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利用酵母双杂交筛选菠萝AcSWEET11的互作蛋白: 2024年; SWEET(sugars will eventually be exported transporter)基因在植物开花过程中具有重要的作用,但AcSWEET11在菠萝成花中的作用机制尚不清楚。通过鉴定成花过程中与AcSWEET11的互作蛋白,为菠萝成花机制的解析奠定基础。本研究利用共转化的方法在菠萝成花过程的cDNA膜文库中筛选AcSWEET11的互作蛋白,分析候选蛋白的表达量。结果表明,pBT3-STE-AcSWEET11+pPR3-N对NMY51酵母细胞无毒性,但有自激活活性。进一步研究结果显示,在TDO/3?AT培养基和QDO培养基上自激活受到抑制。利用该系统筛选到了81个阳性克隆,经测序鉴定出48个与AcSWEET11互作的候选蛋白,包括E3 ubiquitin-protein ligase RING1-like、Trehalose-phosphate synthase 7、Cytochrome P450、TranscriptionfactorLUX等。GO和KEGG分析结果显示,48个蛋白主要分布在细胞进程、代谢过程、刺激反应和催化活性等生物过程,参与脂类代谢、氨基酸代谢和碳水化合物代谢、信号转导和运输与分解代谢等新陈代谢途径。Trehalose-phosphate synthase 7(XP_020105459.1)、Protein TIFY 3-like(XP_020082835.1)、40S ribosomal protein S27(XP_020092770.1)、Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein 1-like(XP_020112516.1)等4个基因与AcSWEET11表达趋势一致,在菠萝成花过程中下调表达;Dihydrolipoyl dehydrogenase 2(XP_020113798.1)、Putative lipid-transfer protein DIR1(XP_020086640.1)、clathrin assembly protein At4g32285(XP_020108161.1)等3个基因在菠萝成花过程中上调表达。这些结果表明,AcSWEET11可能通过与Trehalose-phosphatesynthase7等蛋白发生互作,参与菠萝成花过程。本研究进一步丰富了AcSWEET11的蛋白互作网络,为AcSWEET11在菠萝成花中的调控机制的解析奠定基础。; 林文秋刘胜辉张秀梅张红娜李运合吴青松; 关键词：菠萝酵母双杂交

一种酵母双杂交筛选蛋白质的方法: 本发明公开了一种高通量酵母双杂交筛选蛋白质的方法，以作为诱饵的基因库来筛选猎物cDNA基因库，利用Cre重组酶作为报告基因和Cre‑lox系统进行重组载体，构建NGS库，本发明方案成本低、可行性高，工作量小。; 后加乐王雪玲

应用酵母双杂交筛选人胃癌耐药细胞SIVA-1基因相互作用蛋白: 2023年; 目的:应用酵母双杂交筛选人胃癌耐药细胞中与SIVA-1基因相互作用的蛋白。方法:构建人胃癌耐药细胞的cDNA文库,运用酵母双杂交及体外免疫共沉淀实验方法筛选SIVA-1相关作用蛋白,探讨其对胃癌耐药细胞耐药性的影响机制。结果:成功构建人胃癌耐药细胞cDNA文库,滴度为4.78×10^(6)cfu/mL,重组率>95%,扩增后滴度达9.50×10^(9)pfu/mL,成功构建诱饵表达载体pGBKT7-SIVA-1,且经自激活检测表明重组诱饵载体pGBKT7-SIVA-1不具有自激活性。经过初筛,我们获得能同时激活三个报告基因(Ade2、His3、LacZ)的阳性克隆21个,随后将21个阳性克隆进行质粒抽提、扩增并进行酵母回转实验,最终获得4个与SIVA-1截短体相互作用的阳性候选克隆。对这四个文库插入片段进行基因测序,最终得到2个不同的与SIVA-1相互作用的蛋白:UXT(泛表达转录子)和PCBP1(多聚胞嘧啶结合蛋白1)。经体外免疫共沉淀实验后,最终筛选出与胃癌耐药细胞SIVA-1相互作用的PCBP1。结论:PCBP1与SIVA-1之间存在蛋白相互作用关系。; 杨杰李卫刘贺孔凡彪王晓通; 关键词：胃癌酵母双杂交

