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miR-424靶向MEK1对白血病HL-60细胞系增殖、凋亡及阿霉素耐药性的影响被引量:1
2021年
目的探究miR-424对白血病HL-60细胞增殖、凋亡及阿霉素(ADM)耐药性的影响及其可能的作用机制。方法体外培养正常人的外周血单核细胞(PBMC)、人原髓细胞白血病细胞(HL-60),向细胞HL-60转染miR-424阴性对照、miR-424 mimic,将细胞分为空白对照组、NC组和miR-424 mimic组,以PBMC为正常对照组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PBMC及各组HL-60细胞中miR-424、丝裂原活化蛋白激酶激酶1(MEK1)mRNA相对表达水平。CCK8法检测各组HL-60细胞增殖情况。流式细胞术检测各组HL-60细胞凋亡情况。对各组HL-60细胞进行ADM处理,CCK8法检测各组HL-60细胞对ADM敏感性,双荧光素酶报告基因检测miR-424与MEK1的靶向关,蛋白印迹法(WB)检测各组HL-60细胞MEK1、Ki67、Bcl-2、Bax蛋白相对表达水平。结果与正常对照组相比,空白对照组HL-60细胞中miR-424相对表达水平显著降低,MEK1 mRNA相对表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组、NC组相比,miR-424 mimic组HL-60细胞增殖率、ADM IC50、MEK1 mRNA、Ki67、Bcl-2、MEK1蛋白相对表达水平显著降低,miR-424、细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-424 mimic+WT-MEK13'-UTR组的荧光素酶相对活性低于miR-424 NC+WT-MEK13'-UTR组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-424在白血病HL-60细胞中低表达,miR-424过表达可能通过靶向抑制MEK1表达,抑制白血病HL-60细胞增殖、促进凋亡,提高细胞对阿霉素的敏感性。
戴进前倪庆仁张韵洁任婧婧李光张晓波宋艳萍
关键词:增殖凋亡
miR-126 对 HL-60 细胞系增殖和凋亡等生物学行为的影响
2017年
目的观察转染微小RNA(miR)-126 mimics/inhibitor对人类急性早幼粒细胞白血病细胞系(HL-60)增殖与凋亡的影响。方法培养HL-60细胞,RT-PCR测定miR-126相对表达水平,利用瞬时质粒转染技术,转染miR-126 mimics/inhibitor,通过CCK-8,流式细胞技术及克隆形成实验检测HL-60细胞增殖、凋亡能力。结果 miR-126 mimics组0 h、24 h、48 h、72 h细胞增殖能力显著减低(P<0.05);G_1期、S期、G_2期细胞增殖明显受抑制(P<0.05);晚期凋亡及早期凋亡(UR+LR)凋亡率增高(P<0.05);平均克隆形成率显著减低(P<0.05);miR-126 inhibitor组0 h、24 h、48 h、72 h细胞增殖能力明显增强(P<0.05);G_1期、S期、G_2期增殖能力增强(P<0.05);UR+LR明显减低(P<0.05);平均克隆形成率显著升高(P<0.05)。结论 miR-126能够抑制HL-60细胞增殖能力,促进细胞凋亡,可能作为抑癌性的微RNA在白血病的发生发展中发挥作用。
张贺洋张蕊王萍萍王玥王赫李艳
关键词:急性早幼粒细胞白血病
miR-126对Hl-60细胞系增殖,凋亡等生物学行为的初步研究
目的:  微RNA(miRNA)是长度约为21-23核苷酸的核糖核酸分子,属于非编码核糖核酸,广泛存在于真核生物体中。miRNA由DNA转录而来,通过调控靶基因而发挥作用,可呈线性调控或网状调控,机制十分复杂。现已发现,...
张贺洋
关键词:增殖能力免疫调节
RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系的构建被引量:2
2012年
目的利用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术,建立RYBP基因稳定沉默的HL60细胞系。方法设计针对RYBP基因的5条短发夹状RNA(shRNA)序列,构建RYBPshRNA慢病毒重组载体,分别包装成慢病毒颗粒,直接感染HL-60细胞,同时设空载体和阴性对照shRNA慢病毒对照组。通过观察绿色荧光蛋白表达以监测感染效率,经嘌呤霉素(终质量浓度8μg/ml)筛选出稳定感染细胞。Westernblot实验初步鉴定出蛋白水平最低的RYBPshRNA组,用实时定量聚合酶链反应(PCR)进一步检测该组细胞mRNA表达水平。结果慢病毒感染的HL-60细胞经嘌呤霉素筛选成功,与对照组比较,5条RYBPshRNA组细胞RYBP表达均有不同程度减低(P〈0.01),其中以shRNA2沉默效果最佳,且shRNA2组的RYBP基因mRNA水平降低了95%以上(P〈0.05)。结论慢病毒介导的shRNA2能高效、稳定地沉默RYBP基因的表达,成功构建了RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系
周家砚邓晖王春丽张玉平应逸许艳丽王顺清
关键词:短发夹状RNAHL-60细胞慢病毒属RNA干扰
广枣黄酮槲皮素和山萘酚促人白血病HL-60细胞系凋亡及其机制探讨
2010年
