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利用细菌人工染色体构建人SIRPα转基因模型
2024年
异种细胞和组织移植是免疫缺陷动物主要研究方向之一,为增强免疫缺陷动物对人源细胞与组织的亲和性,降低免疫排斥反应,常通过入人SIRPα(Signal regulatory proteinα)基因使其免疫细胞表达人源SIRPA蛋白。hSIRPA蛋白可识别并结合人源移植细胞上的CD47分子,形成“不要吃我”信号,抑制吞噬细胞吞噬,显著降低受体动物对外来细胞和组织的免疫排斥反应,提高其在动物体内的移植效果。研究通过显微操作技术将含有hSIRPα基因的BAC质粒注射到受精卵原核中,经胚胎移植成功获得h SIRPα转基因。通过PCR、real-time PCR、流式细胞术等方法检测转基因基因型与表型。结果表明:通过检测F0和F1两代hSIRPα转基因基因型,hSIRPα基因被完整地体内。在转基因各组织中hSIRPα基因表达水平存在差异,在回肠、胃、脾脏中,hSIRPα基因表达水平显著高于野生型;外周血流式细胞技术检测结果可知,hSIRPα在转基因的表达水平高于野生型,不影响免疫细胞及组分正常发育。综上,试验成功获得hSIRPα转基因,为获得类似于NSG、NOG小鼠的免疫缺陷模型奠定基础。
杨素杰陶源耿阳赵多维李传沛尹智赵祥杰刘忠华宋军
利用细菌人工染色体(BAC)构建hSIRPα转基因模型
杨素杰
具有共同轻链的转基因
本文报道了包含人源化轻链基因座的转基因载体,其中所述人源化轻链基因座包含(a)衍生自人轻链V区段IGKV1‑39‑01的V基因区段,(b)启动子,其3’近端连接有所述轻链基因区段,和(c)至少一个人IGKJ4J元件的片段...
J·普拉策尔
文献传递
rhPA/GH双转基因的制备及rhPA表达检测被引量:1
2021年
【目的】双基因共整合可协同促进转基因生物的目的基因表达水平提高,研究获得rhPA/GH双转基因,并比较分析目的基因rhPA的表达水平及个体生长发育情况,为制备高表达rhPA转基因动物和遗传育种提供新思路。【方法】利用NotⅠ/SalⅠ双酶切PCL25/GH质粒和QIAGEN DNA胶纯化试剂盒回收显微注射用基因片段。以3只rhPA单转基因(标号K06、K10、K17)作为供体,通过FSH/hCG超数排卵、受精卵原核显微注射、胚胎移植、苯酚/氯仿抽提新生仔耳尖组织基因组、PCR整合检测等方法获得rhPA/GH双转基因。经ELISA和Western blotting对转基因乳清进行表达检测,比较分析单、双基因表达rhPA水平。测量不同月龄的转基因体重,通过监测双转基因不同生长阶段的体重来分析GH对生长发育的影响。【结果】成功获得了约16700 bp大小的显微注射用基因片段,共超排3只供体获得122枚卵,其中103枚受精卵,受精率为84.4%(103/122),显微注射后挑取形态较好的81枚移植6只同步发情受体,5只怀孕,妊娠率为83.3%(5/6),妊娠到期共出生32只仔。通过PCR检测鉴定有19只携带rhPA基因转基因,其中有11只rhPA/GH双转基因(7♂,4♀),双基因整合率为34.4%(11/32),且4只rhPA/GH双转基因来源亲代分别为K06供体2只(标号K06-1、K06-2)、K10供体1只(标号K10-1)、K17供体1只(标号K17-1)。K06号rhPA单转基因乳清中rhPA表达量为42.2μg·mL^-1,K06-1和K06-2号rhPA/GH双转基因乳清中rhPA表达量分别为432、444μg·mL^-1;K10号rhPA单转基因乳清中rhPA表达量为42.8μg·mL^-1,K10-1号rhPA/GH双转基因乳清中rhPA表达量为636μg·mL^-1;K17号rhPA单转基因乳清中rhPA表达量为15.2μg·mL^-1,K17-1号rhPA/GH双转基因乳清中rhPA表达量为248μg·mL^-1。4只rhPA/GH双转基因(K06-1、K06-2、K10-1、K17-1)乳腺表达rhPA含量在248-636μg·mL^-1之间,远远高于rhP
宋绍征于康英张婷陆睿潘生强成勇周鸣鸣
关键词:超数排卵显微注射
具有共同轻链的转基因
本文报道了包含人源化轻链基因座的转基因载体,其中所述人源化轻链基因座包含(a)衍生自人轻链V区段IGKV1‑39‑01的V基因区段,(b)启动子,其3’近端连接有所述轻链基因区段,和(c)至少一个人IGKJ4J元件的片段...