酵母双杂交筛选与牛病毒性腹泻病毒NS4B互作的宿主蛋白: 2023年; 为探究NS4B蛋白在牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)感染和复制过程中的作用,利用酵母双杂交(yeast two hybrid,Y2H)技术筛选与BVDV NS4B蛋白互作的宿主细胞蛋白质。以构建的BVDV NS4B重组质粒pGBKT7-NS4B作为诱饵质粒,采用酵母双杂交技术,与牛肾细胞MDBK-cDNA文库进行杂交。将获得的阳性克隆菌落经质粒抽提、测序分析和免疫共沉淀试验,确定可与NS4B互作的宿主细胞蛋白。结果表明,成功构建了诱饵质粒pGBKT7-NS4B,该质粒可在酵母菌中表达NS4B蛋白。采用酵母双杂交技术从牛肾细胞基因组文库获得14个阳性克隆,阳性克隆经测序、互补试验、免疫共沉淀验证后明确可与BVDV NS4B蛋白互作的宿主蛋白为SYNGR2和RABACI。上述研究为进一步研究BVDV NS4B蛋白在BVDV感染和复制中的作用机制奠定了理论基础。; 丁媛石金凤韩子琪刁乃超邓贺文李健明时坤时坤; 关键词：牛病毒性腹泻病毒酵母双杂交

一种酵母双杂交筛选多肽文库的实验方法: 本发明涉及发酵酵母筛选基因技术领域，且公开了一种酵母双杂交筛选多肽文库的实验方法，包括材料的准备，所述材料的准备包含有诱饵克隆pGBKT7‑gA9‑nosc‑221、诱饵载体pGBKT7、文库酵母质粒pGADT7‑多肽c...; 朱也

利用酵母双杂交筛选与弓形虫棒状体蛋白9相互作用的宿主蛋白被引量：2: 2022年; 【目的】扩增弓形虫(Toxoplasma gondii)RH虫株速殖子的棒状体蛋白9(ROP9)基因,构建诱饵载体,转化Y2H Gold酵母感受态细胞,进行自激活活性检测,运用酵母双杂交系统筛选与ROP9存在相互作用的人脑组织蛋白质。【方法】运用RT-PCR扩增弓形虫RH虫株速殖子ROP9基因,构建诱饵载体pGBKT7-ROP9,转化Y2H Gold酵母感受态细胞,进行自激活活性检测,以转化诱饵载体pGBKT7-ROP9的Y2H Gold酵母菌株与人脑cDNA文库转化的Y187菌株双杂交筛选与ROP9相互作用的宿主蛋白,对阳性克隆进行测序,并用BLAST分析,筛选出与ROP9存在相互作用的人脑组织蛋白质。【结果】运用酵母双杂交系统,筛选出5个与ROP9相互作用的捕获蛋白质:内质网凝集素蛋白1(ERLEC1)、细胞色素c氧化酶铜分子伴侣(COX11)、驱动蛋白结合蛋白(KIAA1279)、GRCh38、膜联蛋白A11(ANXA11)。【结论】首次运用酵母双杂交技术筛选出与弓形虫ROP9相互作用的宿主蛋白质,为进一步研究ROP9与宿主细胞相互作用和机理奠定基础。; 柳立新康小红张阳王泽祥; 关键词：弓形虫酵母双杂交

