-
刘怀然
-
-
- 所属机构:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
- 所在地区:黑龙江省 哈尔滨市
- 研究方向:农业科学
- 发文基金:国家科技支撑计划
相关作者
- 陈洪岩
- 作品数：309被引量：888H指数：15
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
- 研究主题：实验动物 SPF SPF鸡 单克隆抗体 原核表达
- 孔宪刚
- 作品数：238被引量：961H指数：17
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
- 研究主题：鸡传染性支气管炎病毒 传染性支气管炎病毒 新城疫病毒 马传染性贫血病毒 弱毒疫苗
- 刘胜旺
- 作品数：263被引量：1,156H指数：19
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
- 研究主题：鸡传染性支气管炎病毒 传染性支气管炎病毒 新城疫病毒 鸡传染性支气管炎 Β-防御素
- 关云涛
- 作品数：60被引量：232H指数：9
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
- 研究主题：基因克隆 生物安全实验室 衣壳蛋白 兔出血症病毒 实验动物
- 李昌文
- 作品数：78被引量：425H指数：13
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
- 研究主题：实验动物 SPF 沙门氏菌 SPF鸡 大白猪
- 兔出血症病毒VP60基因在昆虫细胞中形成病毒样颗粒及其特性被引量：7
- 2007年
- 目的将兔出血症病毒(RHDV)VP60全长基因在昆虫细胞-杆状病毒系统中表达,验证重组蛋白形成病毒样颗粒(VLPs)的能力及其生物学特性,探讨VLPs作为检测抗原及亚单位疫苗的潜力。方法用Bac-to-Bac系统体外表达RHDVVP60全长基因。以免疫荧光及Western blotting检测蛋白表达情况及确定蛋白最佳表达条件;免疫电镜观察VLPs形态,并对VLPs的血凝性、免疫原性进行检测。结果SDS-PAGE电泳分析表明,表达的重组蛋白分子量大小约为68KDa,在免疫荧光、琼脂扩散、ELISA试验中均与RHD多克隆抗血清特异性反应;接种重组病毒的Sf9细胞裂解液在电镜下可观察到与RHDV形态相似的VLPs;该VLPs可凝集人“O”、“B”型红细胞,凝集可被RHD多克隆抗血清所抑制;含VLPs的Sf9细胞裂解液可不经纯化用作间接ELISA抗原,所建立的ELISA方法与进口商品化试剂盒相比,特异性良好,敏感性、检出率稍低;将含VLPs的细胞裂解液加氟氏佐剂免疫兔,HI效价可达1∶40,可经受致死量病毒攻击。结论RHDV-VLPs的获得及其良好的免疫原性,为RHD血清学检测试剂的标准化、亚单位疫苗研制应用奠定基础,同时在转移载体及RHDV受体方面研究亦有潜在应用价值。
- 刘怀然刘家森胡迎东陈洪岩单安山曲连东
- 关键词：兔出血症病毒昆虫细胞病毒样颗粒
- 兔轮状病毒的分离与鉴定被引量：3
- 2003年
- 目的 从疑似病料中分离免轮状病毒。方法 从形态学、血清学、分子生物学等几个方面对其进行鉴定。结果 从几个方面鉴定的结果显示 ,疑似病料中含有兔轮状病毒 (LaRV)病毒粒子。结论 本次实验成功地分离得到了LaRV病毒。
- 李昌文关云涛刘怀然夏长友张坦陈洪岩
- 关键词：分子生物学血清学形态学病原体
- 鸡传统性法氏囊病抗独特型抗体疫苗的研究
- 鸡传染性法氏囊病(IBD)是危害养禽业的重要传染病之一，多年来对它的预防和 控制主要是依靠常规疫苗的免疫接种。但常规疫苗的应用有其不可避免的缺点：灭活苗 中可能残留活毒而导...
- 刘怀然
- 关键词：传染性法氏囊病抗独特型抗体疫苗
- 文献传递
- 兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因的克隆与鉴定
- 衣壳蛋白VP60为免病毒性出血症病毒唯一的结构蛋白,与诱导抗病毒感染的免疫反应直接相关.本试验自感染RHDV致死的兔肝脏组织中提纯病毒,提取病毒总RNA,以RT-PCR方法扩增出全长2010bp的VP60片段.将RT-P...
