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杜仲EuAFP1.2基因遗传转化烟草提高真菌病害抗性: 2022年; 本研究克隆了杜仲(Eucommia ulmoides)抗真菌蛋白EuAFP1.2基因,其CDS序列长为924 bp,编码307个氨基酸。构建植物过表达载体pCAMBIA1301-35S-EuAFP1.2,并遗传转化烟草(Nicotiana tabacum),筛选获得30株转EuAFP1.2基因植株,对转基因烟草植株与野生型及空载体转化烟草植株抗真菌病害能力进行比较。结果表明,在接种小孢根霉菌(Rhizopus microsporus)6 d后转EuAFP1.2烟草植株的相对病斑面积显著小于野生型与空载体转化植株的。接种前后转基因烟草的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化物酶(peroxidase,POD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性均先升高后降低,在接种后24 h酶活性显著高于野生型和转化空载体植株的;而丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量先下降后上升,接种后24 h迅速降低至14.89 nmol/g,显著低于野生型和转化空载体植株的;转基因烟草的脯氨酸含量在接种前后均显著高于野生型和空载体转化植株的。接菌前,转EuAFP1.2烟草中PR1a和PR2的表达量高于野生型和空载体转化植株的,分别为野生型的2.43倍和1.2倍,空载体的2.63倍和1.27倍,PR5表达量无显著差异。接菌24 h后,转EuAFP1.2烟草中的PR1a和PR2基因表达上调,且显著高于野生型和空载体转化植株的;PR5基因被诱导表达。说明EuAFP1.2基因的过表达可减小烟草植株病斑面积,提高烟草清除活性氧的能力及植株中病程相关蛋白基因的表达,从而增强植株对小孢根霉的抑制作用,提高植株的抗真菌病害能力。; 刘雨冉昕赵德刚; 关键词：烟草真菌病害

小麦钙调素基因TaCaM1分子特征及转化烟草植株对低磷胁迫的反应: 2020年; 钙信号转导途径在介导植物应答和适应环境逆境中发挥重要作用。本试验以前期鉴定的对低磷逆境产生应答的小麦钙调素基因TaCaM1为基础,对该基因分子特征、应答低磷胁迫表达模式及介导植株抵御低磷逆境的生物学功能进行了研究。结果表明,TaCaM1基因与部分植物种属CaM家族基因高度同源,基因编码蛋白含有植物种属CaM家族蛋白含有的保守结构域,该基因翻译蛋白经内质网分选后定位在细胞质中。低磷胁迫下,根系中该基因的转录本数量随胁迫进程不断减少,复磷后低磷下调的基因表达不断上调。基因转化结果表明,丰磷条件下,上、下调表达株系的植株生长、干鲜重、含磷量和磷累积量以及细胞保护参数与野生型对照相比表现相似;低磷处理下,与对照相比,转化株系的植株生长和上述生理生化参数发生明显改变,表现为正义系Sen-1植株长势变差,磷累积量减少,部分保护酶活性下降,丙二醛含量增加;而反义系Anti-1植株长势增强,磷累积量增多,细胞保护酶活性提高,丙二醛含量减少。研究表明,TaCaM1通过下调响应低磷逆境,在植株抵御低磷逆境中发挥重要的负调控效应。; 王卓史美华宋文腾马自飞路文静肖凯; 关键词：分子特征

发根农杆菌介导的荔枝LcMYB1转化烟草叶片的研究被引量：2: 2020年; 利用荔枝果皮花青苷生物合成的关键调节基因LcMYB1为标记,构建植物表达载体pBA002-LcMYB1,电转法转入发根农杆菌A4菌株,通过叶盘法转化烟草K326。结果表明,烟草叶片侵染一周后长出白色的毛状根,约3周后部分毛状根逐渐变成红色,毛状根诱导率为100%,红色毛状根诱导率为19.9%。当筛选培养基中添加5 mg·L^-1 Basta,毛状根诱导率降低为33.3%,但红色毛状根诱导率提高到75%。高效液相色谱分析表明,红色毛状根中积累矢车菊素-3-葡萄糖苷和矢车菊素-3-芸香糖苷,PCR检测证实红色毛状根是由LcMYB1的转入引起的。实时荧光定量PCR表明转LcMYB1可以诱导烟草毛状根中花青苷生物合成相关的结构基因和调节基因表达。; 秦雅琪胡桂兵赵杰堂; 关键词：荔枝花青苷 MYB 发根农杆菌烟草毛状根

