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SOX12基因在Vero细胞感染猪流行性腹泻病毒过程中的功能研究: 2025年; [目的]探究SOX12基因对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)复制的影响,以期为抗PEDV育种提供有效分子标记。[方法]本研究合成3条SOX12基因干扰序列(siRNA1、siRNA2、siRNA3)及其阴性对照(siNC)并转染至非洲绿猴肾细胞(Vero细胞),转染48 h后收集细胞,利用实时荧光定量PCR检测干扰效率。将有效的干扰片段和siNC分别转染至Vero细胞24 h后,用感染复数为0.05的PEDV感染细胞,分为4组:感染PEDV 12 h试验组(12 hpi-siRNA)、感染PEDV 12 h对照组(12 hpi-siNC)、感染PEDV 24 h试验组(24 hpi-siRNA)及感染PEDV 24 h对照组(24 hpi-siNC),利用实时荧光定量PCR检测PEDV N及SOX12基因的表达水平,通过Western blotting检测各组细胞PEDV N蛋白表达水平,利用组织半数感染量(50%tissue culture infective dose, TCID_(50))检测PEDV的病毒滴度,并利用间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay, IFA)法检测各组细胞中PEDV复制情况。通过GeneMANIA网站预测SOX12基因的互作基因,利用实时荧光定量PCR检测抑制SOX12基因表达后其互作基因的表达变化。[结果]SOX12基因3条干扰片段的干扰效率为30%~60%,其中siRNA3干扰效率最高,可达60%。与12 hpi-siNC和24 hpi-siNC组相比,12 hpi-siRNA和24 hpi-siRNA组PEDV N基因的转录和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。病毒滴度表型测定结果表明,12 hpi-siRNA和24 hpi-siRNA组的PEDV病毒滴度显著低于各自对照组(P<0.05);IFA结果也表明,12 hpi-siRNA和24 hpi-siRNA组的PEDV复制明显少于对照组。基因互作预测及实时荧光定量PCR检测结果显示,与siNC组相比,干扰SOX12基因的表达后,其互作基因SOX17、DDX51、ZMIZ2、SSRP1、TAF6和ABCB8的表达水平均显著降低(P<0.05)。[结论]本研究揭示了SOX12基因在PEDV感染Vero细胞过程中的调控作用,发现SOX12基因的下调表达能显著抑制PEDV复制和其互作基因SOX17、DDX51、ZMIZ2、SSRP1、TAF6和ABCB8的表达。; 向娇娇元娜李慧慧邵明珠赵福平张龙超王立贤石丽君陈斌; 关键词：VERO细胞基因干扰

冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)在10~17岁健康人群中的免疫原性与免疫持久性研究: 2025年; 目的评价冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)在10~17岁健康人群中的免疫原性和免疫持久性,并与18~60岁成人组相比较。方法选取浙江省绍兴市上虞区和嵊州市作为研究现场,于2021年7月—2022年11月期间开展研究。分别采用Zagreb(2-1-1)和Essen(1-1-1-1-1)方案接种狂犬病疫苗。采集免疫前后不同时间点的血清样本,比较10~17岁和18~60岁年龄组在抗体阳性率和几何平均浓度(geometric mean concentration,GMC)方面的差异。结果共纳入1200例10~60岁的健康受试者,其中10~17岁157例(13.1%),18~60岁1043例(86.9%)。两组受试者在全程接种后3、6和12个月时的血清阳性率均接近100%,且同一年龄组的受试者在抗体水平上比较接近。抗体GMC在接种后逐步升高,并在14 d达到峰值。10~17岁受试者在首剂接种后14 d的抗体GMC高于18~60岁组,差异有统计学意义(Zagreb方案:81.85 IU/ml vs 63.15 IU/ml,t=2.411,P=0.018;Essen方案:86.61 IU/ml vs 69.24 IU/ml,t=3.906,P<0.001)。全程接种后14 d和全程接种后3个月的抗体GMC同样呈现这一差异,但是这种差异在全程接种后6和12个月逐渐减小并消失。结论在接种后1年内,冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)在所有受试者中均展现出持久的免疫保护,2种接种方案上无显著差异。10~17岁受试者相较于18~60岁成人展现出更高的抗体水平,但两年龄组在免疫持久性方面无显著差异。; 梁贞贞沈钰钢胡晓松邢博张鑫培陈颖萍毛昱吕华坤; 关键词：狂犬病疫苗 VERO细胞未成年人免疫效果

