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布鲁氏菌利福平耐药株rpoB基因突变特征分析
2024年
目的分析布鲁氏菌利福平耐药株rpoB基因突变特征。方法选取分离自新疆维吾尔自治区的4株布鲁氏菌利福平耐药株(JSY-26、G-9、WSY-13、AW-3株)DNA,采用PCR扩增利福平rpoB基因,并对核苷酸序列进行测序。以布鲁氏菌利福平耐药标准株(RB51株)和利福平敏感株(ALT-8株)的rpoB基因序列为参照,应用Mega 7.0软件比对分析4株布鲁氏菌利福平耐药株rpoB基因利福平耐药决定区(rifampicin resistance determination region,RRDR)内外的碱基突变位点及类型。结果经序列比对分析,JSY-26和WSY-13株均在rpoB基因RRDR 1576 bp处发生单碱基点突变,碱基由鸟嘌呤(guanine,G)突变为腺嘌呤(adenine,A);G-9株在rpoB基因RRDR 1606 bp处发生单碱基点突变,碱基由胞嘧啶(cytosine,C)突变为A。AW-3株在rpoB基因RRDR外2536、2537、2626、2636、2654 bp处出现3种类型共5处突变,分别为插入突变3处[胸腺嘧啶(thymine,T)插入1次、C插入2次],缺失突变1处(C缺失),单碱基点突变1处(由G突变为C)。结论布鲁氏菌利福平耐药株rpoB基因RRDR突变以单碱基点突变为主,RRDR外则出现多位点插入和缺失突变
郑莹马晓菁刘丽娅叶锋谷文喜易新萍
关键词:布鲁氏菌利福平耐药RPOB基因
西安地区256例Gene Xpert MTB/RIF阳性肺结核患者rpoB基因突变特征分析
2024年
目的分析西安地区256例利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Gene Xpert MTB/RIF)阳性肺结核患者rpoB基因突变特征。方法本研究为回顾性分析。256株结核分枝杆菌(MTB)菌株分离自2020年6月至2022年6月于陕西省结核病防治院就诊的Gene Xpert MTB/RIF阳性肺结核门诊及住院患者,菌株无重复收集,来自痰液标本174份、支气管肺泡灌洗液标本82份,患者年龄(45.67±8.36)岁。采用DNA直接测序法对256株利福平耐药MTB菌株rpoB基因的PCR产物进行分析。将256株利福平耐药MTB菌株根据利福平耐药程度分为低、中、高耐药MTB菌株,采用χ^(2)检验比较3种菌株突变位点。人工诱导3株利福平耐药MTB菌株,采用DNA直接测序法对其rpoB基因的PCR产物进行分析。结果测序报告显示,256株利福平耐药MTB菌株中有253株发生rpoB基因位点突变,突变率为98.83%(253/256)。突变类型包括C→T、T→G、C→G、A→T、C→A、A→G、G→A、G→T、T→C、A→C共计10种,涉及丝氨酸、亮氨酸、丙氨酸、组氨酸、酪氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、甘氨酸共14个氨基酸密码子,均为点突变。利福平耐药菌株突变主要集中在531位[53.75%(136/253)]、526位[23.32%(59/253)],其他位点包括513、516、533、515、513、532、522、511、519、518、533。高耐药MTB菌株531位氨基酸突变发生率与低、中耐药MTB菌株比较[66.91%(91/136)比37.88%(25/66)、37.04%(20/54)],差异有统计学意义(χ^(2)=22.154,P<0.001);低、中耐药MTB菌株531位氨基酸突变发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。低、中、高耐药MTB菌株526位氨基酸突变发生率比较[22.73%(15/66)、25.93%(14/54)、22.06%(30/136)],差异无统计学意义(χ^(2)=0.331,P=0.847)。人工诱导的3株利福平耐药MTB菌株均发生rpoB基因位点突变,低、中耐药MTB菌株突变均位于526位点,高耐药MTB菌株突变位于531位点�
