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口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的克隆与原核表达: 2010年; 以亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)为研究对象,通过逆转录并进行PCR扩增得到非结构蛋白3ABC基因,然后定向克隆到原核表达载体PET-32a,重组质粒PET-3abc转化宿主菌BL21,IPTG诱导表达目的蛋白。表达产物经SDS-PAGE检测,证明重组蛋白PET-32a-3ABC成功在大肠杆菌中表达。以表达产物作为抗原,为鉴别诊断自然感染和免疫动物的方法提供了技术条件。; 张先锋易忠魏玉荣符子华胡尔玛西; 关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白

口蹄疫病毒VP1与3ABC基因片段的克隆及表达被引量：1: 2008年; 根据GenBank中注册的O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1和3ABC基因序列,设计了2对引物.采用RT-PCR方法从FMDV分离株O/HK/2001扩增得到VP1和3ABC基因.经对它们的核苷酸序列测序和同源性比较,显示与14株O型FMDV参考毒株中的O/HKN/2002同源性最高(分别为98.3%和98.6%),并且在VP1决定各种亚型FM-DV免疫原性的主要抗原决定族的144、148、154和208位关键氨基酸,比对均未发现变异.通过酶切将VP1和3ABC基因分别亚克隆到4个表达载体pET-30a、pPROEX HTb、pQE30和pQE9中构成重组表达质粒,利用IPTG诱导表达,经SDS电泳分析表明这些重组质粒在相应表达宿主菌BL21、DH5α和M15中,除pQE30-3ABC和pQE9-3ABC外均获得了表达,其中pET-30a和pPROEX HTb载体表达量较高.; 索青利赵明秋琚春梅陈金顶王伟利陈立军; 关键词：口蹄疫病毒 VP1基因 3ABC基因

口蹄疫病毒3ABC基因截短体在毕赤酵母中的表达及鉴定被引量：3: 2008年; 将长为525bp的口蹄疫病毒3ABC基因截短体克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建了重组表达质粒pPIC9K-3ABCt.用BglⅡ线性化后,电转化毕赤酵母菌GS115,经表型筛选,PCR鉴定,获得阳性重组菌(GS115/pPIC9K-3ABCt).然后进行诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.结果表明,重组菌株成功分泌表达了分子量为40000,具有免疫反应活性,且呈二聚体形式的目的蛋白.在96h时表达量达到最高峰,占分泌总蛋白的18%,达到23.4mg/L.为进一步研制口蹄疫免疫和感染动物鉴别诊断试剂奠定了基础.; 郑敏金宁一李昌鲁会军马鸣潇沈国顺霍晓伟马海利陈晓月屈勇刚; 关键词：3ABC基因毕赤酵母分泌表达诊断抗原

猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3AB和3ABC基因的表达与3AB单克隆抗体的制备: 脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus，EMCV)是一种重要的人畜共患病病原。EMCV感染最广泛和最严重的动物是猪，感染后仔猪可造成急性心肌炎等实质器官的广泛病理损伤甚至发生急性死亡;感染母猪...; 沈芳; 关键词：脑心肌炎病毒非结构蛋白; 文献传递

猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3AB和3ABC基因的表达与3AB单克隆抗体的制备: 摘要脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditisvirus，EMCV）是一种重要的人畜共患病病原。EMCV感染最广泛和最严重的动物是猪，感染后仔猪可造成急性心肌炎等实质器官的广泛病理损伤甚至发生急性死亡；感染母...; 沈芳著

猪捷申病毒中国株3ABC基因的克隆及序列分析被引量：2: 2007年; 根据已报道的Swine/CH/IMH/03基因序列设计1对引物,从已分离的中国株捷申病毒中提取总RNA,经RT-PCR扩增得到3ABC基因.并将该基因克隆到pMD18-T载体中,经序列测序,并与GenBank上的14种毒株序列进行比对.结果表明:猪捷申病株中国株(PTV-3ABC)与F65毒株、PTV-1毒株、Swine/CH/IMH/03毒株和Talfan毒株的同源性比较高,分别为96.5%,99.5%和99.4%分别为99.4%,氨基酸同源性分别为95.6%,98.8%,98.4%和98.8%.系统发育树表明,此中国株捷申病毒属于PTV-1型.; 李娟刘磊冯力; 关键词：猪捷申病毒 3ABC基因同源性