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)病毒灭活验证方法的建立及验证: 2025年; 目的建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)病毒灭活验证方法,并进行方法学验证。方法将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒进行系列梯度稀释,分别接种于Vero细胞,进行2次盲传扩增,观察细胞病变情况。对该方法的最低检测限及细胞对病毒的敏感度进行摸索,并对该方法的精密度(重复性和中间精密度)和适用性进行验证。结果建立的病毒灭活验证方法对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒的检测限分别为-2、-1、0 lgCCID_(50)/mL。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒对Vero细胞的最小接种浓度均为2 lgCCID_(50)/mL,在第7天均可观察到Vero细胞病变,即该细胞的敏感度为2 lgCCID_(50)/mL。同一检验人员重复检测同一批样品6次结果一致;2名检验人员在不同时间重复检测同一批样品6次结果一致;样品在-70℃及以下存放7 d与未冻存的样品检验结果一致;分别对生产过程中产生的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型单价灭活病毒液及原液各3批进行病毒灭活验证,取样当天和在-70℃及以下存放7 d后检验的样品的灭活验证检验结果一致,表明该方法的精密度和适用性均较好。结论Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)病毒灭活验证方法能有效检测样品的灭活状态,可用于对病毒灭活效果的评价及工艺过程中对中间品等关键步骤的监控。; 申瑷琳金玉翠罗敏李季陈思丁斐唐微潘俊杰潘恺王书畅郭思远罗志宇施金荣; 关键词：病毒灭活检测限精密度

一种新型冠状病毒无血清Vero细胞灭活疫苗及其制备方法: 本发明公开了一种新型冠状病毒无血清Vero细胞灭活疫苗及其制备方法，所述制备方法包括如下步骤：细胞复苏、细胞扩增、种子批制备、生物反应器细胞培养、病毒培养、病毒收获液灭活、澄清、超滤浓缩、酶切、分子筛层析、半成品配制、分...; 吴季南李举薛凤波储明磊胡德东曹金良李加乐

口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗(Vero细胞)病毒滴度工作参考品的研制: 2025年; 目的建立口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗(Vero细胞)病毒滴度工作参考品,标定工作参考品范围并考察其稳定性。方法采用Ⅲ期临床试验用批次原液制备6个血清型病毒滴度工作参考品,使用荧光灶试验标定各血清型工作参考品范围,研究新旧参考品的同质性,并考察各血清型参考品在不同条件的稳定性。结果建立的轮状病毒G1、G2、G3、G4、G8、G9血清型工作参考品的病毒滴度标定范围分别为7.5~8.7、6.4~7.8、6.6~7.8、6.4~7.6、7.1~8.3、7.2~8.4 lg荧光灶单位/mL。用新旧参考品进行滴度测定的同一样品,各血清型滴度结果变异系数<5%且差异无统计学意义。各血清型轮状病毒工作参考品在2~8℃和25℃条件下分别储存至7 d稳定性良好;在37℃条件下,工作参考品可以储存3~7 d;在冻融2次条件下,参考品稳定性良好;在长期稳定性考察中,-60℃储存至18个月稳定性良好,实验间变异系数<5%,病毒滴度均在标定范围内。结论建立并确认标定范围的口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗(Vero细胞)病毒滴度工作参考品,在不同条件下具有良好的储存稳定性,能够保证检测结果的一致性。; 邹文琪王梅珂周蓉程小玲姜志军白萱石晨郭旭梦李榆杨孙露钟守红石艳红何亮申瑷琳罗敏; 关键词：轮状病毒参考品

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)中游离甲醛含量柱前衍生-高效液相色谱检测方法的建立及验证: 2025年; 目的建立Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)中游离甲醛含量柱前衍生-高效液相色谱检测方法,并进行验证及应用,以期为测定疫苗中游离甲醛含量提供新的方法。方法样品用2,4-二硝基苯肼衍生后,经C18色谱柱(5μm,120?,4.6 mm×250 mm)分离,分别对检测波长、流动相比例、流速、衍生时间、温度、缓冲液和衍生容器等检测条件进行优化,并对方法进行专属性、线性、重复性、准确性、检测限和定量限、耐用性验证。采用优化的方法检测20批脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)中游离甲醛含量。结果色谱条件:以乙腈∶水体积分数70∶30为流动相,流速0.6 mL/min,波长352 nm进行测定;衍生条件:加入2,4-二硝基苯肼乙腈溶液0.5 mL和pH 5.0的缓冲液0.25 mL,60℃水浴20 min。该色谱分离条件能够有效分离2,4-二硝基苯肼及甲醛衍生物,且乙醛对测定结果无影响;甲醛标准品浓度在0.05~100μg/mL范围内与峰面积线性关系良好,r为0.9999;重复性试验中6次检测结果的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.36%;9份加标供试品溶液甲醛含量回收率在102.0%~107.0%之间;检出限和定量限分别为0.025和0.05μg/mL;样品衍生后48 h能够稳定存在,耐用性较好。同一批次样品结果重复性较好,甲醛含量在4.5~9.9μg/剂之间。结论建立的方法具有测定范围宽、线性好、准确性高等优点,能够对Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)中游离甲醛进行准确定量,可作为疫苗产品游离甲醛含量的辅助检测方法,对疫苗批签发和质量监管具有重要意义。; 杨欢非成瑞王思捷申雪杨力吴凡; 关键词：高效液相色谱法脊髓灰质炎灭活疫苗甲醛

