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刚地弓形虫表面抗原相关序列蛋白SRS40E的生物信息学分析: 2025年; 旨在探究刚地弓形虫表面抗原相关序列蛋白SRS40E的结构功能以及其作为抗弓形虫疫苗的候选分子的潜力。通过NCBI数据库下载表面抗原相关序列蛋白SRS40E的基因序列和氨基酸序列,通过ORFfinder网站联合GENSCAN网站对其基因序列进行ORF分析,氨基酸序列依次通过Prot Param、Expasy-ProtScale、TMHMM、SignalP-4.1、SOPMA、SWISS-MODEL、IEDB、SYFPEITHI、VaxiJen 2.0程序对SRS40E蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜结构、信号肽、空间结构、磷酸化位点、抗原表位进行分析预测。结果:表面抗原相关序列蛋白SRS40E的基因序列全长1 627 bp,由396个氨基酸组成,理论分子量是42 204.65,等电点为7.87,分子式为C_(1818)H_(2951)N_(513)O_(600)S_(19),不稳定指数为47.19,脂溶性指数为72.73,亲水性总平均值为-0.314,预测显示为亲水性蛋白;该蛋白没有信号肽,具有跨膜结构;在二级结构中,α-螺旋占比18.94%、β-转角占比2.53%、β-折叠占比20.71%、无规则卷曲占比为57.83%;有53个磷酸化位点,其中30个丝氨酸磷酸化位点,22个苏氨酸磷酸化位点,1个酪氨酸磷酸化位点;有18个抗原决定簇,8个优势B细胞表位,8个优势辅助性T细胞(Th)细胞表位和2个优势细胞毒性T淋巴细胞(CTL)细胞表位。综上,表面抗原相关序列蛋白SRS40E包含多个B、T细胞表位,可作为弓形虫疫苗的候选蛋白。; 马文宇陈晓晓易婷婷李宏伟杜孟泽李秋明尹德琦; 关键词：刚地弓形虫生物信息学

弓形虫表面主要抗原1(SAG1)蛋白的原核表达与鉴定: 2024年; 为了实现弓形虫主要表面抗原1(surface antigen 1,SAG1)蛋白在原核表达系统中的高效表达,试验根据GenBank中弓形虫SAG1基因序列(登录号为S76248.1)及大肠杆菌密码子偏好性对目的基因序列进行优化设计,以pET-32a(+)为表达载体构建重组表达质粒pET32a(+)-SAG1,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)对重组菌进行诱导,表达重组蛋白,通过优化诱导条件实现对重组蛋白的大量表达,使用NGC^(TM)层析纯化系统纯化重组蛋白,并分别以抗His标签单克隆抗体和犬弓形虫阳性血清作为一抗、羊抗鼠IgG-HRP和HRP-兔抗犬作为二抗对重组蛋白进行Western-blot鉴定。结果表明:重组表达质粒pET32a(+)-SAG1经双酶切分别在5 900 bp和1 020 bp处出现1条载体条带和1条目的基因条带,与预期结果相符;重组蛋白大小为55 ku且以包涵体的形式成功表达,当诱导条件为25℃、0.4 mmol/L IPTG诱导8 h时重组蛋白的表达量最高;纯化后的重组蛋白条带单一,纯度较高,3个样品质量浓度分别为0.409 5,0.368 5,0.451 9 mg/mL;表达的重组蛋白与抗His标签单克隆抗体和犬弓形虫阳性血清均能特异性结合。说明在大肠杆菌中成功表达了弓形虫SAG1重组蛋白,纯化后的重组蛋白纯度和质量浓度较高,且具有良好的反应原性。; 代琴骆璐董春霞凌洪权吴胜昔曾政秦萍韦广苗; 关键词：弓形虫 SAG1 原核表达蛋白免疫印迹

SAG1蛋白突变体及其制备方法和应用: 本发明涉及蛋白质技术领域，特别涉及SAG1蛋白突变体及其制备方法和应用。本发明提供了SAG1蛋白突变体及其制备方法，以及SAG1蛋白突变体在制备IgM检测试剂盒、IgG检测试剂盒或弓形虫疫苗中的应用。本发明通过定向突变N...; 李桂林柴丹丹张春鸽赵枭阳李婷吕委赵巧辉付光宇杨增利吴学炜

