广东省教育部产学研结合项目(2012B091100408)
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 相关作者：王妍张丽君张英黄志斌喇文军更多>>
- 相关机构：深圳职业技术学院华南理工大学吉林省中医药科学院更多>>
- 发文基金：广东省教育部产学研结合项目深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 生物反应器培养分泌重组人干扰素β1a的CHO细胞工艺的建立被引量：2
- 2013年
- 目的建立生物反应器培养分泌重组人干扰素β1a(IFNβ1a)的CHO细胞的工艺,探讨CHO细胞表达分泌IFNβ1a的反应动力学规律。方法应用15 L生物反应器悬浮微载体方式培养CHO工程细胞,比较不同时期细胞的生长形态、数量、生物活性、灌流量、葡萄糖消耗量及其他物理参数的变化规律。结果 15 L生物反应器中在初始pH 6.86～7.20,溶氧30%～70%,温度36.8～37.2℃,微载体4 g/L,罐流量6.5 L/h的条件下连续培养40 d,CHO工程细胞的密度维持在5×105个/ml之间,收获的细胞液中重组人IFNβ1a的生物活性为2.5×104～4.0×105IU/ml,葡萄糖消耗量在0.5～2.5 mg/ml之间。结论初步建立了15 L生物反应器培养分泌重组人IFNβ1a的CHO细胞的工艺,为进一步建立工业化生产工艺奠定了基础。
- 王妍张丽君黄志斌张英梁雯荻
- 关键词：生物反应器微载体中国仓鼠卵巢细胞无血清培养基
- hMSCs的成骨定向分化及与PLGA/TCP的相容性被引量：1
- 2014年
- 为验证人骨髓间充质干细胞(h MSCs)的成骨定向分化,将成骨分化培养基培养作为成骨组,完全培养基培养作为对照组进行实验.VON KASSA染色结果显示:h MSCs具有良好的成骨分化能力,钙结节明显;碱性磷酸酶(ALP)酶活性检测结果显示:成骨组的ALP酶活性明显高于对照组(P<0.01),在12 d达到峰值,随后进入平台期.为验证h MSCs和聚乳酸-羟基乙酸/磷酸三钙(PLGA/TCP)的相容性,将PLGA/TCP上培养作为立体培养组、平面上培养作为平面对照组进行相关分析,扫描电镜结果显示细胞能在材料上粘附生长并进行成骨分化,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测结果显示立体培养组的增殖率在5和7天时要明显高于平面对照组(P<0.01),ALP酶活性检测结果显示立体培养组的成骨分化效果在3、5、7天时要好于平面对照组(P<0.05),证明h MSCs和PLGA/TCP具有良好的生物相容性,两者具有结合生成组织工程骨的潜力.
- 王飞王妍程律莎谢木源张丽君梁世中
- 关键词：骨组织工程人骨髓间充质干细胞聚乳酸-羟基乙酸磷酸三钙成骨分化
- 重组人干扰素-β-1a对BALB/C小鼠硬化症的疗效评价被引量：3
- 2014年
- 目的研究本实验室表达的重组人干扰素-β-1a(IFN-β-1a)对BALB/C小鼠硬化症的疗效。方法通过皮下注射博来霉素制BALB/C小鼠硬化症模型,并设空白对照组,制模成功小鼠分为空白对照组,模型组,泼尼松龙组,进口重组人IFN-β-1a组和重组人IFN-β-1a低、中、高剂量组。上述各药物组分别皮下注射相应受试药物20次(隔日一次),空白对照组和模型组皮下注射生理盐水。取皮肤及心、肺、肾做病理组织学检查;采用碱水解法测定皮肤羟脯氨酸含量;采用免疫组化方法和RT-PCR技术检测小鼠造模处皮肤胶原蛋白-Ⅰ、胶原蛋白-Ⅲ、单核细胞趋化蛋白-1、α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子-β1、转化生长因子-β2表达。结果病理学检测结果显示,使用本实验室表达重组人IFN-β-1a注射液治疗后,皮下组织纤维化程度、肺纤维化程度明显改善,造模处皮肤羟脯氨酸的含量也有明显下降(P<0.05或P<0.01),且中、高剂量组与进口重组人IFN-β-1a效果无显著差异(P>0.05);免疫组化检测结果和RT-PCR技术检测结果均显示,重组人IFN-β-1a注射液中、高剂量组小鼠造模处皮肤上述各蛋白和mRNA的表达均显著低于模型组(P<0.05或P<0.01),且中、高剂量组与进口重组人IFN-β-1a组无显著差异(P>0.05)。结论本实验室表达的重组人IFN-β-1a可显著改善BALB/C小鼠硬化症的症状,与进口重组人IFN-β-1a效果相当。
