王永山
作品数: 294被引量:583H指数:13
  • 所属机构:江苏省农业科学院
  • 所在地区:江苏省 南京市
  • 研究方向:农业科学
  • 发文基金:江苏省自然科学基金

相关作者

欧阳伟
作品数:166被引量:159H指数:8
供职机构:江苏省农业科学院
研究主题:传染性法氏囊病病毒 传染性法氏囊病 VP2基因 IBDV 单克隆抗体
夏兴霞
作品数:156被引量:266H指数:9
供职机构:江苏省农业科学院
研究主题:单克隆抗体 传染性法氏囊病病毒 传染性法氏囊病 杂交瘤细胞 犬瘟热病毒
王晓丽
作品数:170被引量:412H指数:12
供职机构:山东农业大学
研究主题:传染性法氏囊病病毒 单克隆抗体 传染性法氏囊病 杂交瘤细胞 分泌
诸玉梅
作品数:131被引量:195H指数:8
供职机构:江苏省农业科学院
研究主题:传染性法氏囊病病毒 单克隆抗体 新城疫病毒 杂交瘤细胞 传染性法氏囊病
毕振威
作品数:99被引量:116H指数:5
供职机构:江苏省农业科学院
研究主题:单克隆抗体 犬瘟热病毒 传染性法氏囊病病毒 杂交瘤细胞 分泌
重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构建
将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1上T细胞表位肽(第21-40残基)基因嵌合在PPV VP2的N端,克隆到杆状病毒供体质粒pFastBac HTA中,构建成重组转座载体pFastBac-FMDV VP1:PPV VP2,...
潘群兴王永山何孔旺欧阳伟王晓丽诸玉梅夏兴霞
关键词:细小病毒VP2蛋白
文献传递
犬流感病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株F112及应用
本发明涉及一种犬流感病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株F112,属于生物技术领域。本发明是运用淋巴细胞杂交瘤技术,用犬流感病毒流行毒株A/Canine/Nanjing/11/2012(H3N2)制备免疫抗原,从中筛选出一株强效杂...
夏兴霞王永山王晓丽安欣欧阳伟诸玉梅潘群兴王晶宇楼晶瑶姚凌云吴世妍毕振威芮荣刘永杰
文献传递
抗重组人巨细胞病毒单克隆抗体的制备与鉴定被引量:1
2001年
为了获得抗人巨细胞病毒 (HCMV)单克隆抗体 (McAb)。采用重组HCMV(rhCMV)gp5 2蛋白片段免疫Balb/c小鼠 ,将免疫鼠脾细胞与Sp2 /0细胞融合 ,经ELISA法筛选阳性克隆及测定效价 ,用免疫印迹法进行特异性鉴定。最终获得 4株 (3E9,5A6,4G12 ,2H2 )能稳定分泌高效价抗rhCMVMcAb的杂交瘤细胞。其培养上清的ELISA效价分别为 :1∶2 0 48,1∶10 2 4,1∶10 2 4,1∶5 12 ;腹水效价分别为 :1× 10 -7,1× 10 -7,1× 10 -6,2× 10 -6。它们分别识别gp5 2蛋白上的 2个不同的抗原表位 ,2H2 识别gp5 2蛋白上的一个表位 ,3E9,5A6和 4G12 识别另一个表位。
郑纪山周宗安邓小昭李越希何亮高健王永山李鹤龄
关键词:人巨细胞病毒单克隆抗体抗原表位
gga-miR-21过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响
为了探讨gga-miR-21对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,定向克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中,获得重组慢病毒表达质粒pL-miR-...
