浙江省自然科学基金(Y205093)
- 作品数：6 被引量：15H指数：2
- 相关作者：黄学锋朱洪波何超陈琳琳毛伟芳更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属邵逸夫医院南京军区杭州疗养院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结肠癌细胞获得性5氟尿嘧啶耐药的机制研究被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨结肠癌细胞获得性5氟尿嘧啶耐药的机制。方法:建立5-FU耐药的结肠癌细胞,通过免疫印迹法检测多种耐药相关蛋白的表达,分析耐药的可能机制。结果:反复用5-FU处理结肠癌DLD1和DLD1-TRAIL/R细胞,得到5-FU耐药的DLD1-5-FU/R和DLD1-TF/R细胞,进一步研究发现,5-FU不能诱导耐药细胞发生S期停滞和DNA损伤。接着发现耐药细胞中有过表达的Bik、Bcl-Xs和Bcl-XL蛋白,而DLD1亲代细胞过表达Bcl-XL后,能够部分抵抗5-FU诱导的凋亡,但仍不能耐受5-FU诱导的S期停滞和DNA损伤。结论:过表达的Bcl-XL蛋白对结肠癌细胞获得性5-FU耐药具有一定作用,但过表达Bcl-XL不影响5-FU诱导的DNA损伤和细胞周期的改变,这提示结肠癌获得性5-FU耐药还存在着Bcl-XL之外的其它机制。
- 朱玉萍何超朱洪波毛伟芳黄学锋
- 关键词：氟尿嘧啶结肠肿瘤
- 蛋白酶体抑制剂MG-132逆转人结肠癌细胞获得性TRAIL耐药被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨蛋白酶体抑制剂MG-132逆转人结肠癌细胞获得性TRAIL耐药的作用及其可能的机制。方法:在MG-132和TRAIL蛋白联合处理获得性TRAIL耐药的人结肠癌细胞DLD1-TRAIL/R后,MTT法检测细胞的存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Westernblotting检测细胞中各种凋亡相关蛋白的表达和JNK激酶的磷酸化水平。结果:MG-132联合TRAIL蛋白处理DLD1-TRAIL/R细胞后,其细胞存活率明显下降(P<0.01),而细胞凋亡率则明显增加(P<0.01)。Westernblotting检测显示,联合处理后DLD1-TRAIL/R细胞中各种凋亡信号分子包括caspase-8、caspase-9、caspase-3、Bid和PARP蛋白均明显活化,线粒体中细胞色素C和Smac蛋白大量释放;进一步的Westernblotting检测显示,死亡受体DR5和凋亡诱导蛋白Bik的表达水平明显增高,而其他凋亡信号分子包括DR4、Bax、Bak、Bcl-XL、XIAP和Survivin等则无明显改变;检测结果还显示,MG-132能诱导JNK激酶发生磷酸化,使用JNK激酶抑制剂SP600125能够阻断MG-132诱导的DR5表达,但不影响Bik的表达,并且不能减弱MG-132和TRAIL蛋白联合处理对DLD1-TRAIL/R细胞的致凋亡效应(P<0.05)。结论:蛋白酶体抑制剂MG-132能逆转人结肠癌细胞DLD1-TRAIL/R的获得性TRAIL耐药,其机制可能与Bik蛋白上调后启动线粒体凋亡途径有关,与JNK通路激活无关。
- 胡静姿朱洪波何超劳伟峰黄学锋
- 关键词：蛋白酶体抑制剂MG-132TRAIL耐药
- Bcl-XL小分子干扰RNA逆转人结肠癌获得性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的耐药被引量：7
- 2008年
- 目的探讨Bcl-XL小分子干扰RNA（siRNA）在逆转人结肠癌细胞获得性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）耐药中的作用。方法以Bcl-XL siRNA转染获得性TRAIL耐药的人结肠癌DLD1-TRAIL／R细胞24h，并用TRAIL蛋白处理，通过细胞计数和流式细胞仪检测细胞的存活率，并通过Western blot法检测各种凋亡相关蛋白的活化情况。结果Bcl-XL siRNA能有效下调DLD1-TRAIL／R细胞中Bcl-XL蛋白的表达水平，并且能够有效地逆转其对TRAIL蛋白的耐药。DLDl-TRAIL／R细胞经过Bcl-XLsiRNA和TRAIL蛋白共同处理2h后，其细胞凋亡率〉50％；共同处理4h后，其细胞存活率〈40％；而对照组和TRAIL蛋白处理组的细胞凋亡率和生存率无明显变化（P〈0．05）。Western blot法检测结果表明，经Bcl-XL siRNA与TRAIL蛋白联合处理后，DLDl-TRAIL／R细胞中caspase-8、caspase-9、Bid、caspase-3以及多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶（PARP）均明显活化，细胞色素C的释放显著增加。结论Bcl-XL siRNA能够有效逆转结肠癌细胞获得性TRAIL耐药，这将为治疗肿瘤耐药提供一种新的思路。
