国家自然科学基金(30270078)
- 作品数：15 被引量：108H指数：8
- 相关作者：张亚历王继德白杨周殿元张兆山更多>>
- 相关机构：中国人民解放军第一军医大学南方医科大学南方医院军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省中医药管理局基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 姜黄素对肠炎大鼠肠黏膜环氧合酶-2的调控被引量：10
- 2005年
- 目的: 探索姜黄素对炎症性肠病(IBD)模型大鼠肠黏膜炎症靶点环氧合酶 2(COX 2)的影响.方法: 建立以三硝基苯磺酸 (TNBS)诱导的大鼠肠炎模型.模型大鼠给予含20g/L的姜黄素饲料喂养,药物阳性对照组给予含 5g/L柳氮磺胺吡啶(SASP)和 2g/LN 乙酰半胱氨酸 (NAC)的饲料喂养,模型组及阴性对照组给予普通饲料喂养.评价大鼠肠黏膜病理组织学评分.应用电泳迁移率改变分析法检测肠黏膜胞核NF κB活性的变化.应用Western印迹分析法检测肠黏膜细胞质IκB及COX 2的变化.应用半定量RT PCR检测COX 2mRNA的表达.结果: 姜黄素改善IBD模型大鼠病理组织学征象.姜黄素可抑制IBD模型大鼠肠黏膜胞质IκB的降解,并抑制胞核NF κB的激活,同时降低了COX 2的活性.结论: 姜黄素可预防和改善IBD鼠科模型中的实验性肠炎,调控COX 2的活性;COX 2可作为治疗炎症性肠病的药物靶点.姜黄素对治疗IBD有应用前景.
- 简燕婷王继德麦国丰张亚历赖卓胜
- 关键词：炎性肠疾病姜黄素
- Th1细胞因子(IFN-γ)在幽门螺杆菌致病中的作用被引量：2
- 2003年
- 目的 :评价Th1细胞因子IFN γ在幽门螺杆菌 (Hp)感染时对胃上皮细胞的作用。 方法 :胃上皮细胞经IFN γ处理后 ,流式细胞术测定表面MHC Ⅱ类分子的表达和Hp的黏附 ,ELISA法测定细胞因子对Hp致胃上皮细胞凋亡的影响。结果 :IFN γ可诱导胃上皮细胞表达MHCⅡ类分子 ,进而增加Hp的黏附。IFN γ本身即可诱导胃上皮细胞凋亡 ,并可促进Hp诱导的胃上皮凋亡。 结论 :Th1细胞因子IFN γ参与并加剧了Hp感染所致的胃黏膜炎症。
- 林焕建王继德张亚历白杨周殿元
- 关键词：TH1细胞因子IFN-Γ幽门螺杆菌致病
- 表达幽门螺杆菌粘附素保守区的减毒鼠伤寒沙门菌免疫治疗作用的研究
- 2004年
- 探讨表达幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)粘附素保守区 (AB)的减毒鼠伤寒沙门菌X4 0 72 (pYA2 4 8 AB)的免疫治疗效果 ,以及可能的免疫治疗机制 ,以确定X4 0 72 (pYA2 4 8 AB)在Hp疫苗研制中的应用价值 .建立Hp感染小鼠模型 ,在该模型中评价X4 0 72 (pYA2 4 8 AB)治疗Hp感染的效果 ,运用细菌培养法观察Hp根除率及定植量的改变 ,流式细胞术分析免疫后小鼠脾细胞亚型 ,IL 2和IL 4细胞依赖株的细胞测活法检测细胞因子 ,ELISA法检测小鼠血清及肠液中抗AB抗体产生情况 .结果表明 ,免疫治疗后疫苗治疗组根除率为 5 3 3% ,显著高于X4 0 72 (pYA2 4 8)和PBS对照组 (P <0 0 1 ) .未根除Hp的小鼠 ,疫苗治疗组Hp的定植密度明显低于其他两组 (P <0 0 1 ) .应用流式细胞仪分析免疫小鼠脾CD4 + /CD8+ T淋巴细胞的比值时 ,发现疫苗治疗组和鼠伤寒菌对照组的比值均显著高于PBS对照组 (P <0 0 5 ) ,而疫苗治疗组的比值又显著高于鼠伤寒菌对照组 (P <0 0 5 ) .进一步对细胞因子进行分析发现 ,与PBS对照组相比免疫治疗组和鼠伤寒菌对照组IL 2和IL 4明显升高(P <0 0 5 ) .同时 ,免疫治疗组与鼠伤寒菌对照组相比 ,IL 4增高明显 (P <0 0 5 ) .针对AB的抗体测定结果发现 。
- 白杨陈烨王继德唱韶红张兆山周殿元亚历
- 关键词：幽门螺杆菌减毒鼠伤寒沙门菌治疗性疫苗
- 表达幽门螺杆菌黏附素保守区的减毒鼠伤寒沙门氏菌株的构建被引量：9
- 2003年