黄花苜蓿Mfβ-Hex1基因的克隆及遗传转化烟草: 本文以呼伦贝尔黄花苜蓿为研究材料,根据本项目组前期耐牧性状转录组测序差异表达基因的序列信息,设计特异引物,利用PCR技术克隆得到黄花苜蓿β-氨基己糖苷酶基因,对该基因进行了序列特征分析,并采用RT-PCR技术研究了该基因...; 徐文艺; 关键词：黄花苜蓿基因克隆; 文献传递

甘蔗△~1-吡咯啉-5-羧酸合成酶基因转化烟草的抗旱性分析被引量：12: 2018年; 为了分析甘蔗P5CS(sugrcane△~1-pyrroline-5-carboxylate synthetase gene,SoP5CS)基因的抗旱性能,利用农杆菌介导的叶盘转化法对烟草进行遗传转化,对拷贝数较低的4个转基因株系(T_1、T_4、T_6和T_9)进行抗旱性分析。结果显示:在干旱胁迫下,T_9株系中SoP5CS及其编码的蛋白的相对表达量都是最低的,T_1、T_4、T_6中SoP5CS的相对表达量分别是T_9的9.02、3.93和8.51倍,SoP5CS蛋白则分别是T_9的2.22、3.91和1.36倍;进一步分析发现T_1和T_6叶片脯氨酸和ABA含量相对较高,且4个株系均显著高于对照;MDA含量则是对照显著高于转基因植株,其中T_1的MDA累积量最低;P5CR和P5CS活性在对照和转基因植株间表现不一,在T_1和T_4中,2种酶活性均与对照相当,T_6和T_9则是显著高于对照;对于CAT活性,表现为T_6最高,T_1、T_4、T_9也显著高于对照;对于SOD活性,转基因株系均显著比对照高,其中T_4和T_6的相对较高;转基因株系的叶片相对含水量明显高于对照,叶绿素减少量则低于对照。综合分析发现,T_6株系的抗旱性表现最好,T_1株系较好,表明SoP5CS基因确实具有较强的抗旱功能。; 李健杜成忠王露蓉邢永秀李杨瑞杨丽涛; 关键词：甘蔗 P5CS基因抗旱性转基因烟草

金发草LEA3基因2个剪接体转化烟草的抗干旱胁迫能力分析被引量：1: 2018年; 【目的】为进一步鉴定金发草LEA3基因2个剪接体蛋白亲水能力和结构上的改变导致在抗逆能力方面的差异。【方法】本研究利用植物表达系统分析了2个剪接体在烟草体内的功能以及功能之间的差异。以PpLEA3基因2个剪接体(PpLEA3.a和PpLEA3.b)的重组载体pMD19-T-PpLEA3.a和pMD19-T-PpLEA3.b为模板,PCR法构建植物表达载体pBI121-PpLEA3.a和pBI121-PpLEA3.b,并分别转化烟草得到转基因烟草Nt-PpLEA3.a和Nt-PpLEA3.b。【结果】首先对转基因烟草进行分子检测,发现其基因组DNA和RT-PCR检测均表现为阳性,说明外源基因已整合到烟草基因组并可以正常转录表达。随后筛出转基因烟草并收获T2代种子后,对其进行抗旱生理特性分析,发现在遭受甘露醇150 mM的模拟干旱胁迫后,转基因植株均比野生植株生长状况好,野生植株相对矮小,叶片萎蔫,生长畸形,而转基因植株整体受损情况要好很多。同时分析了此模拟干旱条件下转基因植株与野生型植株的丙二醛含量、叶绿素含量和相对电导率的变化。【结论】转基因烟草在干旱胁迫下表现出良好的耐受性,耐受能力PpLEA3.a>PpLEA3.b。进一步说明序列上的差异对基因的抗干旱能力功能起着重要作用。; 李锐王文国赵琦陈晓仪徐莺; 关键词：金发草可变剪接转基因烟草干旱胁迫

桑树MaCDSP32基因转化烟草的抗旱性研究: 为研究桑树基因MaCDSP32的功能,检测了该基因的干旱应答表达模式,利用转基因技术获得超表达转基因烟草,进行胁迫处理试验.结果表明,CDSP32蛋白位于叶绿体中,受到干旱胁迫时桑树叶片中CDSP32的丰度明显降低,复水...; 孙红梅陆鑫赵文睿刘慧苏超张敏娟焦锋; 关键词：桑树基因过表达生理指标耐旱性