弓形虫SAG1单克隆抗体的制备及其生物传感器的初步研究: 弓形虫病（Toxoplasmasis）是由刚地弓形虫（Toxoplasmagondii，TG）引起的一种人畜共患寄生虫病，会严重危害人类身体健康。弓形虫病的分布范围极为广泛，在我国各地区均有弓形虫感染的相关报道。有数据显...; 代琴; 关键词：弓形虫单克隆抗体电化学生物传感器

弓形虫SAG1、ROP18真核表达载体的构建及在诱导小鼠保护性免疫中的作用研究: 2023年; 目的观察弓形虫速殖子表面抗原1(SAG1)、棒状体蛋白18(ROP18)真核表达载体单独及联合使用诱导BALB/c小鼠的保护性免疫作用。方法制备重组真核表达质粒p3×FLAG-Myc-CMV TM-24-SAG1,p3×FLAG-Myc-CMV TM-24-ROP18及空质粒p3×FLAG-Myc-CMV TM-24(空载体),以磷酸盐缓冲液(PBS)稀释至1μg/μL。将102只BALB/c小鼠随机分成6组,每组17只,前4组分别注射PBS(PBS对照组)、空载体(空载体对照组)、SAG1载体(SAG1组)、ROP18载体(ROP18组)各100μL,其余两组均注射SAG1与ROP18对半混合载体,分别注射量为200μL(全量混合组)、100μL(半量混合组),每组间隔2周免疫1次,共免疫3次。末次免疫4周后,各组随机取7只小鼠,无菌条件下取脾,流式细胞术检测小鼠脾脏CD4^(+)、CD8^(+)T细胞亚群分布,荧光定量PCR分析各组小鼠脾细胞中细胞因子白细胞介素(IL)-4、IL-12、干扰素γ(IFN-γ)的表达;每组其余10只小鼠腹腔接种1×103个弓形虫速殖子,观察各组小鼠的生存时间。结果各组小鼠脾脏CD4^(+)T细胞比例差异无统计学意义(P>0.05);与PBS对照组比较,SAG1组、ROP18组、全量混合组、半量混合组、空载体对照组CD8^(+)T细胞比例明显升高(P<0.01),半量混合组较其他组更高(P<0.05)。半量混合组、全量混合组CD4^(+)/CD8^(+)较两对照组(PBS对照组和空载体对照组)降低,差异有统计学意义(P<0.05)。全量混合组、半量混合组小鼠脾细胞中IL-12、IFN-γ相对表达水平与两对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),且半量混合组IFN-γ相对表达水平与ROP18组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但各组间IL-4相对表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。弓形虫速殖子攻击感染小鼠试验中两单基因疫苗组(SAG1组和ROP18组)、全量混合组、半量混合组均较两对照组生存时间延长(P<0.05),且半量混合组较全量混合组生存时间也显著延长(P<0.01),但全量混合组与两单基因疫苗组差异无统计学意义(P>0.05); 吴腊梅彭天丽何雁鸿董成林杨慧健; 关键词：刚地弓形虫 DNA疫苗

刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗的构建及SRS29C与SAG1联合免疫保护性比较研究: 刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是寄生在细胞内的寄生原虫,能感染除红细胞以外的所有有核细胞,弓形虫病是一种传染性强,流行范围广的机会性寄生虫病。弓形虫发育史复杂、各阶段间的形态不同、宿主范围广,不同阶段的...; 叶建军; 关键词：弓形虫核酸疫苗 SAG1 重组质粒联合免疫

弓形虫特异性SAG1、GRA7、BAG1蛋白在动物弓形虫病血清学诊断中的应用研究: 弓形虫病是一种由专性细胞内寄生性原虫弓形虫（Toxoplasmagondii）引起的人畜共患疾病，在人类和动物中广泛流行。弓形虫病的诊断和区分急性或慢性弓形虫感染对人类和动物至关重要。本研究利用弓形虫不同阶段的特异性Tg...; 祁通生; 关键词：弓形虫血清学诊断家畜养殖