本研究旨在探讨广枣黄酮主要成份槲皮素及山萘酚的抗白血病作用及其可能的作用机制。采用MTT法测定槲皮素及山萘酚对HL-60细胞的增殖抑制作用;用流式细胞术检测药物对HL-60细胞周期的影响及其诱导凋亡作用;通过Western blot观察药物诱导的HL-60细胞凋亡中survivin蛋白表达情况。结果表明,槲皮素及山萘酚对HL-60细胞的增长有显著的抑制作用,并呈浓度和时间依赖性(槲皮素相关数r=0.77,山萘酚相关数r=0.76)。给药后HL-60细胞发生G2/M期阻滞和凋亡。药物诱导HL-60细胞survivin蛋白表达下调。结论:广枣黄酮的主要成份槲皮素及山萘酚有明显的抗白血病作用,且槲皮素诱导凋亡作用强于山萘酚。其作用机制可能是通过抑制细胞增殖、细胞周期阻滞、抑制survivin蛋白而诱导细胞凋亡。
任慧娟郝洪军石永进孟学敏韩艳秋
关键词:槲皮素山萘酚HL-60细胞系细胞凋亡
NPCEDRG基因对HL-60细胞系生长增殖的影响
刘菊林
文献传递
8-硝基白杨素抑制HL-60细胞系增殖及促凋亡被引量:1
2009年
目的观察8-硝基白杨素(NOChR)抑制人急性髓性白血病细胞系HL-60细胞增殖和诱导凋亡作用。方法用MTT法检测HL-60细胞增殖活性;台盼蓝染色细胞计数法测定细胞存活率,绘制细胞生长曲线;DNA凝胶电泳观察HL-60细胞凋亡;流式细胞术检测HL-60细胞凋亡率。结果NOChR对HL-60细胞增殖具有抑制作用,呈浓度依赖性;NOChR显著抑制HL-60细胞生长;NOChR能有效地诱导HL-60细胞凋亡,呈浓度依赖性。结论NOChR具有抑制HL-60细胞增殖和诱导细胞凋亡作用。
岳军伍石华
关键词:白杨素8-硝基白杨素
RNAi表达载体干扰四型肽精氨酸脱亚氨基酶基因在HL-60细胞系中的表达被引量:2
2008年
目的:设计针对PADI-4基因的RNAi表达载体,抑制PADI-4基因在HL-60细胞中的表达,初步确定PADI-4基因在类风湿性关节炎发生发展中的作用,为后续研究奠定实验基础。方法:设计并合成4对针对PADI-4基因编码区的核苷酸链,核苷酸链经体外退火后形成双链SiRNA,克隆进入pSiRNA-hH1neo G2空载体后转化入GT116细胞,通过蓝白斑筛选后,挑取白斑进行扩增,抽提质粒并对重组质粒进行双酶切分析。以脂质体转染法,分别将pSiRNA-hH1neo G2空载体和4个重组质粒载体转染进入HL-60细胞系,于转染的第3、5、7、10、14天后收集细胞,抽提细胞总RNA后,反转录成cDNA,用Real-time PCR技术检测各实验组HL-60细胞内PADI-4基因mRNA水平的表达情况,并做统计分析。结果:经Acc65Ⅰ和HindⅢ双酶切鉴定,重组质粒中已经插入目的片段,为合格质粒;转染pSiRNA表达载体后,HL-60细胞系中PADI-4基因mRNA表达水平下降,其中以第3号载体的干扰效果最优,干扰效率达到62%。结论:成功构建针对PADI-4基因的pSiRNA表达载体,并且筛选出干扰效率最好的载体,为后续研究PADI-4基因在类风湿性关节炎中的作用奠定实验基础。
张慧范列英卢天宝宗明吕红根杨蔺
关键词:SIRNARNA干扰HL-60细胞系
二烯丙基二硫诱导HL-60细胞系凋亡及其与Caspase-3的关被引量:1
2008年
目的研究二烯丙基二硫(DADS)诱导白血病细胞凋亡及其机制。方法实验分对照组、DADS处理组、Ac-DEVD-CHO预处理组,进行体外细胞培养,采用形态学观察、MTT法、流式细胞术、DNA凝胶电泳等方法,进行细胞形态学观察、细胞增殖抑制作用研究,检测细胞凋亡率、Caspase-3活性以及DNA Ladder检测。结果DADS诱导前后,HL-60细胞形态学发生明显改变,DADS以剂量依赖的方式抑制细胞的生长,在DADS诱导HL-60细胞凋亡过程中有Caspase-3的活化,且与剂量和作用时间呈依赖关,Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO能抑制DADS诱导HL-60细胞凋亡。结论DADS能有效地诱导HL-60细胞凋亡,其过程与Caspase-3活化相关。
易岚苏琦李国庆秦志峰贺庆芝刘运莲殷杰杨露青
关键词:人白血病细胞二烯丙基二硫凋亡CASPASE-3
Tet调控BCR/ABL融合基因表达HL-60细胞系和小鼠模型的实验研究
慢性髓细胞性白血病(Chromc myelogenous leukemia,CML)最大的细胞遗传学特点是存在特异性的Ph染色体,即9号染色体上的原癌基因c-abl和22号染色体的断点集中区(bcr)易位形成分子量210...
董小兵
关键词:慢性髓细胞性白血病BCR-ABLHL-60细胞系
文献传递

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孙立荣
作品数:312被引量:633H指数:12
供职机构:青岛大学
研究主题:儿童 白血病 急性淋巴细胞白血病 治疗儿童 白血病患儿
陈瑞环
作品数:4被引量:0H指数:0
供职机构:北京师范大学
研究主题:HL-60细胞系 甲基化 基因组文库 片段 人胃癌
张洹
作品数:320被引量:869H指数:13
供职机构:广东工业大学
研究主题:间充质干细胞 分化 SIRNA 白血病 白血病细胞
赵玉红
作品数:4被引量:1H指数:1
供职机构:四川大学华西医学中心
研究主题:一氧化氮 HL-60细胞系 白血病细胞 一氧化氮供体 HL-60细胞分化
王伯瑶
作品数:195被引量:576H指数:13
供职机构:四川大学华西基础医学与法医学院
研究主题:基因表达 防御素 抗菌肽 抗菌活性 分离纯化