- 为构建表达幽门螺杆菌 (Hp)黏附素保守区 (AB)的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗 ,采用缺失腺苷酸环化酶基因 (Δcya)、环腺苷酸受体蛋白基因 (Δcrp)以及天冬氨酸 β 半醛脱氢酶基因 (Δasd)的鼠伤寒沙门菌 (X40 72 )作为宿主 ,将编码AB的基因插入Asd+ 的组成型表达载体pYA2 48,通过两次转化引入宿主菌 ,构建了表达AB基因平衡致死的减毒鼠伤寒沙门重组菌X40 72 (pYA2 48 AB) ,采用桥联法ELISA测定X40 72 (pYA2 48 AB)培养上清液和裂解上清液中AB的抗原性 ,参照Meacock叙述的方法及重组菌生长曲线的测定来确定重组菌株的稳定性 ,通过C5 7BL 6小鼠口服测定半致死量来确定重组菌的安全性。成功构建了表达AB的减毒鼠伤寒沙门菌重组菌株S .typhimuriumX40 72 (pYA2 48 AB) ,桥联法ELISA测定表明重组菌X40 72 (pYA2 48 AB)培养上清中AB的含量高于菌体裂解液 ,重组菌pYA2 48 AB在没有选择压力的情况下培养 10 0代 ,随机挑选的重组菌全部都能生长 ,且在ELISA测定AB抗原时均显阳性。重组菌的生长曲线测定表明 ,X40 72 (pYA2 48)和X40 72 (pYA2 48 AB)的生长状态基本一致 ;口服重组菌株X40 72 (pYA2 48 AB) 1 0× 10 1 0 cfu .3 0d后 ,C5 7BL 6存活率仍为 10 0 %。
- 白杨王继德张兆山张亚历
- 关键词：幽门螺杆菌鼠伤寒沙门氏菌
- 姜黄素对肠炎大鼠肠黏膜基质金属蛋白酶-9的调控被引量：17
- 2005年
- 目的:探索姜黄素对炎症性肠病(IBD)模型大鼠肠黏膜炎症靶点基质金属蛋白酶(MMP)-9的影响.方法:建立以三硝基苯磺酸诱导的大鼠IBD模型.模型大鼠给予含20g/L姜黄素的饲料喂养,药物对照组给予含2g/LN乙酰半胱氨酸和5g/L柳氮磺胺吡啶的饲料喂养,模型组及正常对照组给予普通饲料喂养.评价肠炎大鼠死亡率及肠黏膜病理组织学评分.电泳迁移率改变分析法检测肠黏膜胞核NFκB活性的变化.应用Western印迹分析法检测肠黏膜细胞质IκB.半定量RTPCR检测MMP9mRNA的表达.结果:姜黄素可降低IBD模型大鼠死亡率及改善肠黏膜病理组织学症状.姜黄素可抑制IBD模型大鼠肠黏膜胞质IκB的降解并抑制胞核NF-κB的激活,同时降低MMP-9的表达.结论:姜黄素可预防和改善IBD鼠科模型中的实验性肠炎,调控MMP9的表达;MMP9可作为观察抗肠炎药物药效的指标之一,姜黄素对治疗IBD有应用前景.
- 麦国丰简燕婷杨玉捷崔海宏张亚历
- 关键词：炎性肠疾病姜黄素MMP-9
- 重组幽门螺杆菌过氧化氢酶对结肠粘膜上皮细胞氧化应激的影响被引量：7
- 2004年
- 目的探讨重组幽门螺杆菌过氧化氢酶(rHpCAT)对大鼠结肠粘膜上皮细胞氧化应激的影响。方法在分离培养正常大鼠结肠粘膜上皮细胞的基础上,利用FeSO4+H2O2反应产生羟自由基攻击制备结肠粘膜细胞氧化损伤模型,同时预先加入rHpCAT并观察损伤减轻程度。实验设正常对照组、模型对照组、5-氨基水杨酸给药组(0.1 mmol/L)、重组幽门螺杆菌过氧化氢酶给药组(1×105、1×106、1×107 U/kg·b.w.)。培养一定时间后,取上清测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA) 和髓过氧化物酶(MPO)的活性进行测定,并同时测定上述各组谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果模型组大鼠结肠粘膜上皮细胞MDA、LDH和MPO水平增高,CAT、GSH-Px和SOD含量减少。不同单位rHpCAT呈剂量依赖性的减少LDH释放,抑制MDA和MPO的形成,而使CAT、GSH-Px及SOD恢复到正常水平。结论重组幽门螺杆菌过氧化氢酶对大鼠结肠粘膜氧化损伤具有保护作用。
- 武金宝王继德王群英吕永慧徐俊叶方鹏南清振李良仁任玥欣张亚历
- 关键词：结肠炎氧化性应激氧自由基
- 幽门螺杆菌AlpA基因中四种黏附素基因保守区的克隆、表达、纯化及鉴定被引量：12
- 2002年
- 幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)感染是慢性活动性胃炎和消化性溃疡的主要病因 ,与胃腺癌、胃黏膜相关淋巴样组织 (MALT)淋巴瘤的发生亦密切相关 .鉴于Hp已证实的四种粘附素保守区 (AB)是外膜蛋白 (OMP)和膜孔素 (porin)样成分 ,而外膜蛋白和膜孔素样成分是优秀的疫苗候选抗原 .用PCR技术扩增AB基因 ,将其定向插入 pET 2 2b (+)载体 ,在BL2 1(DE3)大肠杆菌中表达 .测序显示AB基因长 5 88bp ,编码 195个氨基酸 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶扫描分析 ,AB基因表达的蛋白质分子质量约为 2 2 5ku ,其重组蛋白质表达量占菌体总蛋白质的 2 9% ,表达产物经亲和层析纯化后蛋白质纯度达 96 % .经免疫印迹证实该重组蛋白可以被AlpA免疫兔血清所识别 .
