龚燕华
所属机构: 武警后勤学院 研究方向: 医药卫生 发文基金: 国家自然科学基金
相关作者
彭小忠 作品数:146 被引量:166 H指数:6 供职机构:中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 研究主题:神经胶质瘤 神经胶质瘤细胞 NSPC1 基因克隆 原核表达 阴彬 作品数:64 被引量:87 H指数:6 供职机构:中国医学科学院基础医学研究所 研究主题:CDNA 神经胶质瘤细胞 基因表达 纯化 小鼠 李辉 作品数:134 被引量:712 H指数:15 供职机构:武警后勤学院附属医院 研究主题:肾移植 微炎症状态 维持性血液透析患者 维持性血液透析 排斥反应 袁建刚 作品数:124 被引量:301 H指数:9 供职机构:中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所 研究主题:克隆 CDNA 神经系统 神经胶质瘤 原核表达 强伯勤 作品数:104 被引量:147 H指数:6 供职机构:中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所 研究主题:人类基因组研究 克隆 神经胶质瘤 CDNA 人类基因组计划
人源DTD蛋白激活人神经母细胞瘤细胞非选择性阳离子通道 2009年 目的探讨人源D-酪氨酰tRNA脱酰基酶(h-DTD)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的非选择性阳离子通道通透性的影响。方法利用毛细管电泳法检测原核表达纯化的h-DTD的体外脱酰酶活性;用W estern b lot法分析h-DTD在各组织和细胞中的表达谱;用膜片钳技术检测SH-SY5Y细胞全细胞电位。结果h-DTD具有体外脱酰酶活性,并在脑组织中高表达。在h-DTD蛋白存在的情况下,游离的D-氨基酸及L谷-氨酸能激活谷氨酸敏感的非选择性阳离子通道,导致细胞膜通透性增加。结论在神经系统,h-DTD蛋白可能通过维持游离D-氨基酸的浓度来影响非选择性阳离子通道的功能。 朱镜羲 阳洪波 于晓霞 郝维 鲍光宏 曹济民 龚燕华关键词:表达谱 PCGF1蛋白的表达、纯化及其单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:1 2011年 目的:原核表达人表观抑制因子Polycomb家族成员PCGF1蛋白片段,并制备其鼠源单克隆抗体(mAb)。方法:应用PCR技术扩增人PCGF1基因编码区部分序列(CDS区第382~567bp的DNA片段)并插入到pET-32a(+)质粒中,在大肠杆菌BL21中进行His-PCGF1-128/189融合蛋白(简写为His-N128/189)的原核表达。利用所表达的融合蛋白中含有的6×His标签进行亲和层析纯化。用所获得的纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术,分别通过ELISA和Western blot法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,用免疫双向扩散法鉴定mAb的Ig亚类。取1株杂交瘤细胞按照常规方法制备腹水,利用Millipore公司的mAb纯化试剂盒纯化mAb,用Western blot法检测mAb的效价。结果:表达纯化了重组人His-N128/189蛋白;筛选出2株可稳定分泌特异性抗人PCGF1 mAb的杂交瘤细胞株,其免疫球蛋白类型均为IgG1类;通过腹水制备和纯化获得高效价(1∶6000)、高特异性的鼠抗人PCGF1 mAb。结论:原核表达的PCGF1片段融合蛋白可以被纯化,并具有足够的蛋白免疫原性,所制备的相应mAb可特异识别内源性和外源性PCGF1蛋白,可以运用于PCGF1基因功能的研究。 