刚地弓形虫SRS29C核酸疫苗的构建及SRS29C与SAG1联合免疫保护性的比较研究被引量：1: 2023年; 为了探究刚地弓形虫表面蛋白(surface antigen,SAG)SRS29C基因和SRS29C、SAG1联合基因的核酸疫苗对小鼠急性感染弓形虫的免疫保护效果,试验利用PCR方法扩增了SRS29C基因片段并将其克隆至真核表达载体pEGFP-N1中,构建重组质粒pEGFP-SRS29C,并对该质粒进行酶切鉴定,同时用该质粒对HEK293T细胞进行转染,再用Western-blot方法检测目标蛋白在细胞中的表达情况;用重组质粒pEGFP-SRS29C和pEGFP-SAG1单独免疫或联合免疫小鼠,用ELISA法测定血清IgG水平,CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖能力,流式细胞仪测定CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞百分比,ELISA试剂盒检测脾脏细胞因子的表达情况;进行小鼠体内攻虫试验,记录小鼠存活时间。结果表明:成功构建了重组质粒pEGFP-SRS29C,表达的蛋白质大小为66 ku;pEGFP-SRS29C组和联合免疫组与PBS组和空载体组相比血清IgG含量、脾淋巴细胞增殖率、CD4^(+)/CD8^(+)值均显著提高(P<0.05);pEGFP-SRS29C组和联合免疫组γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量明显提高;联合免疫组诱免疫球蛋白G(IgG)、IFN-γ和TNF-α含量均高于pEGFP-SRS29C组和pEGFP-SAG1组。PBS组和空载体组小鼠存活8~9 d;pEGFP-SRS29C组小鼠存活(18.10±1.37)d,pEGFP-SAG1组小鼠存活(21.20±0.97)d,联合免疫组小鼠存活(24.20±1.72)d,极显著长于PBS组和空载体组(P<0.01)。说明单独使用构建的弓形虫核酸疫苗pEGFP-SRS29C或与pEGFP-SAG1联合使用能够诱导小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,增强小鼠抵抗弓形虫感染的能力,并且SRS29C作为保护性抗原与SAG1联合免疫的效果更好。; 叶建军田静高传亮闫安叶利颖王宇冰宋淇淇; 关键词：弓形虫核酸疫苗 SAG1 重组质粒联合免疫

弓形虫新的表面抗原SRS20A的鉴定及特征化被引量：1: 2023年; 克隆弓形虫上海SHR株SRS20A基因,构建原核表达体系,通过诱导表达和蛋白纯化,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,对蛋白进行特征化鉴定。采用PCR技术扩增弓形虫SRS20A基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠埃希菌(E.coli),IPTG诱导目的蛋白表达,采用镍亲和层析法获得纯化蛋白并免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,使用弓形虫阳性血清检测SRS20A蛋白的反应原性,应用纯化的rSRS20A蛋白通过ELISA方法对猪临床样品进行检测,利用Western blot技术检测多克隆抗体与弓形虫天然蛋白的反应性,通过间接免疫荧光观察SRS20A蛋白在虫体内的定位情况。成功从弓形虫基因组中扩增出SRS20A目的基因,构建了pET-30a-SRS20A重组质粒,利用小鼠感染弓形虫的阳性血清可以特异性识别重组蛋白rSRS20A,ELISA试验表明rSRS20A可以与猪临床血清特异性反应,证明SRS20A具有良好的反应原性。制备并获得了抗SRS20A重组蛋白的多克隆抗体,通过Western blot可检测出弓形虫天然蛋白SRS20A的特异性条带。通过间接免疫荧光方法鉴定SRS20A蛋白定位在弓形虫速殖子表面。通过分子生物学方法鉴定及特征化了一个新的弓形虫速殖子表面抗原SRS20A,为进一步深入研究弓形虫SRS20A功能奠定基础。; 林晓幸李威曹杰周勇志王亚楠周金林张厚双; 关键词：弓形虫

基于新孢子虫rSRS2-SAG1-GRA7融合蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用: 新孢子虫是一种顶复亚门寄生虫,终末宿主为犬科动物,多种动物均可作为其中间宿主。新孢子虫能够引起犬和多种动物的神经和繁殖系统障碍,对牛的危害最为严重,由新孢子虫病引起的母牛流产给世界范围内的养牛业造成巨大的经济损失。因此建...; 杨传银; 关键词：新孢子虫融合蛋白间接ELISA

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