目的评价抗p21ras单克隆抗体(mAb)KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3与原发性甲状腺乳头状癌及相应正常组织的免疫反应性,为该抗体的临床应用奠定基础。方法用本实验室制备的广谱抗p21ras mAb KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3抗体,对30例甲状腺乳头状癌和30例周围正常甲状腺组织进行免疫组化染色,计算各样本的阳性细胞百分比和组织学评分(HSCORE)分值,确定这三种抗体对甲状腺乳头状癌及甲状腺正常组织免疫反应性的差异。结果抗p21ras单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3分别与70.00%(21/30)、76.67%(23/30)、60.00%(18/30)的甲状腺乳头状癌发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞百分比分别为为81%、100%、68%,平均HSCORE评分分别为277.50分、272.50分、264.00分;分别与30.00%(9/30)、23.33%(7/30)、33.33%(10/30)的正常甲状腺组织发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞百分比分别为7.75%、8.00%、10.20%,平均HSCORE评分分别为7.75分、8.00分、10.20分。结论这三种单克隆抗体在甲状腺乳头状癌中免疫反应性较强,而在正常甲状腺组织的免疫反应性较弱或呈阴性反应。因此,这三种单克隆抗体可进一步开发为治疗性抗体,用于原发性甲状腺乳头状癌的临床治疗。
目的:建立人肿瘤细胞NKG2D配体基因(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)表达的实时荧光定量PCR(real-timefluorescence quantitative PCR)检测方法。方法:根据NCBI基因库中NKG2D配体基因序列,设计合成引物。用Trizol法从培养的肿瘤细胞(BEC-7402、HeLa、MDA-MB-435、XWLC-05)中提取总RNA,逆转录成cDNA,建立实时荧光定量PCR检测NKG2D配体基因表达的方法,并检测NKG2D配体在肿瘤细胞株中的表达。结果:经过琼脂糖凝胶电泳、熔解曲线和标准曲线分析,用所设计的引物和SYBR Green I能够特异扩增和定量检测NKG2D配体基因的表达。该方法成功检测4种肿瘤细胞NKG2D配体基因的表达。结论:建立了人NKG2D配体基因表达的实时荧光定量PCR检测方法,为进一步研究人NKG2D配体在肿瘤免疫中的作用提供了有效手段。