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许金俊
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- 所属机构:扬州大学兽医学院
- 所在地区:江苏省 扬州市
- 研究方向:农业科学
- 发文基金:国家自然科学基金
相关作者
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- 以4种鸡球虫实验室保存株(毒害、巨型、柔嫩、堆型艾美耳球虫)的基因组DNA为模板,分别用针对4种球虫的ITS-1序列设计的种特异性引物进行PCR扩增,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析,观察特异性条带。结果显示,只有在模板和扩增引物为同一种球虫时,方能扩增出特异性条带。表明本实验室保存的4种鸡球虫均为纯种株,建立的PCR检测方法可以用于鸡球虫纯种的鉴定。
- 李巧巧王乐乐刘丹丹许金俊陶建平
- 关键词：艾美耳球虫纯种PCR鉴定
- 毒害艾美耳球虫配子体Engam59基因的克隆表达及其表达产物的免疫原性分析被引量：6
- 2017年
- 提取毒害艾美耳球虫配子体总RNA,应用RT-PCR扩增得到Engam59基因,对其克隆测序并进行序列分析。结果表明,Engam59基因全长为1 473 bp,为一个完整的开放阅读框,编码490个氨基酸,具有1个酪氨酸-丝氨酸富集区和1个脯氨酸-甘氨酸富集区,与柔嫩艾美耳球虫Etgam59基因的同源性为93.4%。选择该基因编码的第211~432位氨基酸间的肽段进行截短表达,获得的重组蛋白大小在27.69 ku左右,主要以包涵体的形式存在。Western-blot分析结果显示,该重组蛋白能被小鼠抗重组蛋白多克隆抗体和毒害艾美耳球虫病鸡康复血清识别,表明该重组蛋白具有很好的免疫原性。本研究结果为进一步探析毒害艾美耳球虫配子体蛋白的功能与研制鸡球虫病基因工程疫苗奠定了基础。
- 刘丹丹曹李琴朱玉兰许金俊陶建平
- 关键词：毒害艾美耳球虫克隆原核表达免疫原性分析
- 火鸡组织滴虫ME 1基因的原核表达及其定位分析
- 2023年
- 为研究火鸡组织滴虫(Histomonas meleagridis)胞质烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)依赖性苹果酸酶(ME 1)的抗原性及其在火鸡组织滴虫中的定位,本研究根据本实验室前期对火鸡组织滴虫ME 1基因的测序结果设计引物,以虫体cDNA为模板,经RT-PCR扩增火鸡组织滴虫ME 1(HmME 1)基因,结果显示HmME 1基因全长1182 bp,将其克隆至pET28a(+)构建重组表达载体后转化BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,利用Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白rHmME 1,经SDS-PAGE和western blot鉴定,结果显示,rHmME 1以可溶形式存在,相对分子量约为46 ku,且纯化的rHmME 1条带单一,浓度为0.4 mg/mL。将该纯化的rHmME 1免疫小鼠,制备该重组蛋白的鼠抗血清(多克隆抗体),采用间接ELISA方法检测多克隆抗体的效价,结果显示制备的多克隆抗体效价为1∶409600。采用western blot分别检测rHmME 1与制备的鼠源rHmME 1阳性血清和鸡源火鸡组织滴虫阳性血清的反应原性,以及鉴定虫体天然表达的HmME 1蛋白与制备的鼠源rHmME 1阳性血清的反应原性,结果显示rHmME 1蛋白能同时被鸡源火鸡组织滴虫阳性血清及鼠源rHmME 1阳性血清特异性识别,制备的鼠源rHmME 1阳性血清也可以与虫体天然表达的HmME 1蛋白反应。利用间接免疫荧光试验(IFA)对虫体内的HmME 1蛋白进行定位分析,结果显示HmME 1广泛存在于火鸡组织滴虫的胞质内。上述结果首次表明,HmME 1的反应原性及抗原性均较强,可以作为火鸡组织滴虫重组亚单位疫苗研制的潜在靶标,该结果为进一步研究火鸡组织滴虫的致病机制及疫苗研制奠定了基础。
- 李在凡陈晨陈乔光王双刘丹丹刘丹丹陶建平许金俊
- 关键词：原核表达抗原性
- 不同感染剂量对毒害艾美耳球虫繁殖力的影响被引量：2
- 2019年
- 为研究不同感染剂量对毒害艾美耳球虫繁殖力的影响,设4个感染剂量组:500、2 500、5 000和10 000个孢子化卵囊/鸡,每组5只23日龄雏鸡,经鸡嗉囊接种卵囊。感染后鸡粪便中出现卵囊起至第16天,每天用麦克马斯特氏法对各组粪便中卵囊进行计数;在感染后第16天扑杀鸡,取盲肠进行卵囊计数。结果显示,各试验组鸡均无发生死亡,但10 000个卵囊感染组的临床症状最为严重;感染后144 h粪便中查见卵囊,500、2 500和5 000个卵囊感染组均出现2个排卵囊峰值,10 000个卵囊感染组只出现1个峰值,在第7～13天产出的卵囊量均占总产量的94.74%以上;每鸡粪便中排出的卵囊数随感染剂量的增加而增多,但单个卵囊的产量随感染剂量的增加而减少;感染后第16天盲肠中卵囊数不到总卵囊量的1%。结论:在疫苗生产或增殖传代时,感染剂量可选择10 000个卵囊/鸡,在感染后第7～13天收集粪便中卵囊。
