRT1蛋白表达明显下降(P<0.05),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62表达升高(P<0.05),TUNEL阳性细胞数表达增多(P<0.05)。耳聋左慈丸可明显降低老年性聋小鼠的听阈值(P<0.05),显著增加耳蜗底回螺旋神经节细胞的数量(P<0.05)。与老年性聋组比较,耳聋左慈丸组SIRT1蛋白表达显著增加(P<0.05),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62表达降低(P<0.05),TUNEL阳性细胞数显著减少(P<0.05)。②体外实验发现,与空白对照组干预措施比较,H2O2可致螺旋神经节细胞出现核碎裂或胞体皱缩,听神经纤维紊乱,SIRT1�
王艺蓉阎希芮欧阳朝明李景全闫黎张新蕾刘晴施建蓉楚敏董杨
关键词:耳聋经典名方中药研究

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