崔尖贺志清
关键词:利福平耐药RPOB基因突变特征
结核分枝杆菌利福平耐药影响因素及rpoB基因突变位点分析被引量:1
2024年
目的研究结核分枝杆菌利福平耐药的影响因素及rpoB基因突变频率和分布,分析耐药决定区(RRDR)的突变特征,为耐利福平结核病流行趋势、预防控制和治疗提供可靠的实验室依据。方法选取2019年3月—2021年12月在阜阳市第二人民医院就诊的312例肺结核患者,经Xpert MTB/RIF、液体药敏检测,将156例利福平耐药的肺结核患者作为耐利福平组,156例非耐药的肺结核患者作为普通组,分析两组患者的一般资料及rpoB基因突变情况。结果在312例肺结核患者中,耐利福平组的有合并症、复治患者、自行服药、不规范服药、治疗中断及不了解传染途径显著高于普通组,差异均有统计学意义;经Logistic回归分析,有合并症、复治患者是利福平耐药的危险因素;156例耐利福平标本中,单基因突变有152例(97.44%),双基因突变4例(2.56%),单基因突变最高的是ProbeE,其次是ProbeD;双基因突变依次是D+E、A+B;在初复治组间,ProbeE有统计学意义(χ^(2)=3.97,P<0.05),其他均无统计学意义;耐多药118例突变位点占比最高是ProbeE,其次是ProbeD;单耐利福平38例,突变位点占比从高到低是ProbeE、ProbeD;4例双基因突变均是MDR-TB;MDR-TB与RR-TB之间突变位点差异均无统计学意义。结论对有合并症、复治患者的肺结核病患者应加以关注,应及时干预以降低利福平耐药的概率;耐利福平患者中,rpoB基因突变主要是单探针突变,与耐多药患者的rpoB基因突变位点并无差异。
刘海清张威
关键词:结核分枝杆菌利福平基因突变
针对结核分枝杆菌rpoB基因突变的CRISPR-Cas12检测方法及应用
本发明提供一种CRISPR‑Cas12突变耐药基因检测方法及应用,适用于结核分枝杆菌耐药基因附近存在天然PAM的基因位点,包括用于结核分枝杆菌耐药基因高效扩增的巢式PCR引物组和sgRNA。本CRISPR‑Cas12体系...
黄晓颖 郑瑞轩
慢性阻塞性肺疾病合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因突变分析被引量:1
2023年
目的研究慢性阻塞性肺疾病(COPD,简称慢阻肺)合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因和其突变。方法选择经结核分枝杆菌ropB基因检测阳性患者221例,其中慢阻肺合并初治菌阳肺结核患者94例,单纯初治菌阳肺结核患者127例,对两组患者结核分枝杆菌基因(利福平耐药)进行回顾性研究。结果慢阻肺合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因菌株(利福平耐药)21例,占比22.3%,利福平敏感73例,占比77.7%;单纯初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因菌株(利福平耐药)15例,占比11.8%,利福平敏感112例,占比88.2%;两组对比差异有统计学意义(P<0.05),慢阻肺合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因(利福平耐药)率高于单纯初治菌阳肺结核组;各组不同性别利福平耐药率比较差异无统计学意义(P>0.05);各组不同年龄段基因(利福平耐药)率比较差异无统计学意义(P>0.05),但慢阻肺合并初治菌阳肺结核组在50~59岁及年龄≥70岁年龄段基因(利福平耐药)率较高,分别为33.3%、28.9%。单纯初治菌阳肺结核组以年龄<20岁利福平耐药率较高,占比28.6%。结论肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因突变是导致利福平耐药的原因之一,慢阻肺合并初治菌阳肺结核患者结核分枝杆菌rpoB基因突变率(利福平耐药)高于单纯初治菌阳肺结核患者;各组患者基因突变率(利福平耐药)与性别无关,慢阻肺合并初治菌阳肺结核患者年龄越高,利福平耐药率越高。
