为将猫重组变应原Fel d 1蛋白展示在乙肝病毒核心抗原(HBcAg)病毒样颗粒的表面,本试验将编码Fel d 1蛋白的两个基因chain1和chain2拼接在一起形成重组Fel d 1(rFel d 1),然后插入到HBcAg的c/e1loop区,取代HBcAg c/e1loop区的D78与E83之间的氨基酸。经密码子优化后进行全基因合成,成功构建了pET28aHBcAg-rFel d 1原核表达载体,将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,进行原核诱导表达与Ni-NTA亲和层析纯化,并进行SDS-PAGE电泳、Western blotting和透射电镜检测。结果显示,本试验成功表达了HBcAg-r Fel d 1融合蛋白,并利用镍柱纯化得到了较纯的HBcAg-rFel d 1融合蛋白,进一步利用负染法透射电子显微镜检测到HBcAgrFel d 1融合蛋白呈现病毒样颗粒结构。HBcAg-rFel d 1融合蛋白能自发形成病毒样颗粒结构,为猫过敏症的预防与治疗性疫苗的开发奠定基础。
目的 探讨粉尘螨Ⅲ类重组变应原（rDer f 3）对过敏性哮喘小鼠的免疫治疗效果。方法 随机将40只BALB/c小鼠均分为4组,哮喘组、免疫治疗组、卵清蛋白（OVA）组和PBS组,分别在第0、第7和第14天哮喘组和免疫治疗组每鼠经腹腔注射100μl致敏液（含rDer f 3 10μg）;卵清蛋白组每鼠经腹腔注射100μl致敏液（含OVA 10μg）;PBS组则以PBS代替致敏液。第21天起,哮喘组和免疫治疗组小鼠用rDer f 3进行滴鼻激发试验,连续7 d,免疫治疗组小鼠在第25～27天滴鼻激发前30 min,用100μg rDer f 3纯化蛋白皮下注射进行特异性免疫治疗。PBS组和卵清蛋白组则分别用PBS和OVA进行滴鼻激发和腹腔注射,最后1次滴鼻激发24 h后脱臼处死小鼠。收集各组小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）进行白细胞和嗜酸粒细胞计数;对肺组织病理切片进行HE染色,镜下观察肺组织炎症细胞浸润情况。ELISA检测BALF和脾细胞培养上清（SSCS）中白细胞介素-5（IL-5）和γ干扰素（IFN-γ）及血清中变应原特异性IgE、IgG2a抗体水平。结果 肺组织病理切片结果显示,免疫治疗组小鼠炎症反应明显减轻。小鼠BALF中白细胞总数在免疫治疗组、卵清蛋白组和哮喘组分别为（7.03±1.38）×108/ml、（22.11±3.70）×108/ml和（22.75±3.24）×108/ml,免疫治疗组低于卵清蛋白组和哮喘组（P〈0.01）,嗜酸粒细胞的变化趋势与白细胞类似。免疫治疗组、卵清蛋白组和哮喘组BALF中IL-5的水平分别为（108.20±11.02）pg/ml、（182.04±13.94）pg/ml和（195.33±15.33）pg/ml,SSCS中IL-5的水平分别为（98.34±13.06）pg/ml、（208.26±10.63）pg/ml和（179.54±13.65）pg/ml,免疫治疗组均明显低于卵清蛋白组和哮喘组（P〈0.01）。而IFN-γ含量则高于卵清蛋白组和哮喘组（P〈0.01）。IgE水平免疫治疗组、卵清蛋白组和哮喘组分别为（9.12±3.78）IU/ml、（26.87±4.30）IU/ml和（35.25±8.84）IU/ml,与卵清蛋�
