湖北省教育厅资助项目(2001Z1405)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 相关领域：生物学更多>>
- 多杀性巴氏杆菌C48-16电转化条件的研究被引量：1
- 2007年
- 将C48-16感受态细胞和带有标记基因的质粒DNA混和后进行电转化,通过改变脉冲电压、脉冲次数和质粒DNA浓度等电转化的重要参数,探讨了巴氏杆菌(Pasteurella multocida)C48-16的电转化条件。结果显示:最佳脉冲电压为2.4～2.5kV,最佳脉冲次数为1～2。质粒DNA浓度为58～1.16×102μg/mL转化子最多。所有转化子经标记基因PCR鉴定为阳性克隆子。此方法与常规化学转化法相比操作简单、快速且转化成功率更高。
- 熊萍萍荣俊
- 关键词：电转化脉冲
- 大肠杆菌质粒复制子在巴氏杆菌中传代的稳定性研究被引量：1
- 2007年
- 首先将多杀性巴氏杆菌谷氨酸脱氢酶的基因gdhA启动子及鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因插入pMD18-T质粒载体的多克隆位点中构建巴氏杆菌表达质粒pMD18T-PGDH-VP2,用该质粒转化禽多杀性巴氏杆菌G190E40株。为了解重组质粒在巴氏杆菌中传代的稳定性以判断其作为重组活疫苗的可能性,将转化菌种在含氨苄青霉素及血清的平板固体培养基上连续传代至第9代,肉眼观察下的菌落形态和显微镜下见到菌体形态与原始菌种无明显差异;每隔3代提取质粒DNA用限制性内切酶切割检查,酶切图谱没有改变;用扩增PGDH的引物,将提取3、6、9代质粒进行PCR检查,均可见约300bp的PGDH基因片段。结果表明,pMD18-T中的大肠杆菌复制子能在巴氏杆菌中稳定传递至少9代,这为构建能在禽巴氏杆菌和大肠杆菌中复制和表达外源基因的穿梭表达质粒打下了基础。
- 李三建荣俊
- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌穿梭载体启动子复制子