蒋学峰杨继黎吕菊芬焦晓高小娜张冰美魏建华
关键词:利福平耐药
四川地区结核分枝杆菌katG、inhA和rpoB基因突变位点耐药水平及突变频率特征分析被引量:5
2022年
目的分析基因芯片法(芯片法)检测结核分枝杆菌(Mtb)katG、inhA和rpoB基因突变位点耐药水平、突变频率特征,为临床治疗提供参考依据。方法选取成都市公共卫生临床医疗中心2020年1月—2021年1月收治的四川地区结核病患者118例Mtb分离株,芯片法通过katG、inhA和rpoB基因突变位点检测异烟肼(H)和利福平(R)耐药基因,微孔板比例法(比例法)通过培养+药物敏感性试验检测表型耐药水平,分析基因突变位点与耐药水平关系及突变频率分布特点。结果 H、R耐药株的耐药水平高,耐药相关基因的高耐药率为83.53%(71/85)、77.78%(77/99),基因突变位点与耐药水平关系密切,katG、inhA单基因突变位点的H高耐药率为92.96%(66/71)、30.77%(4/13),两者有统计学差异(χ^(2)=26.28 P<0.05)。rpoB单基因突变位点中rpoB531、rpoB526、rpoB533/516/513/511位点的R高耐药率为93.88%(49/49)、81.82%(18/22)、37.50%(9/24),三者有统计学差异(χ^(2)=29.17 P<0.05)。H耐药相关基因以katG315单基因突变为主,突变形式为(AGC→ACC) Ser→Thr(S315T),突变频率84.43%(71/85);R耐药相关基因以rpoB531单基因突变为主,突变形式为RRDR-531(TCG→TTG) Ser→Leu,突变频率49.50%(49/99)。结论四川地区H、R耐药株的耐药水平高。katG、rpoB531/526与H、R高耐药水平有关,inhA、rpoB511/513/516/533与H、R低耐药水平有关。katG315、rpoB531是H、R耐药相关基因突变的主要形式,临床使用抗结核药物须密切结合药敏检测制定方案。
陈蕾
关键词:结核分枝杆菌耐药
番鸭源鸭疫里默氏杆菌的耐药性及rpoB基因突变分析被引量:4
2021年
【目的】了解福建省莆田市番鸭源鸭疫里默氏杆菌的耐药性及rpoB基因突变情况。【方法】无菌采集病死番鸭的脑、心脏、肝脏进行细菌分离纯化,提取分离株基因组DNA,利用16S rDNA基因特异性引物进行PCR鉴定,纸片法进行药敏试验,扩增并分析rpoB基因利福平耐药决定区序列。【结果】共分离到49株鸭疫里默氏杆菌,这些菌株均表现广谱耐药性,耐药谱介于11~21种药物,分离株对氨基糖苷类、大环内酯类、复方新诺明、多黏菌素B和利福平等药物的耐药性高,对四环素类、β-内酰胺类和氟苯尼考等药物的敏感性高。44株利福平耐药菌的rpoB基因出现R494K(43/44)单点突变和R494K和V382I(1/44)的双点突变,R494K单点突变也在1株利福平敏感菌中发现。【结论】近期防治鸭传染性浆膜炎可首选四环素类、β-内酰胺类和氟苯尼考等药物,利福平耐药决定区氨基酸的R494K单点突变可能是鸭疫里默氏杆菌对利福平耐药的主要机制之一。
林彬彬谢碧林王秀祯翁汉东程龙飞傅光华刘荣昌林志敏
关键词:鸭疫里默氏杆菌耐药性RPOB基因
Xpert MTB/RIF对结核菌利福平耐药的诊断价值及rpoB基因突变特点的分析被引量:8
2021年
目的分析Xpert MTB/RIF检测对结核分枝杆菌利福平耐药的诊断价值及rpoB基因突变特点。方法回顾分析2016年1月至2020年6月期间来院就诊患者相同标本,同时进行了结核分枝杆菌培养及药敏试验和Xpert MTB/RIF检测,且任一种方法检出MTB。结果用Xpert MTB/RIF及培养药敏两种方法检测标本共7659例,Xpert MTB/RIF对MTB的检出率高,且有统计学意义(P<0.05)。两种方法同时检出MTB 3621例,Xpert MTB/RIF检出利福平耐药262例,培养药敏检出利福平耐药238例;两种方法检测利福平耐药的一致率为99.01%;采用Kappa检验,两种方法的检测结果完全符合。RR-TB探针突变的频率为E探针63.37%、D探针20.16%、B探针8.23%、A探针4.53%、C探针0.82%、联合探针突变2.88%;以培养药敏结果为利福平耐药的金标准,Xpert无探针突变组利福平耐药的准确性要明显低于有探针突变组;初治和复治病例探针突变频率差异有统计学意义。结论Xpert MTB/RIF检测可以快速有效的诊断利福平耐药结核,有助于早发现、早治疗。利福平耐药结核探针突变主要发生在E探针和D探针,C探针突变最少。