- 朱洪波黄学锋胡静姿周玮陈薇陈琳琳何超
- 关键词：BCL-XL小分子干扰RNA耐药
- 结肠癌TRAIL耐药细胞株的建立及其耐药机制的初步研究被引量：1
- 2006年
- 背景与目的以人结肠癌DLD1细胞株为载体,探讨恶性肿瘤获得性TRAIL基因耐药的可能机制。材料与方法用重组腺病毒介导的TRAIL基因(Ad/gTRAIL)反复处理人结肠癌DLD1细胞,得到耐药细胞群DLD1-TRAIL/R。通过MTT比色法和蛋白电泳,检测耐药细胞对Ad/gTRAIL杀伤作用的敏感性及其凋亡通路中信号分子的表达情况,分析其获得性耐药的可能机制。结果DLD1-TRAIL/R细胞对Ad/gTRAIL和重组TRAIL蛋白处理耐药,但对腺病毒介导的Bax基因处理仍然敏感。耐药细胞内Bcl-XL的表达明显升高,caspase-8的表达显著下降,未见明显的caspase-8活性裂解形式。结论人结肠癌DLD1细胞株经Ad/gTRAIL反复处理后产生特异性针对TRAIL基因的耐药,其发生机制可能与Bcl-XL表达上调和caspase-8表达下调有关。
- 陈琳琳朱玉萍宋章法黄学锋毛伟芳
- 关键词：TRAIL基因治疗耐药
- Bcl-XL siRNA在TRAIL杀伤卵巢癌细胞中的增敏作用被引量：4
- 2007年
- 目的:探讨Bcl-XL siRNA在肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)杀伤卵巢癌细胞中的增敏作用。方法:用Bcl-XL siRNA转染卵巢癌SKOV3细胞,然后联合应用TRAIL蛋白处理该细胞;通过流式细胞术检测细胞的凋亡率,通过锥虫蓝染色细胞计数检测细胞存活情况,通过Western blotting检测细胞中各种凋亡相关蛋白的活化情况。结果:与对照组相比,经Bcl-XL siRNA处理后,SKOV3细胞中Bcl-XL蛋白的表达显著降低;该细胞的增殖受到明显抑制,在处理96 h后最为明显,仅为对照组的43.9%(P<0.05)。当Bcl-XL siRNA和TRAIL蛋白联合处理后,SKOV3细胞的凋亡率明显增加,达到32%以上(P<0.05),而细胞计数结果显示联合处理后SKOV3细胞的存活率显著下降,仅为对照组的37.8%(P<0.05)。Western blotting结果显示,Bcl-XL siRNA和TRAIL蛋白联合处理后凋亡相关蛋白Caspase-8、Caspase-9、Bid、Caspase-3和PARP明显活化,细胞色素C的释放也显著增加。结论:Bcl-XL siRNA能显著加强TRAIL蛋白对卵巢癌细胞的杀伤作用,其作用机制可能与激活多种凋亡信号蛋白有关。Bcl-XL siRNA可能成为逆转卵巢癌TRAIL耐药的治疗措施。
- 胡静姿朱洪波黄学锋何超
- 关键词：BCL-XLSIRNA卵巢癌细胞凋亡
- 蛋白酶体抑制剂硼替佐米逆转结肠癌获得性TRAIL耐药的研究
- 2010年
- 目的探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米在逆转人结肠癌细胞获得性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)耐药中的作用及机制。方法在硼替佐米和TRAIL蛋白联合处理DLD1-TRAIL/R细胞后,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞的存活率,并通过免疫印迹法检测各种凋亡相关蛋白的表达情况。通过siRNA转染明确目的基因在硼替佐米逆转结肠癌细胞获得性TRAIL耐药中的作用。结果硼替佐米联合TRAIL蛋白处理DLD1-TRAIL/R细胞后,其细胞存活率明显下降,而细胞凋亡率则明显增加(P<0.01)。Western免疫印迹结果显示,联合处理后DLD1-TRAIL/R细胞中各种凋亡信号分子包括caspase-8,caspase-9,caspase-3,Bid,PARP蛋白均明显活化,线粒体中细胞色素C和Smac蛋白大量释放。进一步的Western免疫印迹法结果显示,凋亡诱导蛋白Bik的表达水平明显增高,而其他凋亡信号分子包括其他Bcl-2家族成员以及XIAP和Survivin等则无明显改变。通过转染siRNA阻断Bik蛋白表达后,硼替佐米介导的TRAIL增敏作用被部分抑制(P<0.05)。结论蛋白酶体抑制剂硼替佐米可以逆转人结肠癌细胞DLD1对TRAIL的获得性耐药,其机制可能与Bik蛋白蓄积有关。
- 胡静姿朱洪波何超陈琳琳黄学锋
- 关键词：蛋白酶体抑制剂硼替佐米肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体耐药