口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因重组杆状病毒的构建与表达被引量：2: 2007年; 通过设计特异引物,扩增获得口蹄疫病毒3ABC编码区的目的基因片段,将其用SalI和NcoI双酶切后,与经同样处理的带有一段信号肽序列的穿梭质粒pMelBac-B连接,经筛选、鉴定及DNA序列分析后,获得重组质粒pMel-3ABC.将重组质粒与线性化的杆状病毒骨架Bac-N-Blue共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了含有目的基因的重组杆状病毒.用重组病毒感染Sf9昆虫细胞,通过间接ELISA方法,检测细胞培养基上清液中表达的口蹄疫病毒抗原.结果表明,口蹄疫病毒基因片段3ABC正确克隆到杆状病毒载体上,重组病毒可在昆虫细胞中表达目的蛋白.; 马江涛卢曾军曹轶梅郭慧琛郭建宏祝秀梅刘在新杨孝朴; 关键词：口蹄疫病毒 3ABC基因杆状病毒 SF9细胞

口蹄疫病毒NSP 3ABC基因在昆虫细胞中的分泌表达及其活性检测被引量：4: 2007年; 用设计的特异引物,扩增得到了N-端带有6×His编码序列的口蹄疫病毒完整3ABC基因序列,并将其亚克隆入带有蜂毒溶血肽序列的穿梭质粒pMelBac-B中,构建了重组质粒pMel-3ABC。将该重组质粒与杆状病毒骨架DNABac-N-BlueTM共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了含有目的基因的重组杆状病毒。重组病毒感染Sf9昆虫细胞,采用通过SDS-PAGE和Western blot检测,证明目的基因在昆虫细胞中得到了正确的表达,表达产物分泌至细胞培养上清中,并具有良好的生物活性。表达的目的蛋白经过镍柱亲和层析法纯化后,用间接ELISA方法检测与口蹄疫病毒感染动物血清的反应性,证明表达目的蛋白与感染动物血清有很好的反应性而与正常动物以及免疫动物血清不发生反应。该研究为建立一种更加敏感和特异的口蹄疫病毒感染动物与疫苗免疫动物的鉴别诊断方法奠定了基础。; 马江涛卢曾军曹轶梅郭慧琛郭建宏祝秀梅杨孝朴刘在新; 关键词：口蹄疫病毒 3ABC基因杆状病毒分泌性表达

口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因在昆虫细胞中的表达与活性检测: 本研究通过杆状病毒表达系统分泌表达了口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth DisaseVirus，FMDV)非结构蛋白(Non-structural protein，NSP)3ABC，用亲和层析方法纯化，获得了高纯度...; 马江涛; 关键词：口蹄疫病毒 3ABC基因杆状病毒分泌表达; 文献传递

口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的原核表达及其产物的活性检测被引量：5: 2006年; 利用分别带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的引物扩增出FMDV 3ABC基因,将其克隆到pMD18-T载体。经BamHⅠ和SalⅠ酶消化后,克隆到表达载体pGEX-6p-1上,构建重组质粒pGEX-3ABC。将该重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21(DE3)pLysS,经终浓度1 mmol/L的IPTG诱导,获得约70 ku的融合蛋白GST-3ABC。Western-blotting结果显示,表达的融合蛋白GST-3ABC可以与感染FMDV的牛血清发生免疫反应。以纯化的GST-3ABC蛋白为抗原的间接ELISA检测结果与以VP2蛋白为抗原的间接ELISA检测结果相比较,表明,融合蛋白GST-3ABC可以用于鉴别感染FMDV和疫苗免疫的牛血清。; 曲哲会王君伟; 关键词：口蹄疫病毒 3ABC基因原核表达

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