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一种Eae-Stx2融合蛋白及基于间接ELISA检测致病性大肠杆菌抗体的试剂盒
本发明公开了一种Eae‑Stx2融合蛋白及基于间接ELISA检测致病性大肠杆菌抗体的试剂盒,属于生物技术领域。所述Eae‑Stx2融合蛋白是将Eae蛋白和Stx2蛋白通过柔性连接子连接而成,所述Eae‑Stx2融合蛋白...
张雪寒李彬汪伟周俊明祝昊丹李运川王丹丹杨珊珊何孔旺
幽门螺杆菌CagA抗体检测的间接ELISA建立及评价
2023年
目的制备高纯度、具有生物活性的CagA蛋白,建立间接ELISA检测CagA抗体,并对该方进行评估。方构建重组表达质粒CagA-PET28a,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,利用蛋白纯化液相色谱仪进行镍亲和层析纯化后再进行离子交换层析纯化。利用验证后的蛋白建立了间接ELISA,通过与市售试剂盒进行比对,对间接ELISA进行评价。结果成功表达并纯化出了高纯度的CagA蛋白,分子量为130 kD,纯度为99.87%。利用该抗原建立了间接ELISA,并对204例待测血清进行检测。与Mikrogen公司血清学检测试剂盒的结果比较,阳性符合率为86.5%,阴性符合率为91%,总符合率为88.7%。对伯劳特公司提供的参考品进行检测,表明该间接ELISA具有较好的重复性且最低检测限检测结果符合预期。结论利用重组CagA蛋白建立的检测患者血清中CagA抗体的方具有较好的检测性能,且重复性较好,最低检测限与市售试剂盒相当。
李玉萍成蕾王洪涛乔苗苗熊丹林骏
关键词:幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A间接ELISA血清学检测
双抗原夹心间接ELISA在无偿献血者HCV抗体检测中的比较分析
2022年
通过对比双抗原夹心间接ELISA在丙型肝炎(HCV)抗体检测,对血站丙型肝炎抗体筛查进行研究分析。方:选择2021年8月至2022年4月期间阜阳市中心血站采集的无偿献血者标本38169例,分别采用双抗原夹心间接、荧光定量PCR进行丙肝检验。以荧光定量PCR为金标准,分析间接、双抗原夹心在HCV抗体检测结果的敏感度、特异度、准确度。结果:荧光定量PCR检测HCV阳性38例,阴性38131例;间接ELISA检测阳性189例,阴性37980例;双抗原夹心检测阳性58例,阴性38111例。双抗原夹心敏感度(97.37%)高于间接ELISA敏感度(60.53%)差异有统计学意义( P<0.05)。且双抗原夹心检测HCV抗体与荧光定量PCR筛查丙型肝炎核酸结果具有较高的一致性(Kappa0.771),接ELISA检测HCV抗体与荧光定量PCR筛查丙型肝炎核酸结果一致性差(Kappa0.201),双抗原夹心检出效率明显高于间接,更为精准。结论:双抗原夹心检测较间接ELISA检测HCV抗体具有更高的敏感度、特异度和准确率,可作为血站筛查HCV抗体筛查的首选方式。
刘鹏飞
关键词:间接ELISA法双抗原夹心法丙型肝炎病毒抗体实时荧光定量PCR法
抗组蛋白H_(2)A抗体间接ELISA的建立和临床初步应用被引量:1
2021年
目的建立检测血清抗H_(2)A抗体的间接ELISA技术,探讨抗H_(2)A抗体对类风湿关节炎(RA)的临床意义。方RT-PCR扩增H_(2)A基因,将其克隆到原核表达载体pET28a,对重组质粒H_(2)A/pET28a进行原核表达,经Western blot检测后,利用H_(2)A重组蛋白建立检测人血清中抗H_(2)A抗体的间接ELISA。用建立的间接ELISA检测50例RA患者和50例健康人对照组血清抗H_(2)A抗体水平。结果表达的H_(2)A蛋白相对分子量约为15000,与预期大小相符,western blot结果表明组蛋白H_(2)A与抗H_(2)A抗体阳性血清具有良好的反应原性。经方学评估,建立的ELISA在特异性、可重复性方面均达到检测要求。RA组抗H_(2)A抗体水平高于健康人对照组(P<0.01)。当cut-off值设为0.494时,RA患者血清抗H_(2)A抗体的阳性率为84%(42/50),明显高于健康人对照组20%(10/50),差异具有统计学意义(χ^(2)=41.026,P<0.01)。结论成功建立了检测血清抗H_(2)A抗体的间接ELISA技术。RA患者血清中抗H_(2)A抗体水平明显高于健康人对照组。抗H_(2)A抗体在RA患者血清中出现可能具有重要的致病意义。
王海永徐敏李晓军
关键词:类风湿关节炎间接酶联免疫吸附试验
间接ELISA检测大鼠血清中抗埃博拉病毒双特异性抗体MBS77E浓度及大鼠体内药代动力学研究被引量:1
2021年
目的建立并验证间接ELISA定量检测大鼠血清中抗埃博拉病毒双特异性抗体MBS77E浓度,并进行大鼠体内药代动力学研究。方15只大鼠随机分为3组,每组5只,分别静脉注射不同剂量(0.5、10.0和50.0 mg·kg^(-1))的MBS77E,不同时间点采血,分离血清,ELISA测定血清中MBS77E浓度。WinNonlin软件计算药代动力学参数,分析药代动力学特征。结果在0.098~12.50μg·mL^(-1),MBS77E质量浓度的对数值与吸光值呈S形曲线;板内精密度在5.3%~11.3%;板间精密度在3.0%~11.1%;该方不受基质干扰,无明显钩状效应,稀释线性、选择性、平行性满足要求,样品冻存至28 d稳定。大鼠静脉注射0.5、10.0和50.0 mg·kg^(-1)的MBS77E后,半衰期分别为(12.82±1.02)、(8.21±3.82)和(8.00±1.02)d,清除率分别为(8.61±0.56)、(8.53±1.69)和(6.60±0.78)mL/(d·kg),表观分布容积分别为(160.28±5.89)、(91.46±13.46)和(93.01±4.15)mL·kg^(-1),药时曲线下面积(AUC)分别为(56.24±3.14)、(1149.07±266.78)和(7504.36±834.36)d·μg·mL^(-1),AUC与剂量成正比,清除率随剂量升高有下降趋势。结论该方符合生物技术药物临床前药代动力学研究指导原则的要求,且获得了MBS77E在大鼠体内的药代动力学特征,为MBS77E的临床研究提供了支持。
相亚楠高尤冯健男张文鹏庄笑梅
关键词:药代动力学
运用双抗原夹心ELISA间接ELISA检测丙型肝炎病毒抗体结果的一致性比较
目的:探讨运用双抗原夹心酶联免疫(ELISA)与间接ELISA检测丙型肝炎病毒(HCV)抗体结果的一致性。  方:收集2018年1月1日至2018年10月31日新疆医科大学第三附属医院行丙型肝炎病毒抗体测定的176...
