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表达varIBDV VP2基因的重组Meq基因缺失马立克氏病病毒株及其构建方法与应用: 本发明公开了一种表达varIBDV VP2基因的重组<I>Meq</I>基因缺失马立克氏病病毒株及其构建方法与应用。所述的重组<I>Meq</I>基因缺失马立克氏病病毒株是利用重组克隆技术，将包含CMV启动子序列、var...; 高玉龙陈运通刘长军祁小乐张艳萍刘永振王素艳崔红玉段雨路

宁都黄鸡马立克氏病的诊断及其病毒meq基因克隆及序列分析: 2024年; 【目的】为诊断江西宁都某鸡场黄鸡发病原因。【方法】通过病理剖检、PCR检测确诊该鸡场黄鸡患马立克氏病,并对该病毒meq基因全序列进行PCR扩增、克隆、测序和序列分析。【结果】病鸡表现“劈叉”神经症状,剖检结果发现病鸡的心脏、肝脏和脾脏等器官表面均出现大小不一的灰白色结节,腺胃糜烂、出血。PCR鉴定结果为马立克氏病病毒(marek’s disease virus,MDV)阳性,随后对MDV的meq基因进行了扩增、克隆和测序,MDV meq基因全长为1020bp。与参考毒株相比,核苷酸和氨基酸同源性分别为98.8%~99.8%和97.1%~99.7%,存在9个氨基酸突变位点,其中有3段4-脯氨酸(PPPP)重复序列,2段发生(PPPP-PR/APP)氨基酸突变。【结论】该毒株与近年国内强毒株或超强毒株在同一分支上,且氨基酸突变基本相同,推测该分离毒株毒力至少为强毒株。研究为临床马立克氏病诊断提供理论依据,为分析MDV变异提供重要参考。; 吴虹瑾黄曼孜胡煜吴欢生高晓娜郭小权谢华丽; 关键词：马立克氏病病毒 MEQ基因遗传进化

马立克病病毒meq基因缺失毒株HN302Δmeq的构建及致病性分析: 2024年; 马立克病(MD)是由马立克病病毒(MDV)感染引起的一种重要的家禽免疫抑制病与肿瘤病,严重危害世界养禽业。随着MDV持续进化及毒力增强,急需研发新型高效的MD疫苗以加强该病的有效防控。本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以MDV变异株HN302为亲本毒株,成功构建了meq基因缺失的毒株HN302Δmeq,经过PCR扩增鉴定及测序分析,证实meq基因缺失且传代稳定。间接免疫荧光试验(IFA)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析均证实HN302Δmeq感染鸡胚成纤维细胞(CEF)中无meq基因表达,并且meq基因的缺失不影响其他病毒基因的表达。利用RT-qPCR分析HN302Δmeq在CEF中的体外增殖曲线,结果显示meq基因的缺失不影响MDV体外复制。1日龄SPF鸡攻毒试验结果显示,与亲本毒株HN302相比,HN302Δmeq对宿主无致病性,其诱导的MD发病率、死亡率和肿瘤发生率均为0,且未观察到明显的免疫器官萎缩。上述数据表明,HN302Δmeq的毒力明显丧失,具备继续作为疫苗候选株开展相关研究的可能性。本研究成功构建了MDV变异株HN302的meq基因缺失毒株,为后续MDV的致病机制及新型疫苗研究奠定了基础。; 张志会滕蔓刘金玲郑鹿平王伟东张文凯张多李林燕张卓柴书军柴书军罗俊; 关键词：马立克病病毒 MEQ基因

一株马立克病病毒特超强变异株meq基因编辑缺失候选疫苗毒株的构建与鉴定: 2024年; 马立克病(MD)是由马立克病病毒(MDV)感染引起的一种重要的家禽免疫抑制病与肿瘤病,该病可用疫苗进行预防和控制,但在长期免疫压力下MDV的毒力持续增强,经典MD疫苗已难以对当前流行的特超强MDV(HV-MDV)变异株提供良好的免疫保护,亟需研发新一代MD高效疫苗。本文以HV-MDV变异株HNSQ01为亲本毒株,在CEF上连续传代之后,利用CRISPR/Cas9系统对其meq基因进行编辑,通过一系列试验鉴定和分析,最终建立一株meq基因编辑缺失的MD疫苗候选毒株,命名为SQ01Δmeq。1日龄SPF鸡攻毒试验结果显示,在77 d试验周期内,亲本毒株HNSQ01不仅严重抑制感染鸡生长并导致免疫抑制,而且导致100%的MD发病率、100%致死率及80%的肉眼观察肿瘤发生率;但SQ01Δmeq未引起感染鸡的生长及免疫抑制,而且MD发病率、致死率及肿瘤发生率均为0%,表明其对宿主无致病性,生物安全性良好。本研究建立的meq基因编辑缺失MDV毒株SQ01Δmeq,为后续研发新型高效的MD疫苗奠定了重要基础。; 张多滕蔓张卓刘金玲郑鹿平各思雨韩放罗琴柴书军柴书军余祖华赵东; 关键词：马立克病 MDV MEQ 新型疫苗