J·普拉策尔
文献传递
转基因乳汁中重组吸血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂的纯化、结构分析和药效研究
用溶栓药消除血栓是一种临床常用的方法。现有的溶栓药虽然有明确的治疗效果,但也存在治疗窗口期窄,用药量大,纤维蛋白特异性低,再灌注率低,系统出血率高,半衰期短,副作用大等问题。而纤维蛋白特异性高,溶栓效率高,出血风险低,半...
张婷
关键词:溶栓药物转基因技术
文献传递
具有共同轻链的转基因
本文报道了包含人源化轻链基因座的转基因载体,其中所述人源化轻链基因座包含(a)衍生自人轻链V区段IGKV1‑39‑01的V基因区段,(b)启动子,其3’近端连接有所述轻链基因区段,和(c)至少一个人IGKJ4 J元件的片...
J·普拉策尔
文献传递
乳腺特异性表达rhPA转基因的繁育及表达产物的纯化与分析
天然人组织纤溶酶原激活剂(t-PA)存在半衰期短,容易失活,内出血风险等问题,而我们进行相应改造的重组人组织纤溶酶原激活剂(rhPA)则具有半衰期延长、产量提高、与人体相容性高等优点。本实验室构建的重组PCL25/rhP...
姜磊
关键词:转基因兔生物活性稳定性
表达瘟病毒VP60-P2的转基因球虫激发特异性免疫应答的研究
业的健康发展受到瘟和球虫病的严重威胁。瘟组织灭活疫苗潜在的生物安全隐患、仔的疫苗免疫持续期短,以及慢性感染家的持续排毒是瘟防控需解决的重要问题。同时,球虫具有良好的免疫原性,一次免疫即可激发较强的黏膜免...
陶鸽如
关键词:兔瘟病毒VP60免疫应答
文献传递
利用转基因研究MMPs在动脉硬化症中的新功能(英文)
<正>Matrix metalloproteinases(MMPs)play an important role in the pathogenesis of vascular diseases,such as athe...
范江霖
关键词:动脉硬化症
文献传递

相关作者

杨华
作品数:234被引量:464H指数:12
供职机构:新疆农垦科学院
研究主题:绵羊 中国美利奴羊 BMPR-IB基因 多胎 萨福克羊
张红琳
作品数:82被引量:240H指数:9
供职机构:南京晓庄学院
研究主题:抑制素 DGGE 抑制素基因免疫 基因免疫 血脑屏障
曾宪垠
作品数:104被引量:378H指数:11
供职机构:四川农业大学生命科学与理学院
研究主题:GNRH 主动免疫 免疫去势 免疫 抑制素
石国庆
作品数:365被引量:1,070H指数:14
供职机构:新疆农垦科学院
研究主题:绵羊 中国美利奴羊 胚胎移植 中国美利奴 湖羊
宋天增
作品数:171被引量:345H指数:9
供职机构:西藏自治区农牧科学院
研究主题:绵羊 山羊 绒山羊 藏猪 诊治