高春景杨洋阚宗卫成松魏素梅胡凯
关键词:结核分枝杆菌耐药
结核分枝杆菌rpoB基因突变和利福平耐药水平相关研究被引量:2
2020年
目的研究结核分枝杆菌rpoB基因突变和利福平耐药水平之间的相互关系。方法对39株分离株进行rpoB基因测序和利福平最小抑菌浓度(MIC)测定,并用fisher精确概率法分析对不同rpoB突变类型与利福平MIC的相关性进行分析。结果39株利福平耐药菌株均存在rpoB基因错义突变。531位密码子是最常见的突变类型,84.6%(33/39)的利福平耐药菌株在该位点存在突变。统计学fisher精确概率法分析表明利福平在531位突变和高浓度耐药相关。结论基于rpoB基因测序有助于对利福平耐药进行预测。
郑丹薇石洁苏茹月朱岩昆马晓光王少华孙定勇李辉
关键词:结核分枝杆菌利福平耐药RPOB基因
探针导向重组酶介导等温扩增法检测MTB rpoB基因突变的应用价值
2020年
目的建立可快速检测MTB rpoB基因516位点突变的探针导向重组酶介导等温扩增法(probedirected recombinase amplification,PDRA)。方法设计4条探针[1条野生型探针(P-W)及3条突变型探针(P-GGC、P-GTC、P-TAC)]和1条共同的下游引物,分别构建TB-516-W、TB-516-GGC、TB-516-GTC和TB-516-TAC4种检测体系,在39℃条件下恒温扩增40 min。通过阳性阈值时间判定MTB rpoB基因516位点是否发生突变及其突变类型;通过同一探针检测对应的重组质粒确定该检测体系的敏感度;通过不同探针检测某一种重组质粒,根据阳性阈值时间确定该检测体系的特异度。应用建立的PDRA方法检测6株利福平耐药MTB菌株和35份MTB培养阳性的痰标本,并与一代测序结果进行比较。结果 4种检测体系检测对应重组质粒的敏感度为1000拷贝/μl。4种检测体系的特异度良好,探针与靶序列完全匹配时,阳性阈值时间早;探针与靶序列不完全匹配时,阳性阈值时间晚,具有稳定的阳性阈值时间差值,体系TB-516 W,TB-516-GGC,TB-516-GTC和TB-516-TAC的阳性阈值时间差值分别为7.0、5.8、10.0、7.0 min。PDRA检测6株MTB利福平耐药菌株和35份MTB培养阳性痰标本的结果与测序结果一致。结论本研究初步建立了可应用于MTB利福平耐药rpoB基因516位点突变检测的PDRA方法,该方法检测敏感度高,特异度好,具有一定的实验室应用价值。
李鑫娜申辛欣王瑞白段素霞张瑞卿王瑞欢白雪丁凡国豪王金荣高源陈子巍马学军
关键词:核酸扩增技术重组酶

相关作者

姜广路
作品数:116被引量:767H指数:15
供职机构:首都医科大学附属北京胸科医院
研究主题:结核 结核分枝杆菌 分枝杆菌 微生物敏感性试验 结核病
郭艳玲
作品数:57被引量:115H指数:5
供职机构:首都医科大学附属北京胸科医院
研究主题:结核分枝杆菌 结核 IS6110 SPOLIGOTYPING RPOB基因突变
刘洋
作品数:119被引量:315H指数:9
供职机构:首都医科大学附属北京胸科医院
研究主题:结核分枝杆菌 结核 肺癌 肺结核 分枝杆菌
黄海荣
作品数:263被引量:767H指数:15
供职机构:首都医科大学附属北京胸科医院
研究主题:结核分枝杆菌 分枝杆菌 结核 非结核分枝杆菌 微生物敏感性试验
李传友
作品数:317被引量:586H指数:11
供职机构:首都医科大学附属北京胸科医院
研究主题:结核分枝杆菌 结核病 分枝杆菌 结核 北京基因型