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一种牛病毒性腹泻病毒N蛋白及其作为自我切割蛋白的应用: 本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种牛病毒性腹泻病毒N蛋白及其作为自我切割蛋白在制备基因工程蛋白中的应用。本发明首先意外发现了一种具有自我切割蛋白活性的牛病毒性腹泻病毒N蛋白，所述牛病毒性腹泻病毒N蛋白在大肠杆菌中...; 高闪电邵军军刘伟常惠芸周广青郭慧琛

猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立: 2024年; 为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白多克隆抗体,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,通过PCR扩增N蛋白基因,将N蛋白基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-N。将重组质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞中,通过IPTG诱导N蛋白表达,将纯化后的重组N蛋白免疫小鼠,获得N蛋白多克隆抗体。将纯化后的N蛋白作为抗原,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,并评估该方法的特异性、重复性和准确性。结果表明,表达的重组N蛋白呈可溶性,制备的N蛋白多克隆抗体ELISA效价能达到1∶2048000,IFA和Western blot结果表明制备的鼠多克隆抗体能特异性识别PRRSV N蛋白。建立的间接ELISA方法特异性良好,重复性试验变异系数均小于10%,且与同类型商品化试剂盒结果比较,符合率达到91.10%,可为PRRSV N蛋白的免疫学检测和结构功能的研究提供参考。; 覃建光姚静刘文波刘嘉琪陈国昌任同伟陈樱欧阳康欧阳康韦祖樟; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白原核表达间接ELISA

抗新型冠状病毒N蛋白单域抗体、融合蛋白及其编码基因和应用: 本发明公开了抗新型冠状病毒N蛋白单域抗体、融合蛋白及其编码基因和应用。本发明通过免疫羊驼构建抗体基因库，筛选得到抗新型冠状病毒N蛋白单域抗体N1D12，其3个互补决定区的氨基酸序列分别为SEQ IDNO.1‑.3所示。本...; 胡容李胜华高天万前胡笳泠

一种SARS-CoV-2 N蛋白特异单链抗体、融合蛋白及其应用: 本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种SARS‑CoV‑2N蛋白特异单链抗体、融合蛋白及其应用。本发明提供了一种SARS‑CoV‑2N蛋白特异单链抗体，所述抗体包括依次连接的抗体重链可变区V<Sub>H</Sub>、连...; 胡祖权曾柱闫瑜雪尚国富洪亮汪建满

一种高表达禽传染性支气管炎N蛋白的细胞株及其构建方法: 本发明提供了一种高表达IBV‑N蛋白的细胞株及其构建方法，所述高表达IBV‑N蛋白的细胞株为基因组中整合有IBV‑QX(SD)‑N基因的哺乳动物细胞，所述IBV‑QX(SD)‑N基因通过慢病毒导入哺乳动物细胞。本发明的高...; 廖瑛廖慧钰丁铲孙英杰仇旭升谭磊宋翠萍

赤羽病病毒N蛋白原核表达及单克隆抗体的制备被引量：1: 2024年; 为制备赤羽病病毒(akabane virus,AKAV) N蛋白的单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),本研究利用原核表达系统表达了AKAV N蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞,采用间接酶联免疫吸附方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)筛选获得阳性杂交瘤细胞。经3次亚克隆筛选得到两株特异性针对AKAV N蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为2C9与5E9。通过ELISA、免疫印迹(Western blotting)、间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)对其进行鉴定。结果显示,成功筛选到特异性针对AKAV N蛋白的单克隆抗体。IFA发现其与AKAV N蛋白具有良好的反应性,亚型鉴定试剂盒鉴定2C9 mAb重链为IgG2b型,轻链为κ链;5E9 mAb重链为IgG1型,轻链为κ链;ELISA检测效价均为1:4 096 000。本研究成功制备了两株特异性针对AKAV N蛋白的单克隆抗体,为赤羽病诊断方法的开发、疾病的防控以及AKAV N蛋白功能的研究奠定了基础。; 林永玉石正旺罗俊聪朱昱茜席韬周静张帆石鑫泰王川田宏; 关键词：赤羽病病毒 N蛋白原核表达单克隆抗体