李辉 吴旭东 龚燕华 阴彬关键词:单克隆抗体 杂交瘤技术 ATP依赖的染色质重塑复合体 2002年 真核基因转录调节需要改变染色质结构 (即染色质重塑 ) ,需要特异因子结合启动子和增强子等顺式作用元件 ,需要这些位点和 RNA聚合酶之间建立联系 (通讯 ) ,这些作用都需要不同的多蛋白复合体。这些复合体中的每一个都可能是调节某个特定基因的关键因素。本文讨论 龚燕华关键词:ATP 核小体 基因转录调控 应用微阵列芯片分析人髓母细胞瘤及瘤旁组织miRNA表达谱差异 被引量:4 2009年 目的检测人髓母细胞瘤(medulloblastomas,MB)与非肿瘤脑组织中微小RNA(miRNA)的表达差异情况,探讨异常表达miRNA参与MB发生的可能分子机制。方法选取经手术切除的MB组织标本及瘤旁正常小脑组织,分别提取总RNA和小分子RNA,在miRNA微阵列芯片中杂交检测,通过芯片扫描和数据分析,并通过实时荧光定量RT-PCR验证,获得该病异常miRNAs表达谱。结果筛选出9个MB的相关miRNAs,其中表达上调4个,表达下调5个。其中miR-17、miR-100、miR-106b和miR-218的差异表达情况得到定量RT-PCR的证实。结论miRNA微阵列分析技术是一种快速、高效的研究生物信息的分子生物学技术;筛选出的差异表达miRNAs可能参与MB发病,为此病诊治提供了新的思路,值得进一步研究。 刘巍 晁腾飞 龚燕华 袁建刚 甲戈 马振宇 赵继宗关键词:髓母细胞瘤 微阵列 靶基因 肿瘤发生 Polycomb家族基因Nspc1在斑马鱼早期发育的表达 被引量:6 2008年 目的探讨Polycomb家族基因Nspc1在模式生物斑马鱼发育早期的表达模式。方法根据GenBank中斑马鱼Nspc1的cDNA序列设计Nspc1原位杂交探针片断,并制备地高辛标记的探针。收取单细胞期、双细胞期、胚芽期及不同时间点的体节期斑马鱼胚胎,用制备好的探针作原位杂交,显微镜下拍照,获得信号适当的杂交结果。结果在斑马鱼体节期前,Nspc1在全身表达;从体节期开始,其表达逐渐表现出特异性,主要在头部的神经系统中表达。结论Nspc1在模式生物斑马鱼的早期发育、尤其是神经系统发育的过程中可能扮演重要角色。 吴旭东 张敏 龚燕华 强伯勤 袁建刚 孟安明 彭小忠关键词:POLYCOMB NSPC1 斑马鱼 神经系统发育 MiR-21对脑胶质瘤的诊断及预后评估价值的Meta分析 2016年 【目的】本研究利用Meta分析的方法对mi R-21在脑胶质瘤患者诊断及预后评估中的价值进行系统评价。【方法】按照检索式检索Pub Med、Web of science、中国期刊全文数据库收集涉及mi R-21与脑胶质瘤患者诊断及预后相关的临床研究,按照文献纳入及排除标准筛选文献,评价纳入文献质量,最终提取数据资料,应用Stata13.1和Metadisc1.4软件进行Meta分析。【结果】共纳入文献9篇,其中诊断研究4篇,预后研究4篇,另有1篇文章既涉及诊断研究也涉及预后研究。共计1 038例研究对象,其中脑胶质瘤病例数为910例。mi R-21诊断脑胶质瘤的合并灵敏度为0.82(95%CI:0.73~0.88),合并特异度为0.93(95%CI:0.85~0.97);脑胶质瘤组织中高mi R-21表达影响患者总生存时间的合并风险比为1.74(95%CI:1.47~2.07,P〈0.05)。【结论】检测mi R-21对于脑胶质瘤病人诊断及评估预后具有较大临床价值。 单煜恒 林彦琛 代丽丽 龚燕华 钟士江关键词:脑胶质瘤 小分子RNA 预后 META分析 支持HCV 1b亚基因组复制的细胞模型的建立 被引量:1 2009年 目的建立一个稳定支持中国人群HCV1b亚基因组高效复制的体外细胞模型。方法构建中国人群HCV1b亚型亚基因组复制子质粒,通过体外转录的方法获得亚基因组复制子RNA,采用电穿孔技术把RNA转染到Huh-7.5.1细胞中,经过G418筛选含有HCV1b亚基因组的细胞集落。