欧阳伟朱向东王永山王永强潘群兴毕振威王笑梅
关键词:鸡传染病法氏囊病病毒病毒复制
文献传递
gga-miR-142-5p负调控chMDA5抗传染性法氏囊病病毒感染的分子机制被引量:4
2018年
传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的一种高度危害养鸡业的传染病。chMDA5在识别病原相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMPs)及激活宿主的天然免疫应答中具有重要的作用,但chMDA5识别IBDV的分子机制仍然不清楚。本研究用IBDV感染DT40细胞,在IBDV感染的DT40细胞中,chMDA5的表达水平显著升高。chMDA5过表达可以抑制IBDV的复制,并激活IFN-β promoter和Mx promoter活性,chMDA5抑制表达则得到相反的结果;chMDA5激活IFN-β promoter活性主要是通过IRF7通路。用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析发现gga-miR-142-5p可作用于chMDA5的3'UTR;qRT-PCR和免疫印迹分析表明gga-miR-142-5p可以使chMDA5的蛋白水平表达降低,但mRNA水平没有变化;gga-miR-142-5p可依赖IRF7通路使IFN-β promoter和Mx promoter活性降低,IBDV复制水平升高。本研究表明,gga-miR-142-5p可以作用于chMDA5的3'UTR负调控chMDA5的表达从而影响其下游IFN-β promoter和Mx promoter活性来发挥抗IBDV感染的作用。
欧阳伟潘群兴潘群兴钱晶王晶宇王晓丽夏兴霞诸玉梅
关键词:传染性法氏囊病病毒天然免疫
传染性法氏囊病病毒多表位模拟肽串联基因的表达与免疫原性分析被引量:6
2007年
用5株传染性法氏囊病病毒(IBDV)单克隆抗体(mAb)从噬菌体随机肽库中得到了5个含有不同IBDV抗原表位的模拟肽序列。在此基础上,将5个抗原表位用GGGS四肽连接构建多表位基因5epis。将该基因合成、克隆后,构建原核表达质粒pET-5epis,在大肠杆菌中表达重组多表位蛋白r5EPIS,经SDS-PAGE分析,r5EPIS占菌体总蛋白的15%、分子量10kDa。用IBDV单克隆抗体和多克隆抗体对r5EPIS进行免疫印迹对比分析,结果表明,r5EPIS具有IBDV特异性和免疫反应性。将r5EPIS经皮下注射免疫兔,400μg/只/次,免疫2次,间隔7d,用IBDV间接ELISA检测血清抗体,第一次免疫7d后抗体效价为1∶4000,第二次免疫14d后抗体效价升高到1∶256000,说明r5EPIS可诱导机体产生IBDV特异性抗体。用r5EPIS加免疫佐剂经肌肉注射免疫鸡,50μg/只/次,免疫2次后,血清抗体效价可达到1∶12800,用200个ELD50IBDV超强毒株GX8/99攻击实验鸡,r5EPIS免疫组全部存活,而单用佐剂对照组的死亡率为86.7%(13/15),证明r5EPIS可诱导机体产生抗IBDV感染的保护性免疫应答,预示构建的5epis可作为IBD多表位疫苗研究的候选基因。
王永山范红结张晓民李银肖焕娟
关键词:传染性法氏囊病病毒抗原表位免疫原性
不同禽鸟类传染性法氏囊病病毒分离物核酸及结构蛋白的比较被引量:7
1998年
将从鸡、鸭和麻雀体内分离到的IBDV用SPF鸡胚增殖,采用氯仿抽提、聚乙二醇沉淀和蔗糖密度梯度离心的方法纯化病毒,鉴定结果表明,这种方法可有效地将病毒与杂蛋白分开。用异硫氰酸胍-酚-氯仿-抽提一步法提取病毒RNA,电泳分析表明,三种IBDV均由双节段RNA组成,大、小基因片段的电泳迁移率毒株间无差异。SDS-PAGE分析表明,各IBDV的结构蛋白带谱相同,但各蛋白带的相对百分含量有差异,表明这些不同IBDV分离株的同源性和变异。本文还对IBDV的纯化和变异进行了讨论。
王永山周宗安周宗安张建昌顾志香丁铲
关键词:麻雀传染性法氏囊病病毒核酸结构蛋白
一种新城疫与传染性法氏囊病二联亚单位疫苗
本发明公开了一种新城疫与传染性法氏囊病二联亚单位疫苗,属于兽用生物制品领域。本发明的亚单位疫苗是以新城疫病毒样颗粒和传染性法氏囊病病毒样颗粒作为抗原,是通过重组杆状病毒(rBV‑NDV‑HN+F+M和rBV‑IBDV‑d...
钱晶王永山欧阳伟马孙婷王晓丽夏兴霞王晶宇诸玉梅
文献传递
分泌抗犬瘟热病毒H蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞2D12株
本发明涉及分泌抗犬瘟热病毒H蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞2D12株,属于生物技术领域。单克隆抗体2D12与犬瘟热病毒(CDV)疫苗株发生特异性反应并具有病毒中和活性,与CDV野毒株不发生反应。用单克隆抗体2D12建立双抗体...
毕振威王永山夏兴霞徐立波欧阳伟王晓丽钱晶王晶宇马孙婷诸玉梅梁霆
大肠杆菌O157:H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制被引量:10
2010年
为建立快速检测鼠感染大肠杆菌O157∶H7后的抗体,本研究采用颗粒为20nm的胶体金溶液标记纯化的羊抗鼠IgG,制备金标探针,喷涂于玻璃纤维膜上;将大肠杆菌O157∶H7抗原和抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体F1分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,组装成鼠血清O157∶H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条。实验结果表明,该试纸条仅与O157∶H7阳性鼠血清发生特异性反应,用该试纸条与常规间接ELISA平行比较检测O157∶H7免疫鼠血清,抗体效价分别为1×106和1×105,两者的敏感度相当。该试纸条操作简便,10min可出结果,适用于调查与追溯鼠O157∶H7感染状况时的现场检测。
刘洁夏兴霞王永山张雪寒费荣梅何孔旺
关键词:胶体金