肠道病毒对VERO细胞的适应及其疫苗制剂: 本发明公开了适应在Vero细胞中增殖至高滴度的肠道病毒D68及其适应方法。本发明还公开了包含灭活的肠道病毒D68抗原的合适的疫苗组合物。; A·雷丘杜里K·M·艾拉

Vero细胞悬浮培养的驯化与研究: Vero细胞(African green kidney cell,Vero cell)即非洲绿猴肾细胞,是世界卫生组织批准用于生产人用疫苗的理想连续细胞系。Vero细胞对多种病毒敏感,目前已经建立脊髓灰质炎病毒、乙型脑炎...; 付兰博; 关键词：VERO细胞

汉坦病毒Vero细胞适应株的筛选及鉴定: 2024年; 目的探讨汉坦病毒(Hantataan virus,HTNV)PS-6株经乳鼠鼠脑传代后在Vero细胞上的适应性,并筛选出适应Vero细胞的高滴度HTNV。方法将HTNV PS-6株在乳鼠鼠脑内连续传代培养后,Vero细胞上连续传10代,观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),并采用蚀斑法检测病毒感染性滴度,滴度升高后,采用蚀斑克隆纯化筛选单克隆病毒并检测病毒滴度;分别以0.01、0.05、0.1 MOI感染Vero细胞后绘制病毒生长曲线;Reed-Muench法计算病毒LD50;Western blot法鉴定病毒特异性;透射电镜观察病毒大小及结构;与HTNV PS-6株全基因组核苷酸序列及氨基酸序列进行比较分析。将筛选出的Vero细胞适应株V-PS-6经腹腔注射10只BALB/c雌性小鼠,濒死时解剖,取心、肝、脾、肾、脑、肺、小肠、肌肉等组织进行免疫组化分析。结果鼠脑传代毒株对Vero细胞具有较好适应性,初始病毒滴度为1.3 lgPFU/mL,随着传代次数增加,病毒滴度逐渐升高,稳定在7.5~7.9 lgPFU/mL;筛选出的适应株V-PS-6蚀斑边界清晰、圆润、肉眼可见,大小如针尖,LD_(50)为10-^(7.8),在相对分子质量约50 000处可见特异性蛋白条带,大小与适应前HTNV PS-6株相符;V-PS-6病毒直径为80~210 nm,与HTNV PS-6电镜结构未见明显差异,核苷酸序列同源性为99.39%,氨基酸序列同源性为98.85%;V-PS-6病毒明显分布在小鼠肾脏、肝脏、小肠、后腿肌肉及心脏中。结论成功筛选出1株可较好适应Vero细胞的高滴度HTNV株,且具有良好的遗传稳定性,为后续HTNV Vero细胞疫苗的研发及相关机制的研究奠定了基础。; 管亚博邢坤鹏刘晨阳王颖杜翔宇陈娜娜张朔孙宏亮李景良; 关键词：汉坦病毒 VERO细胞蚀斑法病毒滴度

Vero细胞的生长代谢特征及动力学模型构建: 2024年; [目的]解决Vero细胞在大规模高密度培养过程中营养物质耗尽,代谢产物积累导致细胞生长受限的问题。[方法]固定床生物反应器培养Vero细胞,通过换液培养和灌流培养两种方式比较细胞增殖、营养物质的消耗、代谢产物的生成,基于Logistic方程、Luedeking-Piret方程建立动力学模型,并根据实际检测数据,应用Origin软件进行非线性拟合。[结果]换液培养和灌流培养两种培养方式培养Vero细胞,两种培养方式达到的最大细胞密度分别是4.35×10^(6)/mL和4.34×10^(6)/mL,在对数生长期,细胞的生长速率分别是0.54 d^(-1)和0.67 d^(-1),葡萄糖的最大消耗量分别是14.95 g/d和17.1 g/d,谷氨酰胺的最大消耗量分别是2.725 g/d和3.7 g/d;Origin软件进行非线性拟合,得到的建模参数通过验证两种培养方式的细胞生长模型预测值与实验值拟合度较高。[结论]大规模培养Vero细胞,利用灌流培养的细胞生长速率较快,对营养物质的利用率较高,是理想的细胞培养方式;所建立的代谢动力学模型能较好的反应细胞在生长过程中的反应动力学过程。; 平玲顾朝剑吴易梅张立敏陈溢娟杨净思沈武玲; 关键词：VERO细胞 ORIGIN软件动力学模型

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