秦亚娟
关键词:丙型肝炎病毒间接ELISA法抗体检测
文献传递
一种利用间接ELISA检测破伤风抗体效价的检测方
本发明属于生物检测技术领域,具体涉及一种利用间接ELISA检测破伤风抗体效价的检测方。该检测方的试剂盒包括抗原包被板、样品稀释液A、样品稀释液B、酶标记物鼠抗人IgG、底物液、洗涤液、终止液。本发明采用间接检测破...
白毅肖晓刘文娟
文献传递
一种利用间接ELISA检测破伤风抗体效价的检测方
本发明属于生物检测技术领域,具体涉及一种利用间接ELISA检测破伤风抗体效价的检测方。该检测方的试剂盒包括抗原包被板、样品稀释液A、样品稀释液B、酶标记物鼠抗人IgG、底物液、洗涤液、终止液。本发明采用间接检测破...
白毅肖晓刘文娟
文献传递
双抗原夹心间接ELISA在HCV抗体检测中的应用比较被引量:1
2020年
目的探讨双抗原夹心间接酶联免疫吸附试验(ELISA)在丙型肝炎病毒(HCV)抗体检测中的应用价值。方选择2018年1月至2020年1月我院收治的67例疑似丙型肝炎患者,所有患者均行双抗原夹心检测、间接ELISA检测及荧光定量PCR血液筛查,将荧光定量PCR血液筛查结果作为"金标准",分析双抗原夹心检测及间接ELISA检测HCV抗体的诊断价值。结果双抗原夹心检测的准确度(94.03%)、灵敏度(96.08%)均高于间接ELISA检测(82.09%)、(84.31%),差异有统计学意义(P<0.05);双抗原夹心检测的特异度(75.00%)、阳性预测值(92.45%)及阴性预测值(85.71%)略高于间接ELISA检测(75.00%)、(91.49%)、(60.00%),但差异不显著(P>0.05);双抗原夹心检测HCV抗体与荧光定量PCR血液筛查结果具有极好的一致性(Kappa=0.836);间接ELISA检测与荧光定量PCR血液筛查结果具有较为理想的一致性(Kappa=0.546)。结论与间接ELISA相比,双抗原夹心检测HCV抗体具有更高的准确度、灵敏度与特异度,可为临床诊断与治疗提供依据,对控制疾病发展具有重大意义,可作为HCV抗体筛查的首选方式,值得临床推广应用。
刘秋静欧阳玉立
关键词:丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法荧光定量PCR
双抗原夹心间接ELISA在HCV抗体检测中的应用比较被引量:1
2020年
目的探讨双抗原夹心间接酶联免疫吸附试验(ELISA)在丙型肝炎病毒(HCV)抗体检测中的应用价值。方选择2018年1月至2020年1月我院收治的67例疑似丙型肝炎患者,所有患者均行双抗原夹心检测、间接ELISA检测及荧光定量PCR血液筛查,将荧光定量PCR血液筛查结果作为"金标准",分析双抗原夹心检测及间接ELISA检测HCV抗体的诊断价值。结果双抗原夹心检测的准确度(94.03%)、灵敏度(96.08%)均高于间接ELISA检测[(82.09%)、(84.31%)],差异有统计学意义(P<0.05);双抗原夹心检测的特异度(75.00%)、阳性预测值(92.45%)及阴性预测值(85.71%)略高于间接ELISA检测[(75.00%)、(91.49%)、(60.00%)],但差异不显著(P>0.05);双抗原夹心检测HCV抗体与荧光定量PCR血液筛查结果具有极好的一致性(Kappa=0.836);间接ELISA检测与荧光定量PCR血液筛查结果具有较为理想的一致性(Kappa=0.546)。结论与间接ELISA相比,双抗原夹心检测HCV抗体具有更高的准确度、灵敏度与特异度,可为临床诊断与治疗提供依据,对控制疾病发展具有重大意义,可作为HCV抗体筛查的首选方式,值得临床推广应用。
刘秋静欧阳玉立
关键词:丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法荧光定量PCR

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