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一种核糖体识别基序pIRES及其介导的环形RNA的翻译: 本发明属于生物信息学和分子生物学领域，具体涉及一种核糖体识别基序pIRES、及其介导的环形RNA的翻译及应用。本发明提供了一种核糖体识别基序pIRES的算法，并提供了一组核糖体识别基序pIRES，所述pIRES基序能够介...; 戴东升卫帅

新型基因治疗载体pIRES-Rsirt2/4-Tet-nap的制备方法及应用: 本发明公开了一种pIRES‑Rsirt2/4‑Tet‑nap重组质粒，其沿载体转录方向依次连接有R‑Sirt2基因、IRES序列、R‑Sirt4基因、HSV TK polyA序列...; 孙晗笑利时雨

时间修辞与亚洲书写:《东方志》的政治宇宙学被引量：2: 2021年; 葡萄牙在16世纪初期首次远遣多默·皮列士前往亚洲,《东方志》就是此次出使的官方报告,它在一定程度上呈现了欧洲真正介入印度洋中心的国际贸易体系之前的亚洲知识状况。《东方志》里面有两种时间,即作为表述主体的叙事者与葡萄牙国王共享的“普遍性的时间”,以及为这个时间框架所封存的亚洲—印度洋时间。《东方志》的文本呈现了一个基督圣徒在与其国王陛下讲述其在亚洲各个不同的地理区域获得的世俗知识的情景。这个讲述过程使原本神圣的宗教时间世俗化为“普遍性的时间”。因此,《东方志》中的叙事者既是在空间中旅行,也是在时间中旅行,更是在观念中旅行。随着叙事者的步履迁移,有关亚洲的世俗知识得以累积,欧洲完成现代的蜕变。异域旅行就成为世俗朝圣。表面上,亚洲的时间与叙述者和国王共享的“普遍性时间”一致;实际上,这个现在时态的诅咒把亚洲社会静态化了。亚洲被“普遍性时间”涂抹上了防腐剂,像处理标本那样冻结并封存。这种时间操纵有效地把欧洲叙事者从亚洲景观中分离出来,知识在福柯式的“图表”中得以分配、安置并秩序化,文化的距离就诞生了,从而凸显了时间的空间化意义。这种时间修辞的操纵,最重要的效果之一就是设定了亚洲与欧洲在文本中的非共时性关系,亚洲被冻结在叙事者的讲述中,仅作为欧洲时空的参照而永恒存在。《东方志》的“政治宇宙学”中暗隐着早期近代欧洲异域知识和世界意识的生产机制。; 周云龙

一种双基因共表达质粒pIRES2-Nrf2-DKK1及其制备方法和应用: 本发明公开了一种双基因共表达质粒pIRES2‑Nrf2‑DKK1。所述质粒包含原始表达载体pIRES2‑zsGreen，Nrf2和DKK‑1基因的CDS序列；所述质粒全长7151bp，其序列如SEQ ID NO：1所示，...; 肖佳刘映霞陈凤何留民; 文献传递

新型基因治疗载体pIRES-Rsirt2/4-Tet-nap的制备方法及应用: 本发明公开了一种pIRES‑Rsirt2/4‑Tet‑nap重组质粒，其沿载体转录方向依次连接有R‑Sirt2基因、IRES序列、R‑Sirt4基因、HSV TK polyA序列...; 孙晗笑利时雨; 文献传递

应用pIRES2-EGFP表达载体快速建立Hela细胞稳转细胞系: 2019年; [目的]探索应用pIRES2-EGFP表达载体快速建立Hela细胞稳转细胞系的筛选方法。[方法]EcoRⅠ和Bam HⅠ双酶切,T4 DNA连接酶连接构建目的基因p IRES2-EGFP表达载体并测序确定,Lipofectamine3000转染Hela细胞分为Mock组(未转染组)、NC组(p IRES2-EGFP空载对照组)、重组质粒转染组,转染后24 h消化细胞进行初步筛选(900μg/m LG418),转染后14~16 d将长至肉眼可见的细胞克隆全部重新消化进行二次筛选(方法同初步筛选),转染后28~32 d挑选3个肉眼可见的细胞克隆,实时荧光定量PCR和WB检测目的基因过表达效率。[结果]双酶切及测序确定重组质粒成功构建,与Mock组相比,NC组无明显变化,重组质粒转染组各克隆目的基因mRNA水平分别升高109±8. 3、127±10. 5、122±9. 1倍,P <0. 01,蛋白水平分别升高33±3. 3、45±4. 7、47±4. 9倍,P <0. 01。[结论]该筛选方法 28~32d左右可快速建立Hela细胞稳转细胞系,过表达效率高,可直接进行后续实验。; 徐宏罗思凡罗思琛周颖欣谷夏斐康海仙; 关键词：HELA细胞