RT-PCR检测细胞集落中的HCV亚基因组以及Western blot检测细胞集落中的HCV蛋白的表达。用干扰素(IFN)处理含有HCV亚基因组的细胞,观察细胞中HCV RNA的变化。结果G418药物筛选得到了支持HCV1b亚基因组复制的细胞集落。RT-PCR检测有HCVR NANS4B的表达,Western blot检测有HCV的非结构蛋白NS5B的表达。IFN处理含有HCV复制子的细胞,HCV RNA水平明显降低。结论成功建立了支持中国人群HCV1b亚基因组高效复制的体外细胞模型,为进一步研究HCV致病机制、治疗药物筛选及疫苗方面的研究打下了基础。 陈慧毅 卢捷 李瑞 辛中帅 阴彬 龚燕华 彭小忠关键词:HCV 电穿孔 长链非编码RNA与多梳家族蛋白在神经胶质瘤中相互作用的研究进展 被引量:3 2017年 多梳家族(polycomb group,Pc G)蛋白是一组在染色质水平调控靶基因的转录抑制因子,在胚胎发育、细胞周期、细胞增殖及肿瘤形成过程中起着非常重要的作用。长链非编码RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)可以通过募集染色质修饰复合物(如多梳家族蛋白复合体)给非特异的酶活性提供了一种基因特异的靶向机制,靶向蛋白至特异的染色质位点发挥转录抑制效用。本文就lnc RNAs与Pc G蛋白相互作用在神经胶质瘤的进展进行综述,有助于理解神经胶质瘤治疗的基因靶点。 梁之孔 王玉梁 李辉 孙奕 龚燕华关键词:长链非编码RNA 神经胶质瘤 NSPc1相互作用蛋白的筛查及其与组蛋白乙酰化酶HBO1相互作用的验证 被引量:1 2008年 目的寻找多梳家族(polycomb group)蛋白NSPc1的体内可能的相互作用蛋白。方法通过酵母双杂交实验筛选与NSPc1相互作用的蛋白。使用Pull-down实验,Co-IP实验以及细胞内荧光共定位实验进一步证实双杂交中发现的相互作用。结果分别以NSPc1蛋白的全长、N端和C端作为诱饵筛查人3月胎脑cDNA文库,发现N端诱饵可以与组蛋白乙酰化转移酶HBO1相互作用,该相互作用在体内外实验中都得到了验证。结论组蛋白乙酰化酶HBO1是NSPc1的相互作用蛋白之一,该相互作用可能参与NSPc1对靶基因转录的表观抑制活性的发挥。 龚燕华 石磊 吴旭东 强伯勤 彭小忠 袁建刚关键词:酵母双杂交 蛋白质相互作用 组蛋白乙酰化酶 MiR-9在人神经胶质瘤中调节CBX7的表达 被引量:9 2008年 目的检测CBX7在人神经胶质瘤中的表达,研究人神经胶质瘤中异常表达的microRNA对CBX7的可能调控作用。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测2例正常脑组织、9例胶质瘤组织和3株胶质瘤细胞系中CBX7mRNA和蛋白水平的表达变化。结合Miranda和改良的机器学习法预测调控CBX7的miRNA。采用real-time PCR检测上述组织和细胞系中miR-9的表达,然后在细胞中过表达或敲低miR-9,结合荧光素酶实验和Western blot检测miR-9对CBX7表达的影响。采用MTT实验和流式细胞术分析miR-9敲低后对T98G细胞生长的影响。结果在胶质瘤组织和细胞系中,CBX7的mRNA水平改变不明显,而蛋白水平却明显下调。生物信息学预测CBX7可能受包括miR-9在内的多个miRNAs调控。与正常组织相比,miR-9在胶质瘤中表达明显增高。在293ET细胞中,过表达miR-9能抑制CBX7-3UTR报告基因活性。在T98G细胞中,敲低miR-9可增加CBX7-3UTR报告基因活性,对内源性CBX7的mRNA水平无明显影响,但使CBX7蛋白表达增加。敲低miR-9后,T98G存活细胞数增加,而且G1期细胞数比对照组明显减少。结论由于受到miR-9转录后水平的抑制,CBX7在人神经胶质瘤中表达下调甚至缺失。 晁腾飞 张瑜 颜兴起 阴彬 龚燕华 袁建刚 强伯勤 彭小忠关键词:MIR-9 神经胶质瘤 基因表达