- 刘怀然陈洪岩王云峰关云涛刘胜旺夏长友王英厚
- 关键词：兔出血症病毒衣壳蛋白VP60基因基因克隆
- 文献传递
- 猪圆环病毒Cap蛋白羧基端特异性单克隆抗体的制备被引量：6
- 2006年
- 利用IPTG诱导表达含有猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白羧基端421-37nt的重组大肠杆菌pGEX-PCV421-37,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)粗分离,免疫BALB/c小鼠,利用PCV2感染PK15细胞筛选PCV2特异性单克隆抗体。共获得5株,腹水的IFA效价范围为1∶1600～1∶8000;除单抗26H5-A3为IgG1亚型外,32A8-G5、33G10-F4、12B5-G3和14E12-A6全部为IgM型;全部轻链都属κ型。
- 马贯中韩凌霞朴范泽刘怀然司昌德姜骞曲连东
- 关键词：PCV2IFA
- 产气荚膜梭菌α毒素亚单位基因的表达及表达产物活性分析被引量：9
- 2003年
- 含有产气荚膜梭菌α毒素基因序列的克隆载体pMD18TCα ,经BamHⅠ和HindⅢ内切酶双酶切后 ,将α毒素亚单位基因亚克隆到原核表达载体pET30b中 ,构建表达载体pET30bPα。经酶切和测序鉴定 ,α毒素基因中的90 0bp的片段正确插入到表达载体中。重组菌株BL2 1(DE3)pET30bPα经IPTG诱导的表达产物经SDS PAGE和Western_blot分析 ,表达出大小为 38× 10 3的重组蛋白具有和α毒素阳性血清发生特异性的免疫反应。
- 刘家森刘怀然陈洪岩李一经
- 关键词：产气荚膜梭菌Α毒素克隆载体免疫原性
- 不同禽源新城疫病毒分离株F基因遗传变异分析
- 以鸡胚分离结合血清学鉴定,从近几年江苏省及河南省分离到来自鸡、鸽的6株新城疫病毒,病毒蚀斑纯化后,选取3个克隆利用RT-PCR技术扩增F基因重要功能区片段,在对PCR产物直接序列测定分析基础上,选取一致克隆株进行全长F基...
- 陈钟鸣刘怀然孙敏华戴鼎震张春杰张志成方光远孔宪刚
- 关键词：新城疫病毒F基因
- 文献传递
- 兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法
- 用RHDV单克隆抗体包被酶标板,以兔多克隆抗体作为夹心抗体,建立兔瘟病毒 (RHDV) 抗原捕获ELISA检测方法,优化反应条件并对该方法的敏感性、特异性、重复性、稳定性等指标进行了测试和评价.
结果表明,单抗...
- 秦海斌刘怀然刘家森姜骞韩凌霞司昌德曲连东
- 关键词：兔出血症病毒ELISA检测单克隆抗体兔瘟病毒
- 文献传递
- 禽劳斯肉瘤病毒群特异性抗原基因gp27片段的克隆及序列测定
- 2003年
- 以RT PCR方法从人工感染禽劳斯肉瘤病毒 (Roussarcomavirus ,RSV )SR RSV的SPF雏鸡体内及SPF鸡胚成纤维细胞 (CEF)培养物中分别扩增出 72 0bp的 gp2 7片段 ,将RT PCR产物重组到质粒载体 pUC19中 ,并对重组质粒进行酶切分析及序列测定。结果表明 ,克隆片段为完整的目的基因 ,该片段的核苷酸序列与国外分离株RSVJ0 2 342的同源性达 97.3%。
- 宋建臣关云涛刘怀然陈洪岩刘胜旺蔡雪辉夏长友
- 关键词：特异性抗原基因克隆RT-PCR
- 兔出血症病毒抗原捕获ELISA检测方法被引量：7
- 2007年
- 为了有效地预防和根除山羊痘，研制能够区分自然感染和疫苗免疫的标记疫苗。本研究在山羊痘病毒（goat pox virus，GPV）疫苗株AV41胸苷激酶（thymidine kinase，TK）基因克隆、鉴定的基础上，构建转移载体。将痘苗病毒（Vaccinia Virus，VV）晚期启动子P11和大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因（LacZ）报告基因片段插入含有TK片段同源臂的载体pTK的KpnI酶切位点，经酶切、PCR鉴定出，命名为pTK-LacZ。用脂质体法转染感染了GPVAV41株的犊牛睾丸（bovine testes，BT）细胞，待出现80%以上的细胞病变时收获病毒，经过连续9代蓝色蚀斑筛选、纯化和PCR鉴定，获得纯化的表达LacZ基因、TK功能缺失的重组病毒，命名为rGPV-LacZ。生物学特性研究显示，LacZ基因的插入不影响重组病毒的增殖特性，其毒力、生长特性与亲本株相似，保持原有疫苗株的生长特性，而且在BT细胞和羔羊睾丸（lamb testes，LT）细胞连续传20代遗传性状很稳定。本研究筛选、纯化的重组病毒rGPV-LacZ可以区分自然感染和疫苗免疫动物，为进一步研制山羊痘病毒基因工程标记疫苗奠定了基础。
- 秦海斌刘怀然刘家森姜骞韩凌霞司昌德曲连东
- 关键词：重组山羊痘病毒标记疫苗