- 张丽君张英陈献雄王妍张微微韦康田建明
- 关键词：干扰素Β多发性硬化博来霉素
- 柱层析法分离白蛋白在肝损伤大鼠中的保护效果研究被引量：1
- 2018年
- 目的研究采用柱层析工艺直接从血浆中分离的白蛋白在肝损伤大鼠中的保护效果。方法将血浆按1∶4比例稀释后,按照柱层析工艺G25-DEAE-CM-S200获得白蛋白纯品。将其分为A组(5mg/mL)、B组(2mg/mL),另取市售低温乙醇法制备的白蛋白为C组(5mg/mL)。3组按尾静脉注射方式分别对肝损伤大鼠模型进行给药,并以正常组(未造模)及模型组(造模未给药)为参照,比较给药后大鼠肝体系数差异、生理学指标表达水平及肝脏病理损伤程度,以验证2种工艺对蛋白纯度和肝损伤保护效果的影响。结果柱层析工艺最终获得终浓度5mg/mL、纯度98%以上白蛋白;A、B、C3组均能减少血清中谷丙转氨酶的含量,并提高血清中白蛋白含量(P<0.05),但A组保护效果优于B、C组。病理结果进一步证实,A组大鼠仅轻微肝纤维化,B、C组大鼠肝纤维化程度较A组严重。结论不同分离工艺得到的白蛋白,对于小鼠肝损伤程度均有一定缓解,其中以柱层析法所得白蛋白效果较显著。
- 张英林孝发王妍喇文军陈献雄
- 关键词：白蛋白肝损伤
- 重组人干扰素β1a的纯化及其理化性质被引量：1
- 2013年
- 目的纯化重组人干扰素β1a(recombinant human interferonβ1a,rhIFNβ1a),并分析其理化性质。方法应用15 L生物反应器悬浮微载体培养表达rhIFNβ1a的重组CHO细胞,细胞培养收获液经超滤浓缩、蓝胶亲和层析、脱盐和CM离子交换层析纯化后,采用水泡性口炎病毒抑制法测定rhIFNβ1a的效价;Lowry法测定蛋白含量;等电聚焦电泳法测定其等电点;SDS-PAGE和高效液相色谱法测定其纯度;Western blot法分析其免疫活性;SDS-PAGE和质谱仪测定其相对分子质量;圆二色谱法分析其二级结构。结果共纯化了3批样品,纯化的rhIFNβ1a平均蛋白浓度为0.284 0 mg/ml,平均比活可达1.06×108IU/mg,纯度达95%以上,蛋白质平均回收率为58.36%,蛋白质相对分子质量为20 445.0,等电点约为6.6,免疫活性良好,二级结构与国家标准品基本一致。结论成功纯化了rhIFNβ1a,并检测了其理化性质,为建立大规模制备rhIFNβ1a的生产工艺和制造检定规程,实现产业化奠定了基础。
- 李柳萍杨胥微黄志斌喇文军王妍
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞纯化生物活性
- RNA干扰血管紧张素原基因表达对前脂肪细胞3T3-L1分化的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:构建靶向血管紧张素原(AGT)基因的RNA干扰质粒,研究AGT基因对鼠前脂肪3T3-L1分化的影响。方法:设计靶向AGT的小分子RNA干扰片段(AGT-shRNA),以未靶向任何DNA的小分子RNA(Non-shRNA)为对照,利用载体psiRNA-U6.1/Neo构建重组表达质粒,转染鼠前脂肪细胞3T3-L1并筛选到稳定转染细胞株,RT-PCR和SDS-PAGE法分别检测AGT基因沉默效果,通过显微镜观察和脂肪细胞分化标志物检测来确定AGT基因干扰对3T3-L1细胞分化的影响。结果:成功构建AGT干扰质粒,与对照组比较,AGT基因转录水平受到显著抑制(P<0.05),AGT蛋白表达水平也仅为对照的43.86%。AGT基因干扰后3T3-L1细胞脂质水平和甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH)活性仍随分化时间延长呈上升趋势,但增长量明显低于对照组(P<0.05)。结论:RNA干扰AGT基因可明显抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化,提示脂肪组织中的肾素-血管紧张素系统(RAS)与脂肪代谢有重要关联。
- 黄志立张丽君伍丽华王妍杨汝德
- 关键词：血管紧张素原RNA干扰3T3-L1分化