马立克病病毒特超强变异株meq基因缺失株构建及作为疫苗候选株的鉴定: 2024年; 马立克病(Marek’s disease,MD)是一种严重危害家禽健康养殖的免疫抑制病与肿瘤病,由致病性的血清1型MDV(Marek’s disease virus serotype 1,MDV-1)毒株感染引起。近年来,即使在已接种疫苗的鸡群中,MD病例的发生及危害在全球范围内仍呈不断上升趋势。此前研究发现,经典的MD疫苗已不能很好保护当前流行的MDV特超强毒株,尤其是新出现的特超强MDV(Hypervirulent MDV,HV-MDV)变异株,这意味着新一代高效的MD疫苗亟待研发。本研究中,以近期最新分离鉴定的HV-MDV变异株SDCW01为亲本毒株,首先将其在鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblast,CEF)上连续传代以降低对宿主潜在的免疫抑制性,然后利用基于CRISPR/Cas9系统的基因编辑技术敲除致瘤基因meq,构建meq基因编辑缺失的疫苗候选毒株。经过PCR扩增鉴定、病毒克隆纯化、DNA测序、间接免疫荧光试验(IFA)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及病毒体外增殖曲线测定等试验,证实获得一株meq基因完全缺失的MDV毒株,命名为SD01△meq。进一步传代培养及PCR鉴定结果显示,SD01△meq传代稳定性良好,meq基因的编辑缺失未发生回复突变,且不影响其它MDV基因的表达及体外复制能力。1日龄SPF鸡攻毒实验结果显示,与亲本毒株SDCW01相比,SD01△meq完全丧失了对宿主的免疫抑制和致病性,其诱导的MD发病率、致死率及肿瘤率均为0%。上述数据表明,本研究成功构建获得了一株meq基因编辑缺失疫苗候选毒株SD01△meq,为后续新型高效MD疫苗的研发奠定了重要基础。; 张卓樊剑鸣滕蔓张多刘金玲郑鹿平赵东赵东韩放罗琴柴书军罗俊; 关键词：马立克病病毒 MEQ基因新型疫苗

表达varIBDV VP2基因的重组Meq基因缺失马立克氏病病毒株及其构建方法与应用: 本发明公开了一种表达varIBDV VP2基因的重组Meq基因缺失马立克氏病病毒株及其构建方法与应用。所述的重组Meq基因缺失马立克氏病病毒株是利用重组克隆技术，将包含CMV启动子序列、varIBDV VP2基因及终止子...; 高玉龙陈运通刘长军祁小乐张艳萍刘永振王素艳崔红玉段雨路

鸡马立克病毒meq基因克隆及遗传进化分析实验设计: 2023年; 该文设计了一个涉及兽医传染病学、兽医分子生物学等兽医学科专业的探索性实验——鸡马立克病毒meq基因克隆及遗传进化分析实验。实验内容包括通过全自动核酸提取仪、荧光定量PCR仪对鸡组织病料中马立克病毒核酸进行检测,在确定病毒核酸阳性的基础上通过分子生物学手段扩增特征毒力基因meq序列,通过与Genbank已报道的30多株参考毒株序列进行比对,分析该病例马立克病毒的分子特征及遗传进化特点。该实验可锻炼学生的实验动手能力,加深对兽医学相关内容的理解,激发对专业知识的兴趣。; 羊扬王瑽瑢邵季闫彩虹闫彩虹; 关键词：马立克病毒 MEQ基因

基于CRISPR/Cas9系统的马立克病病毒meq基因缺失毒株的构建和鉴定: 目的：　　血清1型马立克病病毒(Marek''s disease virus serotype 1,MDV-1)具有致瘤性，关键致瘤基因为meq基因，可引起T细胞淋巴瘤为主要症状的马立克病(Marek''s diseas...; 张志会; 关键词：马立克病病毒 MEQ基因生物学特性

一例鸡马立克氏病的诊断及其病毒Meq基因序列分析被引量：1: 2023年; 为确定四川省乐山市某蛋鸡场病鸡的发病原因,该试验采用临床剖检、PCR方法对发病鸡进行诊断,并对病毒Meq基因全序列进行PCR扩增、测序和序列分析。剖检结果为病鸡心脏、肝脏和脾脏表面均有白色结节,PCR鉴定结果为马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)阳性。MDV Meq基因全序列长度均为1020bp,核苷酸和氨基酸同源性分别为99.6%~99.9%和98.8%~100%,与MDV参考序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.4%~99.8%和95.9%~99.4%。4个Meq测序序列存在4个新的氨基酸突变位点,均具有D80Y、V115A、T139A、P176R和P217A氨基酸突变位点,符合MDV强毒株的序列特征。系统发育树显示4株乐山市分离毒株测序序列与近年国内大部分参考毒株聚在同一分支上,亲缘关系较近,未形成明显的地理分支,乐山MDV样品132bp重复序列的拷贝数及Meq基因的变异均符合MDV强毒株的序列特征,且存在新的氨基酸突变。; 郝桂英徐媛占爱思韦汉群; 关键词：马立克氏病病毒 MEQ基因

利用CRISPR/Cas9 基因编辑系统构建MDV 疫苗株rMDV-LTR 的Meq基因缺失株及Knock-in 平台的条件摸索: 马立克氏病（Marek’sdisease，MD）是由马立克氏病病毒（Marek’sdiseasevirus，MDV）引起的一种在家禽中广泛存在的、具有高度传染性的鸡淋巴增生性疾病。MDV主要导致鸡T细胞淋巴瘤，同时伴随着...; 张秀梅; 关键词：马立克氏病病毒重组疫苗 MEQ基因

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