天山雪莲SiSAD基因与拟南芥AtFAB2基因转化烟草的抗寒性分析被引量：6: 2018年; 通过转基因烟草(Nicotiana tabacum)验证天山雪莲(Saussurea involucrata)?9硬脂酰-ACP脱饱和酶基因Si SAD与拟南芥(Arabidopsis thaliana)中同源基因At FAB2的抗寒性功能。利用农杆菌介导法将植物表达载体PSi SAD:At FAB2和PSi SAD:Si SAD导入烟草,然后将2种转基因和野生型烟草分别置于20°C、10°C、5°C、0°C及-2°C下处理2小时,检测其相对电导率、丙二醛(MDA)含量、叶绿素荧光参数(Fv/Fm)及脂肪酸含量。将-2°C处理2小时后的植株置于25°C培养1周进行生长恢复实验。结果表明,生长恢复实验中转Si SAD基因烟草的恢复效果显著优于转At FAB2基因和野生型烟草。在0°C和-2°C处理2小时后,转Si SAD、At FAB2基因型和野生型烟草的相对电导率和丙二醛含量呈现显著递增趋势;转Si SAD、At FAB2基因型烟草的Fv/Fm显著高于野生型烟草,其中,转Si SAD基因烟草的Fv/Fm显著高于转At FAB2基因烟草。转At FAB2基因型和野生型烟草的油酸(C18:1)含量随着温度的降低逐渐升高后降低并在0°C时达到最高值;而转Si SAD基因型烟草C18:1含量持续升高,并在-2°C时达到最高值,其含量分别是转At FAB2基因型和野生型烟草的1.58倍和1.7倍。以上结果表明,天山雪莲?9硬脂酰-ACP脱饱和酶基因Si SAD与拟南芥中同源基因At FAB2均可以显著增强非低温驯化烟草的抗寒性,但是Si SAD基因效果显著优于At FAB2。; 陈建权程晨张梦恬张向前张尧王爱英祝建波; 关键词：新疆雪莲抗寒性

HspQ遗传转化烟草和百脉根的研究: 干旱、低温和高盐等逆境胁迫是限制植物生长的重要因素，如季节性水分供应短缺常常导致烟区和草地出现严重的产量下降和品质变劣。研究逆境胁迫下的植物生长发育和进行抗逆植物育种对农业可持续发展具有重要意义。热激蛋白（HSPs）是在...; 周辉; 关键词：百脉根烟草逆境胁迫; 文献传递

越橘VcLon2蛋白酶在转化烟草衰老中的作用: 2018年; 植物衰老往往伴随着过氧化物酶体功能紊乱,Lon2蛋白酶对过氧化物酶体的功能和结构的维持具有重要作用,但目前未见其与衰老相关性的报道。从越橘(Vaccinium ssp.)中克隆了Lon2全长c DNA序列,命名为Vc Lon2(KX611379),并通过烟草中NbLon2基因沉默(Virus Induced Gene Silence,VIGS)技术处理和转VcLon2基因对该基因功能进行研究。结果表明,NbLon2沉默本氏烟植株矮小,叶片小且黄化严重,而VcLon2超表达本氏烟植株鲜绿且粗壮;NbLon2沉默植株叶绿素含量仅为对照的一半,H2O2含量及膜脂过氧化程度也显著高于对照,VcLon2超表达植株则相反。同时,抗氧化酶CAT基因的转录水平在本氏烟各株系中无显著差异,但NbLon2沉默植株内CAT酶活性仅为对照的62.62%,表明Lon2蛋白酶对过氧化物酶体内蛋白质结构和功能的维持发挥着重要作用。此外,NbLon2沉默植株蛋白羰基化程度显著高于对照,植物衰老标记基因SAG12表达量为对照的15 642.2倍。以上研究均表明,Lon2蛋白酶缺失显著加剧光合色素降解、破坏细胞膜系统、羰基化蛋白大量积累等;VcLon2蛋白酶对植物健康维系及衰老延缓等具有重要作用。; 陈文荣陈侨月尤式备余颖李永强杨莉郭卫东; 关键词：越橘植物衰老

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