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朱建宝
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- 所属机构:东南大学医学院神经生物学研究所
- 所在地区:江苏省 南京市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:江苏省自然科学基金
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- 宋嵬曾水林朱建宝王磊李升阎荣李凤飞
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- 史婷婷李涛晋光荣王健华刘袁静陈哲朱建宝
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- 曾水林王磊雷志年朱建宝李涛闫福麟
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- 王磊曾水林朱建宝李涛
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- 目的:探讨胚胎大鼠腹侧中脑区域神经干细胞(neural stem cell,NSCs)的分离、培养、传代及鉴定的方法。方法:分离E14.5胚胎大鼠腹侧中脑组织,用机械吹打方法形成细胞悬液,接种到含有表皮生长因子(ep i-derm al growth factor,EGF)、碱性成纤维生长因子(fibrob last growth factor-basic,bFGF)、B27(B27 sup lem ent)的DMEM/F12(1∶1)的无血清培养液中培养,待形成原代克隆球后,用有限稀释法进行单细胞克隆和传代扩增,以获得大量来源相同的NSCs克隆球,并且进行B rdu和Nestin检测;然后取培养细胞诱导分化后行GFAP,NeuN,TH检测。结果:E14.5胚胎大鼠腹侧中脑组织细胞培养两周后可以形成较多的悬浮生长的神经球,经单细胞克隆和传代扩增后得到大量的同源细胞克隆球。经过B rdu和Nestin的免疫细胞化学检测90%以上的细胞呈阳性;诱导分化后细胞呈GFAP,NeuN阳性,少量细胞呈TH阳性。结论:从E14.5胚胎大鼠腹侧中脑组织分离得到的细胞具有不断增殖和自我更新的能力,是胚胎大鼠中枢神经系统的NSCs,并可以分化为TH阳性神经元。
- 王磊曾水林雷志年朱建宝李涛闫福麟
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- 超声波联合曲拉通X-100制备猪去细胞的主动脉支架
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- 目的探讨超声波联合曲拉通X-100制备猪升主动脉去细胞支架的方法及效果。方法从体质量相近的中华实验猪制备新鲜主动脉标本280份,随机分为4组:空白对照组、曲拉通X-100(Triton X-100)和SDS(十二烷基磺酸钠)组、曲拉通X-100组、超声波联合曲拉通X-100组,通过组织学及电镜观察、生物力学性能测定、免疫组织化学检测Ln和Fn的蛋白表达变化等分析比较各组去细胞的效果。结果超声波联合曲拉通X-100组可完全去除动脉内膜细胞,组织形态、生物力学等保持良好。层粘连蛋白(Ln)和纤维连接蛋白(Fn)的阳性面积×平均吸光度值分别是0.01470±0.00160、0.01340±0.00029,明显优于传统的化学去细胞方法。结论超声波联合曲拉通X-100组去细胞效果优于传统化学去污剂,是较理想的制备猪动脉去细胞支架的方法。
- 张永生莫绪明朱建宝彭卫何晓敏束亚琴
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