pIRES-PML-RARα-IFN-γ重组质粒体外表达检测: 2018年; 目的:检测pIRES-PML-RARα-IFN-γ重组质粒在真核细胞中的表达情况,为急性早幼粒细胞白血病DNA疫苗的研发提供资料。方法:将构建成功的pIRES-PML-RARα-IFN-γ重组质粒转染A549细胞株,提取总RNA,逆转录合成c DNA,采用RT-PCR法检测PML-RARα和IFN-γ基因的表达情况。提取转染后A549细胞的上清液采用Western blot和ELISA法检测PML-RARα和IFN-γ蛋白的表达情况。结果:RT-PCR结果证明转染了重组质粒的A549细胞的c DNA中含有相应的目的基因。ELISA和Western blot结果表明,重组质粒能够在A549细胞中表达出相应的目的蛋白。结论:pIRESPML-RARα-IFN-γ重组质粒能够在真核细胞中进行正常的转录及翻译。; 胡刚胡刚李扬秋; 关键词：PML-RARΑ IFN-Γ 早幼粒细胞白血病 DNA疫苗

pIRES2-EGFP-prnd真核表达载体的构建及其在BHK细胞中的表达: 2018年; 为探讨叠朊蛋白(Doppel)在正常生理条件及相关疾病中的临床及生物学意义,构建BALB/c小鼠Doppel基因prnd的重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-prnd,并转染BHK细胞,IFA检测其表达情况。结果表明,Doppel蛋白通过pIRES2-EGFP-prnd在BHK细胞中表达。试验可为进一步研究Doppel蛋白的结构、正常的生理生化功能及其与相关疾病的关系提供重要工具。; 程艳芬程艳芬宁章勇冯翠萍赵孟孟安玉甫; 关键词：真核表达载体转染 IFA

人重组真核表达质粒pIRES-骨形态发生蛋白-血管内皮生长因子165的体外转染对兔骨髓间充质干细胞成骨分化的影响被引量：3: 2018年; 目的观察人重组真核表达质粒pIRES-骨形态发生蛋白2（BMP2）-血管内皮生长因子165（VEGF165）的体外转染对兔骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法以原代分离的兔骨髓间充质干细胞为研究对象，在脂质体的介导下将重组质粒pIRES-BMP2-VEGF165转染至细胞中，采用G418体外筛选稳转细胞株，且在mRNA和蛋白水平上分别检测转染效果。继续培养稳转细胞株，细胞分：空质粒pIRES组、pIRES-BMP2-VEGF165转染组以及成骨诱导剂组；采用Western blot分别检测培养7d和21d后各组细胞Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）和骨钙素（OCN）蛋白表达水平；培养14d后，采用Gomori改良钙钴法染色检测碱性磷酸酶活性；培养21d后，采用茜素红法钙质染色检测各组细胞钙化结节情况。结果与空质粒pIRES组比较，pIRES-BMP2-VEGF165质粒组细胞在mRNA和蛋白水平上均检测到骨形态发生蛋白2和VEGF165的表达；与空质粒组及成骨诱导剂组比较，重组质粒pIRES-BMP2-VEGF165组细胞ColⅠ和OCN蛋白的表达水平均显著提升（ColⅠ：0．597±0．040比0．230±0．020，P=0．000；0．597±0．040比0．457±0．035，P=0．005：OCN：0．433±0．038比0．083±0．021，P=0．000；0．433±0．038比0．350±0．036，P=0．046）；碱性磷酸酶染色阳性区域占比均显著增加I（69．000±5．568）％比（18．333±3．056）％，P=0．000；（69．000±5．568）％比（43．333±5．508）％，P=0．002]，钙化结节阳性区域占比均明显增加[（37．747±3．763）％比（1．587±0．972）％，P=0．000；（37．747±3．763）％比（19．330±4．033）％，P=0．008]。结论人重组真核表达质粒pIRES-BMP2-VEGF165成功转染至兔骨髓间充质干细胞，且与成骨诱导剂比较，重组质粒pIRES-BMP2-VEGF165对该细胞的成骨分化能力有更明显的促进作用。; 肖飞焦竞黄玉成徐海军左伟王俊文; 关键词：骨髓间充质干细胞体外转染骨形态发生蛋白2 血管内皮生长因子165

真核表达载体pIRES2-AcGFP1-PLIN2的构建及其在3T3-L1前脂肪细胞中的表达被引量：1: 2018年; 构建pIRES2-AcGFP1-PLIN2真核表达载体,并观察其在3T3-L1前脂肪细胞中的转染状况。采用分子克隆技术,将PLIN2基因连接到p MD18-T载体中做Eco RⅠ/Sal I双酶切,将酶切产物回收并将双酶切后的目的片段与pIRES2-AcGFP1载体连接,转入DH5α感受态细胞,并提取pIRES2-AcGFP1-PLIN2阳性重组质粒,转染到3T3-L1前脂肪细胞,显微镜观察转染情况。本研究成功克隆出了PLIN2基因,同时成功构建了pIRES2-AcGFP1-PLIN2真核表达载体,并在3T3-L1前脂肪细胞中成功表达,于显微镜下观察到绿色荧光,试验为进一步研究PLIN2基因对脂肪细胞的调控机理奠定了基础。; 赵小琪黄英杨明华潘洪彬赵素梅; 关键词：乌金猪真核表达载体

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