猪德尔塔冠状病毒N蛋白原核表达及其多克隆抗体制备: 2024年; 【目的】构建猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)核衣壳(N)蛋白原核表达系统并制备多克隆抗体,为新型疫苗、诊断试剂研发及PDCoV致病机制的深入研究提供基础。【方法】提取PDCoV HeN17株RNA,经RT-PCR扩增,将N基因克隆至pGEX-6P-1载体构建重组原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并进行IPTG诱导表达。利用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化重组蛋白,采用3C蛋白酶去除标签。以纯化后的N蛋白为免疫原免疫3月龄新西兰大白兔制备多克隆抗体,采用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定抗体效价,并通过Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)和免疫沉淀(IP)试验对其进行鉴定。【结果】成功构建原核表达载体pGEX-6p-1-PDCoV-N,获得的PDCoV-N-GST重组蛋白主要以可溶性形式表达,大小约69 kD,经去除GST标签可获得单一目的蛋白条带,经测定蛋白浓度为12.6 mg/mL,获得的PDCoV-N蛋白能与PDCoV阳性血清反应产生单一特异性条带。制备的兔源抗PDCoV-N多克隆抗体效价达1∶4096000,可特异性识别pCAGGS-Flag-N转染HEK-293T细胞中表达的Flag-N蛋白和PDCoV感染LLC-PK1细胞中表达的PDCoV-N蛋白,且能检测到PDCoV-N真核表达载体pCAGGS-Flag-N转染HEK-293T细胞中表达的PDCoV-N蛋白。【结论】成功构建高效PDCoV-N原核表达系统,获得纯度好、浓度高且免疫原性佳的PDCoV-N蛋白,制备的兔源抗PDCoV-N多克隆抗体效价高,具有较强亲和力和特异性,可用于Western blotting、IFA和IP检测。; 赵梓桥张昆丽张春红翟少伦康欣桐黄淑坚张建峰; 关键词：N蛋白原核表达多克隆抗体

表达猪流行性腹泻病毒N蛋白Vero细胞系的构建及初步鉴定: 2024年; 【目的】构建表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白的Vero细胞系,将有助于PEDV的进一步深入研究。【方法】本研究将N基因克隆到慢病毒载体中,构建重组质粒pLenti-CMV-N,利用慢病毒载体包装系统转染293T细胞,包装表达N蛋白的慢病毒颗粒,将慢病毒颗粒转导至Vero细胞,用潮霉素B初步筛选阳性细胞,采用终点稀释法,筛选表达PEDV N蛋白的Vero细胞系,最后进行鉴定。【结果】RT-PCR结果表明构建的细胞系基因组中存在N基因序列,Western blot和IFA试验验证了N蛋白在细胞系中的表达。【结论】本研究成功构建了表达PEDV N蛋白的Vero细胞系。; 卢峥朴赵平陈樱韦祖樟韦祖樟欧阳康; 关键词：PEDV N蛋白细胞系慢病毒载体

基于N蛋白小反刍兽疫病毒单克隆抗体的制备及阻断ELISA方法的建立: 2024年; 为建立一种小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体的快速检测方法,本研究将pET-32a-N重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达、纯化获得重组蛋白并免疫BALB/c小鼠,制备了抗PPRV-N蛋白的单克隆抗体并进行HRP标记,通过优化反应条件建立了PPRV阻断ELISA抗体检测方法。经评价该方法与PIV、GTPV、ORFV的阳性血清均无交叉反应;最低能检出1∶160稀释的阳性血清;批内和批间变异系数(Cv)均小于10%;通过对180份临床血清样品进行检测,该方法与竞争ELISA试剂盒的符合率为96%。表明建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性、敏感性与可重复性,可用于PPRV抗体的检测,为PPRV疫苗的免疫效果评估及疫病防控提供了技术支持。; 孟卫芹董帅陈金龙唐娜石竞楠郭璐宋晶晶王金良; 关键词：小反刍兽疫 N蛋白阻断ELISA

一种能降解新冠病毒N蛋白的短肽及其应用: 一种能降解新冠病毒N蛋白的短肽，它是通过在一个淀粉样肽中放入两个APR(aggregation‑prone region)，在两个APR中间由一个连接物隔开，在两个APR的两端添加有带负电荷的天冬氨酸残基(asparta...; 郝冰涛杨怡婷薛伟秦利涛

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