利用酵母双杂交筛选与致病疫霉菌效应蛋白PITG_07586互作的寄主蛋白被引量：1: 2022年; 致病疫霉是引起马铃薯晚疫病的病原菌,其分泌的效应蛋白是侵染寄主的重要毒力因子。本研究在致病疫霉转录组中筛选到一个侵染早期表达的效应蛋白基因PITG_07586(GenBank:XM_002904522.1)。该基因全长447 bp,其编码蛋白包含1个信号肽,1个核定位信号序列(RRRRKRRKKKK)。在本氏烟草中,瞬时表达该基因显著促进病原菌侵染。亚细胞定位表明GFP-PITG_07586定位在细胞核中。利用酵母双杂交技术并以PITG_07586为诱饵筛选马铃薯cDNA文库,最终获得3个靶标蛋白。经序列比对分析,这3个靶标蛋白分别是马铃薯POM30蛋白、电压依赖阴离子通道蛋白VDAC以及SRC2类蛋白。研究结果为致病疫霉菌效应蛋白PITG_07586及其靶标蛋白如何调控植物免疫提供重要依据。; 张引弟王荟洁陈爱娥刘晶王洪洋李灿辉; 关键词：致病疫霉菌酵母双杂交

Mpp5Ab1毒素互作蛋白酵母双杂交筛选与鉴定: 大猿叶甲(Colaphellus bowringi Baly)属鞘翅目(Coleoptera),叶甲科(Chrysomelidae),无缘甲属(Colaphellus),地理分布广泛,是我国为害十字花科蔬菜的一种重要农业...; 肖常奕鑫; 关键词：苏云金芽胞杆菌酵母双杂交

酵母双杂交筛选与小麦黄花叶病毒P2互作的寄主因子被引量：2: 2021年; 小麦黄花叶病毒(wheat yellow mosaic virus,WYMV)隶属马铃薯Y病毒科(Potyviridae),大麦黄花叶病毒属(Bymovirus)。该病毒基因组是由两条正义单链RNA1和RNA2构成,共编码10个蛋白,其编码的P2在病毒的复制过程中发挥重要功能。文章构建了小麦cDNA酵母文库,通过共转试验共筛选获得若干个候选互作寄主因子,包括水杨酸信号通路因子、E3泛素化连接酶、防御反应、氧化还原酶活性、光系统II组件等18种蛋白,研究P2与寄主因子的互作。进一步试验证实,其中的TaTIFY 10A、Ta14-3-3与WYMV-P2存在互作关系。结果表明,WYMV-P2与小麦的E3泛素化类转录因子、水杨酸信号转录因子、植物光系统的稳定组件及叶绿体的形成关键因子等可能存在互作关系,P2可能参与了寄主多种信号途径,为明确WYMV与寄主的互作机制提供了研究基础。; 韩晓蕾高仕祺张帆羊健刘芃姜鸿明李林志; 关键词：小麦黄花叶病毒小麦 P2 CDNA文库酵母双杂交

致病疫霉菌RXLR效应蛋白AVR1-like寄主靶标的酵母双杂交筛选被引量：1: 2021年; 由卵菌病原物致病疫霉菌引起的马铃薯晚疫病是造成马铃薯毁灭性损失的病害。为了筛选致病疫霉菌RXLR效应蛋白AVR1-like(AL)的寄主靶标,以致病疫霉菌88069菌株的DNA为模板,克隆致病疫霉菌效应蛋白AL,并将其成功构建到pGBKT7载体上,形成诱饵载体。将pGADT7和重组诱饵载体共转化到酵母感受态AH109中,检测到诱饵载体无自激活作用。利用酵母双杂交技术以AL为诱饵筛选晚疫病菌侵染12 h后的番茄cDNA文库,初步获得6个候选AL寄主靶标。对6个候选靶标与AL进行一对一互作验证,结果表明其中有5个与诱饵载体强互作,1个弱互作。这些候选寄主靶标包括热休克蛋白同源蛋白、单脱氢抗坏血酸还原酶蛋白、过氧化物酶体蛋白等。; 张晓将成静单卫星杜羽; 关键词：致病疫霉菌酵母双杂交

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