- 汪飞燕闫欣刘悦王乐乐李文静徐向东许金俊许金俊刘丹丹
- 关键词：毒害艾美耳球虫繁殖力
- 10株巨型艾美球虫rDNA-ITS-1部分序列测定与分析被引量：4
- 2008年
- 用一对种特异性引物,对国内10株巨型艾美球虫ITS-1区进行PCR扩增,对扩增产物纯化、测序与分析,并用DNAStar软件对所检测的10株巨型艾美球虫与GenBank中的所有巨型艾美球虫的ITS-1相应序列进行系统发生进化关系分析。结果显示,扬州株、龙岩株和福州株的ITS-1部分序列片段长度为152bp,其余各株均为151bp。10株巨型艾美球虫的同源性为90.7%～100%,在构建的系统发生进化树中分成2大系群,凤阳株形成一个单系群,其余9株为另一系群。虫株间的亲缘关系与地理位置不尽一致,与免疫交叉保护力无相关性。
- 陶建平辛玲许金俊
- 关键词：巨型艾美球虫ITS-1系统发育
- 青蒿素在体外和体内对火鸡组织滴虫的抑制效果被引量：2
- 2021年
- 为探究青蒿素防治禽类组织滴虫病的效果,在体外和体内分别应用不同浓度青蒿素处理,同时设地美硝唑药物组、攻虫组和空白对照组,通过攻虫试验,统计虫体抑制率、临床症状、发病率、死亡率、脏器病变情况、平均增重、相对增重率等来评价青蒿素的抑制效果。结果显示,随着青蒿素浓度的升高,抗火鸡组织滴虫的效果越来越明显,作用48 h且浓度高于3 mg/mL时可完全抑制虫体生长,1 mg/mL作用84 h为体外最低有效浓度。在体内青蒿素用药组鸡的发病率、死亡率和脏器病变均低于攻虫组,0.5 g/kg青蒿素组鸡的发病率最低且相对增重率为83.34%,在3个不同浓度青蒿素组中抑制效果最好。结论,青蒿素在体内和体外均有一定的抗火鸡组织滴虫活性,为青蒿素用于临床组织滴虫病的防治提供了一定参考依据。
- 王双陈乔光戎杰陈晨王子静孔令明候照峰刘丹丹刘丹丹许金俊
- 关键词：青蒿素体外
- 鸡源高黏附乳酸菌的分离筛选及主要生物学特性研究被引量：1
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- 研究旨在筛选高黏附特性的鸡源乳酸菌,评价其主要生物学特性。试验应用MRS琼脂培养基从SPF鸡十二指肠、盲肠及小肠分离菌株,通过形态学观察、生理生化试验进行初步筛选,随后采用ERIC-PCR与16S rRNA基因序列分析相结合的方法对分离菌株进行种属鉴定,并对分离鉴定的乳酸菌株进行黏附能力、耐酸与耐胆汁特性、生长曲线、体外传代能力等生物学特征进行分析。结果显示:在34株分离菌株中鉴定到9种基因型,其中7株为罗伊氏乳杆菌、2株为约氏乳杆菌。菌株编号为C7的罗伊氏乳酸杆菌对HT-29细胞黏附率为(32.3±1.67)%,显著高于商品化乳酸乳球菌MG1363株和乳杆菌BNCC182567株以及除S3株外的其他分离株(P<0.05);在pH2.0~5.0条件下存活率均高于100%,在40%与60%新鲜鸡胆汁作用下存活率分别为(116.67±11.89)%和(102.33±10.87)%,在体外连续传代10代仍能保持良好的活力。结果表明分离获得的C7分离株为罗伊氏乳酸杆菌,具有高黏附特性、耐酸与耐胆汁特性,该菌株为研究益生菌制剂及口服疫苗表达载体奠定了初步基础。
- 范雪莲张知之冯茜茜严丹丽薛念宇刘丹丹候照峰许金俊许金俊
- 关键词：鸡源乳酸菌黏附性
- 鹅艾美球虫对雏鹅的致病性及病理学研究被引量：2
- 2009年
- 用纯种鹅艾美球虫孢子化卵囊分别人工感染9日龄和18日龄雏鹅,进行致病性与病理学研究。以0.01×104个/只、0.1×104个/只、1.0×104个/只剂量感染9日龄雏鹅,死亡率分别为0、10%和60%;以0.5×104个/只、3.0×104个/只剂量感染18日龄雏鹅,死亡率分别为20%和75%。雏鹅发病的临床症状和死亡鹅的病理变化基本一致,潜伏期5d～5.5d,病程3.5d～4d。病变主要在小肠下段,尤其是空肠后段与回肠前段最严重,呈急性出血-坏死性或出血-卡他性肠炎。大量配子体或卵囊寄生在肠绒毛基部尤其是肠腺上皮细胞中,引起肠黏膜上皮坏死、脱落以及肠壁水肿、出血和炎性细胞浸润等。结果表明:鹅艾美球虫对雏鹅有很强的致病性;致病性主要发生在配子生殖阶段,是由大量的配子体或卵囊在肠腺上皮细胞内发育破坏了肠道黏膜组织结构与功能所致。
- 吴力力王留王小波许金俊陶建平
- 关键词：雏鹅病理学
- 巨型艾美球虫gam82基因重组蛋白与核酸疫苗的免疫保护效果
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- 彭昊张艳许金俊陶建平
- 关键词：巨型艾美球虫重组蛋白DNA疫苗免疫保护力
- 文献传递