- 白杨但汉雷王继德张兆山S.ODENBREIT周殿元张亚历
- 关键词：幽门螺杆菌克隆纯化
- 幽门螺杆菌粘附素AlpA基因克隆、表达及免疫原性研究被引量：8
- 2003年
- 目的 构建表达幽门螺杆菌 (Hp)黏附素AlpA的候选菌株并研究其免疫原性。 方法 利用PCR技术扩增粘附素AlpA基因 ,将其定向插入 pET 2 2b(+)载体 ,在BL2 1(DE3)大肠杆菌中表达并通过免疫印迹实验研究其免疫原性。结果 克隆的粘附素AlpA基因序列与基因库公布的基本一致 ,粘附素AlpA重组蛋白表达量占菌体总蛋白的 31.9% ,经免疫印迹证实该重组蛋白可被AlpA免疫兔血清和Hp感染患者血清所识别。 结论 AlpA克隆、高效表达及其免疫原性的初步证实 ,为Hp基因工程疫苗的研制和粘附机制的研究打下了基础。
- 白杨陈烨王继德杨云生张兆山Odenbreit S周殿元张亚历
- 关键词：幽门螺杆菌粘附素免疫原性
- 幽门螺杆菌重组蛋白脂质体疫苗免疫保护作用的动物实验研究被引量：3
- 2006年
- 探讨幽门螺杆菌重组蛋白脂质体疫苗的免疫预防作用及可能的免疫机制.用逆向蒸发法制备以卵磷脂和胆固醇为膜组分包裹的重组蛋白和/无免疫佐剂的口服疫苗,并用透射电镜测定其粒径.BALB/c小鼠分为6组,分别通过灌胃方法给予PBS、空白脂质体、UreB重组蛋白+CT、脂质体包裹UreB重组蛋白、脂质体包裹UreB重组蛋白和CT、脂质体包裹(UreB+Kat+CT),每周1次共4次,末次攻击2周再用活幽门螺杆菌(Hp)攻击3次,5周后处死小鼠,行胃组织快速尿素酶试验、Hp的定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分.RT-PCR检测小鼠脾淋巴细胞中γ-干扰素(INF-γ)和白细胞介素-4(IL-4)表达.脂质体疫苗电镜下负染,显示粒径为(0.7±0.2)μm.PBS组、空白脂质体组、UreB重组蛋白+CT组、脂质体包裹UreB重组蛋白组、脂质体包裹UreB重组蛋白和CT组、脂质体包裹(UreB+Kat+CT)组的免疫保护率分别为0(0/11)、0(0/11)、58.3%(7/12)、54.5%(6/11)、63.6%(7/11)、75.0%(9/12),UreB重组蛋白+CT组免疫保护率与脂质体包裹UreB重组蛋白组比较无显著性差异(P>0.05),脂质体包裹UreB重组蛋白+CT组免疫保护率与脂质体包裹(UreB+Kat+CT)组比较有显著性差异(P<0.05).各疫苗组Hp定植评分均明显低于PBS和脂质体对照组(P<0.01),且UreB+Kat双价疫苗组较三个单价疫苗组比较也有显著性差异(P<0.05).疫苗组不仅能降低Hp的定植,而且能减轻Hp造成的小鼠胃黏膜的局部慢性炎症反应(P<0.05),但各疫苗组间比较未见显著性差异(P>0.05).Hp攻击后,与对照组比较,各疫苗组脾淋巴细胞INF-γmRNA水平较低(P<0.05),而IL-4mRNA水平则较高(P<0.05),各疫苗组间比较未见显著性差异(P>0.05).研究表明,在小鼠Hp感染模型中脂质体能部分代替霍乱毒素的免疫佐剂作用,在Hp攻击后,未经免疫小鼠体内诱导以Th1为主应答,免疫小鼠体内则诱导以Th2为主的免疫应答.
- 黄文李兆申白杨王继德张亚历周殿元
- 关键词：幽门螺杆菌尿素酶B亚单位过氧化氢酶
- 幽门螺杆菌粘附素基因babA_2的克隆及免疫应答的初步研究被引量：4
- 2003年
- 白杨王继德林焕建张兆山张亚历
- 关键词：幽门螺杆菌BABA2克隆免疫应答疫苗
